姚淑紅 （山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局 271000）

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雞金黃色葡萄球菌的分離鑒定

姚淑紅 （山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局 271000）

本試驗(yàn)對(duì)從病雞分離到的病原進(jìn)行微生物經(jīng)細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察、鑒別培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)，結(jié)果鑒定為金黃色葡萄球菌。

雞 金黃色葡萄球菌 分離 鑒定

雞葡萄球菌病是由葡萄球菌所引起的一種傳染病，一般認(rèn)為金黃色葡萄球菌是主要的致病菌，該病有多種類型，是養(yǎng)雞業(yè)中危害嚴(yán)重的疾病之一。2009年9月，泰安市岱岳區(qū)某雞場(chǎng)雞群陸續(xù)發(fā)病，雞群出現(xiàn)精神沉郁、呆立、拍黃綠色糞便、關(guān)節(jié)腫大，并且有的出現(xiàn)急性死亡。為確診本病特進(jìn)行了該試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

普通肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基，均按常規(guī)方法配制。微量生化發(fā)酵管、3%過(guò)氧化氫均有杭州天和微生物試劑有限公司提供。

1.2 細(xì)菌的分離鑒定

1.2.1 病料來(lái)源 病例來(lái)源于泰安市岱岳區(qū)某雞場(chǎng)急性死亡的肉雞和同場(chǎng)發(fā)病雞。

1.2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定 無(wú)菌取病料接種到5%綿羊血瓊脂培養(yǎng)板中，經(jīng)37℃培養(yǎng)24h，觀察菌落形態(tài)、生長(zhǎng)情況和溶血現(xiàn)象。將純培養(yǎng)菌株進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。依據(jù)菌落形態(tài)和鏡檢情況，將分離純培養(yǎng)的菌株中疑似葡萄球菌屬的菌株做生化反應(yīng)，并用標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌作參照，37℃培養(yǎng)24~72h，觀察其生化特性、培養(yǎng)特性，進(jìn)一步鑒定。

1.2.3 細(xì)菌的生化鑒定 將細(xì)菌純化后，取典型單個(gè)菌落分別接種于蔗糖、麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、硝酸鹽、靛基質(zhì)、硫化氫、MR、VP生化管，37℃培養(yǎng)24h。

1.2.4 血漿凝固酶試驗(yàn) 無(wú)菌采取健康家兔血液4份，加1份滅菌的3.8%枸櫞酸鈉，3 000rpm離心10min，取上清液即血漿備用。吸取1:4生理鹽水稀釋的新鮮兔血漿0.5ml，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的分離菌株肉湯培養(yǎng)物0.5ml，振蕩搖勻，放37℃水浴培養(yǎng)，每30min觀察1次，觀察6h判斷結(jié)果。同時(shí)用已知的血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性的葡萄球菌作為對(duì)照。

1.2.5 過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 勾取少許菌落于載玻片上，滴加1滴3%過(guò)氧化氫，觀察結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

分離菌37℃培養(yǎng)24h，在普通肉湯上生長(zhǎng)迅速。剛開(kāi)始渾濁，管底有少量沉淀，輕輕振蕩，沉淀物上升，隨即消散，不產(chǎn)生菌膜。在普通瓊脂培養(yǎng)基上形成光滑、濕潤(rùn)、隆起、邊緣整齊、不透明的圓形菌落，直徑1~3mm，初呈白色，繼續(xù)培養(yǎng)變成金黃色。在血液瓊脂培養(yǎng)基上，菌落周圍可見(jiàn)明顯的溶血環(huán)。經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢，可見(jiàn)革蘭氏陽(yáng)性球菌，圓形，呈單個(gè)短鏈和葡萄串狀排列，無(wú)鞭毛，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜。

2.2 生化試驗(yàn)

細(xì)菌生化鑒定結(jié)果如表1。

表1 葡萄球菌生化鑒定結(jié)果

注：＋表示產(chǎn)酸或陽(yáng)性，－表示不產(chǎn)酸或陰性。

2.3 血漿凝固酶試驗(yàn)

陽(yáng)性菌株和待檢菌株使血漿呈膠凍狀凝固，而陰性菌株無(wú)凝固現(xiàn)象。判斷分離菌株的血漿凝固酶為陽(yáng)性。

2.4 過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)

滴加3%過(guò)氧化氫與玻片上，迅速產(chǎn)生氣泡，過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性。

3 小結(jié)和討論

根據(jù)分離菌株的形態(tài)學(xué)觀察、分離鑒別培養(yǎng)，以及生化試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)結(jié)果，確診該雞場(chǎng)雞群發(fā)病的病原為金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌廣泛分布于自然界，存在于正常皮膚、鼻咽部等，對(duì)外界環(huán)境抵抗力較強(qiáng)。該菌是一種條件性致病菌，常因氣候異常、皮膚傷口或注射疫苗等應(yīng)激因素影響，引起動(dòng)物發(fā)病。雞場(chǎng)飼養(yǎng)人員應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和無(wú)菌意識(shí)，進(jìn)出雞舍應(yīng)更衣消毒，注射疫苗或藥物時(shí)應(yīng)注意注射部位和用具的消毒，盡量減少各種應(yīng)激因素。同時(shí)應(yīng)注意飼養(yǎng)場(chǎng)的清潔衛(wèi)生，對(duì)雞舍和用具進(jìn)行定時(shí)消毒，減少疾病傳播；嚴(yán)格淘汰感染動(dòng)物，防止疾病傳播。

（2011–05–14）

S852.61+4

A

1007-1733(2011)08-0013-01