焦蕊麗 徐素欣 郝桂敏 王振海 張杰英

孕婦、胎盤、胎兒三方面間功能有著復(fù)雜的關(guān)系，導(dǎo)致胎兒發(fā)育異常的母體或胎兒因素?？煞从吃谔ケP的形態(tài)、胎盤組織光鏡與電鏡的體視學(xué)上。本研究通過對胎盤絨毛在光鏡下進(jìn)行定量分析，在透射電鏡下觀察比較超微結(jié)構(gòu)，以了解體外受精-胚胎移植(IVF-ET)足月妊娠胎盤與相同孕周自然妊娠胎盤的區(qū)別，為IVF-ET圍產(chǎn)結(jié)局的研究提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 IVF-ET組:2001年9月至2010年9月經(jīng)本生殖醫(yī)學(xué)中心行IVF-ET術(shù)后足月妊娠孕婦30例，其中原因不明性不孕13例，雙側(cè)輸卵管梗阻11例，男方少、弱精6例;年齡27～35歲，平均年齡31．8歲;分娩孕周38～41周，平均38．7周(有妊娠高血壓綜合征、妊娠合并貧血、雙胎、三胎及其他慢性疾病者均除外)。對照組:同期在我院產(chǎn)科自然足月妊娠孕婦30例。2組一般資料具有可比性。

1．2 標(biāo)本采集與處理

1．2．1 胎盤娩出后，立即在胎盤母體面底板區(qū)的中間帶和中央帶不同部位隨機取3塊組織，在4%戊二醛固定液中切成1 mm3的組織塊，經(jīng)處理后，在日立H-7500型透射電鏡下觀察及拍照。

1．2．2 同時在胎盤母體面垂直取下約1 cm3的組織，立即投入4%中性甲醛溶液中固定24～48 h，常規(guī)處理后待HE染色。

1．2．3 胎盤取材后，自胎盤臍帶根部剪除臍帶稱取胎盤重量，記錄新生兒體重。計算胎盤系數(shù)(Placental coefficient)。

1．3 結(jié)果判定

1．3．1 電鏡觀察:電鏡下觀測2組胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞、微絨毛、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、毛細(xì)血管等情況。

1．3．2 病理圖像分析:請病理科醫(yī)師用北京航空航天大學(xué)圖像中心研制的真彩色病理圖像分析系統(tǒng)(版本4．0)對切片進(jìn)行單盲分析，在光鏡100×視野下觀測絨毛面密度(絨毛面積與總場面積比值);在光鏡200×視野下觀測單個末梢絨毛橫切面內(nèi)血管直徑d及絨毛直徑D，血管數(shù)n，(D、d測量時選擇較短徑線，并保持二者測量方向一致);并記算血管與絨毛橫切面積之比=d2·n·D－2，每張切片隨機選擇不同視野觀測10個絨毛后取均值。

1．4統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 10．0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，另外對胎盤重量和新生兒體重進(jìn)行線性相關(guān)分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 胎盤絨毛組織定量分析 IVF-ET組與對照組比較，不僅胎盤末梢絨毛血管數(shù)減少，血管占絨毛橫切面積比減小(P＜0．05)，而且IVF-ET組胎盤絨毛面密度降低(P ＜0．01)。見表1。

表12組胎般絨毛組織定量分析n=30，±s

表12組胎般絨毛組織定量分析n=30，±s

注:與 IVF-ET 組比較，*P ＜0．05

組別 末梢絨毛血管數(shù)(個)血管占絨毛面積比(橫切面)絨毛面密度(絨毛面積與總面積比)IVF-ET組3．4 ±1．5 0．29 ±0．16 0．37 ±0．05對照組 4．5 ±2．4* 0．34 ±0．16*0．47 ±0．06

2．2 超微結(jié)構(gòu)觀察

2．2．1 對照組胎盤絨毛的超微結(jié)構(gòu):絨毛各層結(jié)構(gòu)清晰，合體滋養(yǎng)層細(xì)胞位于絨毛淺層。具有多核，核的異染色質(zhì)粗大，胞質(zhì)中有很多大小不等大空泡，呈泡沫狀。可見較豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體。合體細(xì)胞的游離面有排列整齊的微絨毛，尖端為球形膨大，并有分支。在微絨毛之間有胞膜內(nèi)陷形成的小凹，合體細(xì)胞與細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞之間有橋粒連接(圖1)。細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞呈立方形或多邊形，位于絨毛深層，胞質(zhì)內(nèi)線粒體大而多，核內(nèi)異染色質(zhì)少而分散，電子密度低(圖2)，絨毛間質(zhì)可見豐富的毛細(xì)血管，壁薄，腔內(nèi)可見胎兒紅細(xì)胞(圖3、4)。

2．2．2 IVF-ET組胎盤絨毛的超微結(jié)構(gòu):合體滋養(yǎng)細(xì)胞游離面微絨毛疏密不均，排列紊亂，融合、變形甚至缺失(圖5)。細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體減少，體積小，游離核糖體減少(圖6)。毛細(xì)血管壁增厚，腔窄(圖7、8)，絨毛間質(zhì)纖維化，甚至發(fā)生玻璃樣變(圖9)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，嵴排列紊亂，部分或全部嵴消失，吞飲小泡數(shù)量減少。間質(zhì)內(nèi)可見膠原纖維增生，成纖維細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，高爾基復(fù)合體不發(fā)達(dá)，線粒體小而少。

圖1 對照組合體細(xì)胞的游離面有排列整齊的微絨毛(TEM×3 500)

圖5 IVF-ET組合體滋養(yǎng)細(xì)胞游離面微絨毛排列缺失(TEM×6 000)

圖2 對照組細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體大而多(TEM×2 500)

圖6 IVF－ET組細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體少(TEN×6 000)

圖3 對照組絨毛間質(zhì)可見豐富的毛細(xì)血管，壁薄，腔內(nèi)可見胎兒紅細(xì)胞(TEM×3 500)

圖7 IVF-ET組絨毛間質(zhì)毛細(xì)血管壁增厚，腔窄(TEM×3 000)

圖4 對照組絨毛間質(zhì)可見豐富的毛細(xì)血管，壁薄，腔內(nèi)可見胎兒紅細(xì)胞(HE×400)

圖8 IVF-ET組絨毛間質(zhì)毛細(xì)血管壁增厚，腔窄(HE×400)

圖9 IVF-ET組胎盤絨毛毛細(xì)血管壁發(fā)生玻璃樣變(HE×200)

2．3 2組新生兒體重及胎盤重量結(jié)果 IVF-ET組胎盤重量和新生兒體重與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)，新生兒出生體重與胎盤重量呈高度相關(guān)性(r=0．709，P ＜0．01)。見表2。過程中研究發(fā)現(xiàn)在促超排卵藥物作用后，血清EGFs(所有能與EGFR結(jié)合的物質(zhì)含量的總和，主要包括EGF和TGF-α)水平顯著升高(P＜0．01)，其在卵泡液內(nèi)的水平明顯高于同期血清水平(P＜0．05)，表明促性腺激素可能存在刺激EGFs分泌的作用。

研究表明，IUGR胎盤上EGFR的表達(dá)較正常對照組明顯增加，IUGR胎盤末梢絨毛血管數(shù)及血管與絨毛橫面積之比均明顯減少，提示IUGR胎盤上EGFR的表達(dá)增加可能與其胎盤絨毛發(fā)育不良有關(guān)［7，8］。

焦蕊麗等［9］曾報道EGFR在IVF-ET后足月妊娠組胎盤中表達(dá)高于對照組(P＜0．05)。故而我們推測:可能由于COH藥物作用或黃體支持中母體體內(nèi)超生理劑量孕酮的作用使IVF-ET組孕婦體內(nèi)激素或細(xì)胞因子的平衡紊亂，導(dǎo)致EGFR在IVF-ET后足月妊娠組胎盤中表達(dá)高于對照組。

表22組新生兒體重及胎盤重量比較n=30，±s

組別 胎盤重量(g) 新生兒體重(g) 胎盤系數(shù)(F/P)IVF-ET組542 ±152 3 265 ±519 6．3 ±1．3對照組477 ±69 3 133 ±295 6．6 ±0．7

3 討論

3．1 正常胎盤結(jié)構(gòu)與功能 胎盤是母體和胎兒之間進(jìn)行物質(zhì)交換的重要器官，它的功能包括氣體交換、營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)、排除胎兒代謝產(chǎn)物、合成防御等。眾所周知，胎盤的物質(zhì)交換主要部位在胎盤的血管合體膜(vasn/osyncycial mcmberane，VSM)，即由合體細(xì)胞、合體細(xì)胞基底膜、絨毛間質(zhì)、毛細(xì)血管基底膜及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞五層組織所構(gòu)成薄膜，厚度不到2 μm，此膜總交換面積的大小及其功能正常與否，對胎兒在宮內(nèi)生長發(fā)育十分重要［1］。正常足月胎盤中約88%的絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞表面，均有發(fā)育良好的微絨毛覆蓋［2］。微絨毛的出現(xiàn)，增加了滋養(yǎng)細(xì)胞與母血接觸的表面積，促進(jìn)了母兒間的物質(zhì)交換。正常妊娠時，隨著孕周進(jìn)展，子宮胎盤發(fā)生一系列的生理性改變，胎盤絨毛直徑明顯變小，這樣明顯增加了母-胎間血氧交換的絨毛總面積，絨毛內(nèi)血管充血擴(kuò)張，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞稀少甚至缺如，合體滋養(yǎng)細(xì)胞成為晚孕絨毛的主要結(jié)構(gòu)和功能細(xì)胞，聚集形成多細(xì)胞結(jié)節(jié)，這種結(jié)構(gòu)有利于母-胎間的氣體交換。

3．2 IVF-ET胎盤形態(tài)學(xué)變化及意義 本研究中病理真彩色圖像分析:與對照組比較，IVF-ET組胎盤末梢絨毛內(nèi)不僅毛細(xì)血管數(shù)少，血管占絨毛橫切面積減少，而且絨毛面密度也減小;此外，可見IVF-ET組胎盤絨毛毛細(xì)血管壁增厚，腔窄，絨毛間質(zhì)纖維化，甚至發(fā)生玻璃樣變。提示IVF-ET組胎盤絨毛較正常組胎盤絨毛存在某種程度增生的表現(xiàn)。

我們在電鏡下發(fā)現(xiàn):與對照組相比較，IVF-ET組胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞表面游離微絨毛疏密不均、變形，甚至缺失。細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體及游離核糖體減少，毛細(xì)血管壁發(fā)生不同程度增厚，絨毛間質(zhì)發(fā)生纖維化。以上絨毛結(jié)構(gòu)的變化可造成VSM厚度增加，母-兒間有效交換面積減少，影響營養(yǎng)物質(zhì)的攝取和轉(zhuǎn)運［3－5］。

研究發(fā)現(xiàn)在黃體期孕激素可促進(jìn)表皮生長因子受體(EGFR)mRNA的過度表達(dá)，魏志新等［6］在控制性超促排卵(COH)

本研究IVF-ET組胎盤重量與新生兒體重與對照組比較均稍重，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0．05)，這與鐘依平等［10］報道結(jié)果一致。故而我們推測:(1)該研究可能由于樣本小，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05);(2)由于新生兒體重受多種因素影響，如:孕婦營養(yǎng)、胎盤功能、病毒感染等，IVF-ET妊娠胎兒為珍貴兒，被歸為高危妊娠，受到產(chǎn)科醫(yī)師及家人的高度重視，孕婦受到的圍產(chǎn)保健及營養(yǎng)可能較自然妊娠的胎兒更好，所以盡管2組胎盤絨毛結(jié)構(gòu)有差異，但胎盤重量與新生兒體重比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。以上結(jié)論為IVF-ET圍產(chǎn)結(jié)局的研究提供了理論依據(jù)和新的思路。

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