李向軍，范文成，李奉勤，韓月芝，葉曉紅

（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035）

工藝

丹參有效成分提取的研究

李向軍，范文成*，李奉勤，韓月芝，葉曉紅

（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035）

目的：確定丹參藥材的最佳提取工藝。方法：以丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量轉(zhuǎn)移率為綜合考察指標(biāo)，用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對(duì)丹參提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果：丹參中脂溶性成分的最佳提取工藝為將丹參飲片用10倍量95%乙醇提取2 h，提取液在40℃濃縮至規(guī)定量；丹參中水溶性成分的最佳提取工藝為用8倍量50%乙醇提取3次，第1次2 h，其余2次各1 h，將3次提取液在40℃濃縮至規(guī)定量；對(duì)兩種工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)得出最佳提取工藝為先用95%乙醇8倍量提取2 h，殘?jiān)?倍量50%乙醇提取2次，第1次2 h，第2次1 h，提取液分別在40℃濃縮至規(guī)定密度。結(jié)論：此工藝不僅能夠充分提取丹參中的有效成分，減少在提取過(guò)程中有效成分的破壞，而且可以更好地發(fā)揮藥物療效，保證質(zhì)量。

丹參；提取工藝；正交設(shè)計(jì)；丹參酮ⅡA；丹酚酸B

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖。具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰的功能。用于胸痹心痛，脘腹脅痛，癥瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛［1］。丹參的化學(xué)成分主要含水溶性的酚酸類成分丹酚酸A、B、C、D、E，丹參素，原兒茶醛等，以及脂溶性的菲醌類成分丹參酮ⅡA、丹參酮B、丹參酮、隱丹參酮等，脂溶性成分具有抗菌、抗炎，改善血液循環(huán)，保護(hù)心臟以及抗腫瘤等作用；水溶性成分則具有抗氧化、抗凝抗血栓、抗心肌缺血及調(diào)血脂等作用［2］，所以丹參的有效成分是兩類成分，而非一類成分起作用。然而，有文獻(xiàn)報(bào)道［3］，大部分含丹參藥材的制劑用單一提取方法，控制其中的一種成分，不能客觀真實(shí)反映藥品質(zhì)量。本文通過(guò)優(yōu)選丹參的提取工藝，充分地將丹參中水、脂兩種成分提取出來(lái)，確保藥品療效。

1 儀器與藥材

LC-10ATvp高效液相色譜儀（日本島津公司），Rotavapor R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（香港步騏有限公司），AG285電子天平（上海梅特勒－托利多儀器有限公司）；丹參酮ⅡA對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110766-200518），丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111562-200908），化學(xué)試劑：甲醇為色譜純，其余為分析純；丹參藥材采購(gòu)于安國(guó)中藥材市場(chǎng)，經(jīng)過(guò)本公司質(zhì)控部王振江鑒定符合 《中國(guó)藥典》2010版一部丹參規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1.1 丹參提取的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)影響丹參的提取因素，選取乙醇濃度（A）、提取次數(shù)（B）、乙醇用量（C）、濃縮溫度（D）作為考察因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，以丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì) L9（34）正交試驗(yàn)，見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

2.1.2 丹參的提取 取丹參藥材18份，每份50 g，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行提取，最后濃縮成相對(duì)密度為1.10的濃縮膏，每個(gè)試驗(yàn)平行2次，取平均值。

2.2 方法

2.2.1 丹參酮ⅡA含量測(cè)定方法［1］

2.2.1.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇 －水（75∶25）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。理論塔板數(shù)按丹參酮IIA峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮IIA對(duì)照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含丹參酮IIA16μg）。

2.2.1.3 供試品溶液的制備 取本品適量（約相當(dāng)于原藥材0.3 g），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲15min，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.1.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算，即得（做平行樣取平均值）。

2.2.2 丹酚酸B含量測(cè)定方法［1］

2.2.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%甲醇制成每1 mL中含0.14 mg的溶液，即得。

2.2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量（約相當(dāng)于原藥材0.2 g），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，稱定重量，超聲15 min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算即得（做平行樣取平均值）。

2.2.3 結(jié)果 按 《中國(guó)藥典》2010版一部丹參含量測(cè)定方法測(cè)定丹參原藥材含量，以丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3、表4。

由表2直觀分析可知，各因素對(duì)丹參酮ⅡA影響程度依次為A＞D＞C＞B，各因素對(duì)丹酚酸B影響程度依次為A＞D＞B＞C。通過(guò)表3可知，因素A對(duì)丹參酮ⅡA轉(zhuǎn)移率影響極其顯著，因素C、D影響不大，其最佳工藝為A1B3C3D3；由表4可知，因素A對(duì)丹酚酸B轉(zhuǎn)移率影響也非常顯著，因素B、D有一定影響，其最佳工藝為A2B1C2D3。

由此可見(jiàn)，丹參酮ⅡA用水提取，轉(zhuǎn)移率非常低，用95%乙醇轉(zhuǎn)移率可達(dá)90%以上；而丹酚酸B用95%乙醇幾乎提不出來(lái)，在50%乙醇中轉(zhuǎn)移率能達(dá)到30%；根據(jù)二者的性質(zhì)，再結(jié)合大生產(chǎn)實(shí)際，最終將丹參提取工藝確定為：先用95%乙醇8倍量提取2 h，殘?jiān)?倍量50%乙醇提取2次，第1次2 h，第2次1 h，提取液分別在40℃濃縮至規(guī)定密度。

表2 正交試驗(yàn)及結(jié)果

表3 丹參酮ⅡA方差分析表

表4 丹酚酸B方差分析表

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

按上述已確定的工藝條件安排5批驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

從驗(yàn)證結(jié)果可以看出：丹參酮ⅡA轉(zhuǎn)移率均達(dá)到了90%以上，提取比較完全；丹酚酸B在50%乙醇溶液中轉(zhuǎn)移率達(dá)到了30%。

表5 丹參有效成分轉(zhuǎn)移率驗(yàn)證試驗(yàn)/%

3 討論

通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)丹參藥材提取工藝進(jìn)行了研究，以脂溶性成分（丹參酮ⅡA）和水溶性成分（丹酚酸B）的含量為綜合考察指標(biāo)，確定了丹參最佳提取工藝為：先用95%乙醇8倍量提取2 h，殘?jiān)?倍量50%乙醇提取2次，第1次2 h，第2次1 h，提取液分別在40℃濃縮至規(guī)定密度。

在提取丹參中丹參酮ⅡA和丹酚酸B時(shí)，溶劑濃度對(duì)結(jié)果影響非常顯著，濃縮溫度也有一定影響，大生產(chǎn)中一定要嚴(yán)格控制，否則，可能造成丹參酮IIA和丹酚酸B提取不完全或破壞。

丹參水溶性成分丹酚酸B含量較高，其藥理作用與丹參素、原兒茶醛等相似，而活性更強(qiáng)［3］，但穩(wěn)定性較差，故在制劑中控制丹酚酸的含量比控制原兒茶醛更有意義。

中藥制劑成分復(fù)雜，其治療作用是通過(guò)多種成分綜合起作用，對(duì)于性質(zhì)不同成分的提取，如果僅以一種成分作為控制指標(biāo)，勢(shì)必會(huì)影響藥物的療效。所以，只有選擇合適的工藝，將藥物有效成分全部提取，才能充分發(fā)揮治療效果。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

［2］杜冠華，張均田.丹參現(xiàn)代研究概況與進(jìn)展（續(xù)一）［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，23（6）：355.

［3］杜冠華，張均田.丹酚酸A對(duì)小鼠腦缺血再灌注致學(xué)習(xí)記憶功能障礙的改善作用及作用機(jī)制［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30（3）：184.

Study on Extraction Active Ingredients of Salvia Miltiorrhiza Bge.

LIXiang-jun，F(xiàn)ANWen-cheng，LIFeng-qin，HAN Yue-zhi，YE Xiao-hong
（Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co．Ltd．，Shijiazhuang 050035，China）

Objective：To determine the best extraction process forSalvia miltiorrhizaBge..Methods：The content shift rates of tanshinone IIAand salvianolic acid B，as the evaluating indictors in orthogonal experimental design，were applied to value the process.Results：The optimum extraction process for the fat－soluble ingredientswas with 10 times 95%ethanol for 2 hours，and the extraction was enriched at40℃；the optimum extraction process for water-soluble ingredientswaswith 8 times50%ethanol for three times，2 hours for the first，and 1 hour for the second and third respectively，then the solution was concentrated to the requirement at40℃.According to the need ofmanufacture，the optimum extraction process was determined with 8 times 95%ethanol for 2 hours，and，the residue was with 8 times 50%ethanol for two times with 2 and 1 hour respectively.The extractions were concentrated at 40℃.Conclusion：The active ingredientswere extracted fully with this process and were not damaged，for assure quality.

Salvia miltiorrhizaBge.；Extraction process；Orthogonal design；TanshinoneⅡA；Salvianolic acid B

*范文成，Tel：（0311）85901723，E-mail：fwwc163＠yahoo.com.cn

2010-11-24）