朱樓英 方遠書 余建國（浙江省金華市食品藥品檢驗所 321000 金華職業(yè)技術(shù)學院）

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實驗用兔弓形蟲病血清學調(diào)查

朱樓英①方遠書①余建國②（①浙江省金華市食品藥品檢驗所 321000 ②金華職業(yè)技術(shù)學院）

本試驗通過免疫膠體金試紙對實驗用50只兔血樣進行檢測，調(diào)查弓形蟲病的感染情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，弓形蟲感染的陽性率為7%。

兔 弓形蟲 血清學

弓形蟲是一種專性細胞寄生性原蟲，具有廣泛的宿主群，并在世界范圍內(nèi)流行，引起人畜共患病[1]。愛滋病患者、移植用惡性腫瘤患者等免疫功能損傷或抑制者，弓形蟲作為一種機會感染因子，可致患者死亡[2]。弓形蟲病不但是醫(yī)學上的一種重要疾病，更是影響人類優(yōu)生優(yōu)育的一個重要生物因子。懷孕婦女感染弓形蟲，無論有無臨床癥狀，均可使約50%左右攜帶者因垂直傳播出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎及胎兒先天性缺陷，在養(yǎng)殖上，弓形蟲病也會造成重大損失[3]。

在臨床工作中以病原診斷作為弓形蟲病的診斷依據(jù)存在很大困難，故目前多采用免疫學診斷方法，敏感性高和特異性強的血清學檢測方法，能夠準確地檢測出陽性兔和評定兔群的感染率，但常用的IHA及ELISA等方法操作煩瑣[4]，只停留在實驗室階段，對基層的實驗動物中心弓形蟲病的檢測帶來諸多障礙。本研究制備的試紙條，可用于快速簡便的診斷，以彌補基層檢驗設(shè)備的缺乏和技術(shù)力量的不足。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗血清 來自某實驗動物中心的實驗用兔。隨機選取50只體重接近的實驗用兔，先對采血部位進行消毒，用1次性注射器采血2ml于離心管中，室溫靜置，待血清分離或37℃1h后，30000r/min離心5min。移取上層血清至另一離心管中，編號，作為待檢血清，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試驗儀器 針頭、離心機、微量加樣器、弓形蟲試紙條等由金華職業(yè)技術(shù)學院動物醫(yī)學研究所提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 IHA(反向間接血凝)法 反應(yīng)在96孔V型微量有機玻璃板上進行，每塊反應(yīng)板設(shè)陰性血清、陽性血清、稀釋液對照孔，每孔加稀釋液25uL。在1~10排的第1孔分別加入1~10號待檢血清25uL，在第11排的第1孔加入陽性對照血清25uL，并分別倍比稀釋至第8孔。在第12排的第1孔加入陰性對照血清25uL，并分別倍比稀釋至第6孔，在第12排的第7~8孔做空白對照[5]。

凍干抗原按說明書要求稀釋，4冰箱內(nèi)靜置24h后，將稀釋抗原搖勻，每孔加25uL，然后將反應(yīng)板置于微量振蕩器上震蕩30s，于37溫箱中作用1h。在陽性對照血清滴度不低于1:1024(第5孔)、陰性對照血清除第1孔允許存在前帶現(xiàn)象(+)外，其余各孔均為(-)，稀釋液對照孔為(-)的前提下，對被檢血清進行判定。被檢血清抗體滴度達到或超過1:64判為陽性。

1.2.2 試紙條法 以稀釋液將待檢血清按(1:5)稀釋。檢測時，從加樣孔滴加2~3滴待檢血清稀釋液，同時，以標準陽性血清和陰性血清設(shè)陽性對照和陰性對照。2~5min內(nèi)觀察結(jié)果。10min后觀察結(jié)果無效。判定標準：檢測區(qū)(T帶)、質(zhì)控區(qū)(C帶)均出現(xiàn)紅色為陽性；僅質(zhì)控區(qū)(C帶)，出現(xiàn)紅色為陰性；T、C均未出現(xiàn)紅色則試紙無效。

2 結(jié)果

IHA(反向間接血凝)法檢測結(jié)果及試紙條法檢測結(jié)果(見表1)。

表1 血清學檢測結(jié)果

檢測結(jié)果提示，試驗抽取的50只兔子樣品中，弓形蟲感染的陽性率約7%，且試紙條檢測的靈敏度高于IHA，表明用于快速檢測的試紙條的作用是可以確認的。

3 討論與小結(jié)

（1）本次試驗檢出實驗用兔的弓形蟲感染率約7%，略低于周永華等報道的8.7%的結(jié)果[3]，這可能與該動物中心良好的屏障系統(tǒng)與嚴格的生物安全控制措施有關(guān)，但陽性兔的存在，依然給實驗用兔的疫病控制帶來諸多障礙。（2）本次檢測沒有考慮抗體的滴度分布，也沒有進行病原分離，病原檢測有利于呈現(xiàn)抗體檢測陽性而抗原檢測陰性的狀態(tài)，依此判斷蟲體在體內(nèi)的發(fā)育階段及數(shù)量分布。（3）弓形蟲血清學檢測方法是多樣的，免疫層析技術(shù)是新近發(fā)展起來的體外診斷技術(shù)。具有簡單快速，操作簡便，無需特殊設(shè)備等優(yōu)點。本次試驗中應(yīng)用的弓形蟲快速檢測試紙條的性能穩(wěn)定，與傳統(tǒng)方法符合率高，這對臨床應(yīng)用而言有著重要的作用，對實驗動物屏障系統(tǒng)的完善和生物安全控制有著積極的意義，可以期待在將來發(fā)揮更加重要的作用。

[1] 崔君兆. 弓形蟲病研究九十年[J]. 實用寄生蟲病雜志, 2000, 8(2): 75-78.

[2] 陳昌源. 家養(yǎng)寵物與大群弓形蟲感染情況的研究[J]. 中國人畜共患病雜志, 2001, 17(1): 76-77.

[3] 周永華, 沈林南, 吳菁等. 實驗兔弓形蟲感染情況調(diào)查[J]. 上海實驗動物科學, 1998 (1): 20.

[4] 魏梅雄, 張述義. 上海市動物弓形蟲病研究概況[J]. 中國獸醫(yī)寄生蟲病, 2001(9): 3.

[5] 張陽根. 免疫金銀染色法檢測弓形蟲抗體[J]. 上海免疫學雜志. 1996(16). 50.

項目來源：浙江省實驗動物科技項目(2009F800013)

S852.72+9

A

1007-1733(2011)08-0064-02

（2011–06–02）