孔德憲，姜海，劉育強，張?zhí)乩?，段文靜，盧樹杰，*

（1.神威藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 051430；2.河北省中藥注射劑工程技術(shù)研究中心，河北 石家莊 051430）

質(zhì)量

HPLC測定連參通淋片中鹽酸小檗堿的含量

孔德憲1，姜海1，劉育強1，張?zhí)乩?，段文靜2，盧樹杰1，2*

（1.神威藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 051430；2.河北省中藥注射劑工程技術(shù)研究中心，河北 石家莊 051430）

目的：建立連參通淋片中鹽酸小檗堿含量的測定方法。方法：高效液相色譜法，C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），乙腈－水（1∶1）（每1 000mL中加磷酸二氫鉀3.4 g，十二烷基硫酸鈉1.7 g）為流動相，檢測波長345 nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿在0.127 4～0.637 0μg呈良好線性關(guān)系，平均回收率為98.62%，RSD＝1.17%。結(jié)論：該方法簡便、靈敏、準確，適用于連參通淋片中鹽酸小檗堿的含量測定。

高效液相色譜法；連參通淋片；鹽酸小檗堿

連參通淋片為神威藥業(yè)有限公司自主研發(fā)的中藥6類新藥，由黃連、苦參等十余味藥味組成，具有清熱解毒，燥濕殺蟲，利尿通淋，健脾化濁的功能，用于臨床診斷為非淋菌性尿道炎，辯證屬濕熱下注者，臨床表現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛，排尿困難，尿道刺癢，尿道口有分泌物。其中黃連為君藥，其所含生物堿為本制劑活性成分，研究采用高效液相色譜法測定制劑中鹽酸小檗堿的含量，從而控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器及試藥

高效液相色譜儀：日本島津LC-6A；色譜柱：C18（4.6 mm×250 mm，5μm）。乙腈：色譜純；磷酸二氫鉀：分析純；十二烷基硫酸鈉：化學(xué)純。連參通淋片（神威藥業(yè)有限公司，批號：090421，090422，090423）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈－水（1∶1）（每1 000 mL中加磷酸二氫鉀3.4 g，十二烷基硫酸鈉1.7 g）；檢測波長345 nm，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于5 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品6 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含鹽酸小檗堿30μg）。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去薄膜衣，精密稱定，研細，精密稱取0.5 g，加乙醇60 mL加熱回流2 h，放冷，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加乙醇適量洗滌容器，洗液與殘渣并入量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置以處理好的中性氧化鋁柱（100～200目，3 g，內(nèi)徑10 mm）上，加乙醇洗脫，收集洗脫液至50 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 專屬性試驗

按處方比例及工藝，制備缺少黃連的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含鹽酸小檗堿的陰性對照溶液。鹽酸小檗堿與樣品中其他成分峰分離度R＞1.5，陰性對照無干擾，見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液（63.7μg·mL－1）2，4，6，8，10μL，分別注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以鹽酸小檗堿的量為橫坐標，峰面積的積分值為縱坐標，作圖得標準曲線，其回歸方程為Y＝1 566 085X－4 273（r＝0.999 9），線性范圍0.127 4～0.637 0μg。

2.6 精密度試驗

精密吸取供試品溶液，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，求得RSD＝0.64%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

圖1 鹽酸小檗堿HPLC圖

取供試品溶液，分別于配制后0，1，3，5，21，23，25 h依法測定，計算RSD＝1.30%，結(jié)果表明供試品溶液在25 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收試驗，精密稱取己知含量的連參通淋片（批號：090421），細粉0.25 g共6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液（0.376 mg·mL－1）10 mL，依法測定。計算回收率，結(jié)果見表1。

2.9 含量測定

取090421，090422，090423 3批連參通淋片，按供試品制備方法制備，精密吸取對照品溶液及供試品溶液，依法測定，計算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果分別為18.3，19.1，19.2 mg/片。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收率試驗

3 討論

3.1 流動相的選擇

鹽酸小檗堿的含量測定方法報道較多，但能將幾種生物堿全部分離且峰形良好者不多，該研究參考相關(guān)文獻［1，2］和日本藥局方［3］收載的流動相條件，并進一步試驗摸索和驗證，最后選擇的流動相能達到較好的分離效果。

3.2 樣品的處理

取樣品適量，分別采用超聲法，回流法及索氏提取法進行提取，按上述色譜條件測定。超聲法提取不完全；索氏提取法時間過長，需十幾個小時；加熱回流法提取效率較高，經(jīng)試驗確定回流2 h為宜。將回流提取的供試液通過一中性氧化鋁柱［4］，可除去干擾雜質(zhì)，利于含量測定。該方法簡便、靈敏、準確，適用于連參通淋片中鹽酸小檗堿的含量測定。

［1］韓鳳梅，李宇，柳偉，等.反相離子對色譜法測定加味左金丸中鹽酸小檗堿和吳茱萸次堿含量［J］.分析化學(xué)，2005，33（11）：1667.

［2］樊曉霞，萬里燕，袁麗萍，等.高效液相色譜法測定復(fù)方苦參洗劑中鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量［J］.中國藥學(xué)雜志，2005，40（23）：1820-1821.

［3］日本厚生省.日本藥局方［S］.第十二改正.日本：厚生勞動省，1998：981-982.

［4］王寶琹.中成藥質(zhì)量標準與標準物質(zhì)研究［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1994：146-163.

Content Determ ination of Berberine Hydrochloride in Lianshentonglin Tablets by HPLC

KONG De-xian1，JIANG Hai1，LIU Yu-qiang1，ZHANG Te-li1，DUANWu-jing2，LU Shu-jie1，2
（1.Shineway Pharmaceutical Co.Ltd．，Shijiazhuang 051430，China；2.Hebei Province Engineering Research Center for Traditional Chinese drug Injections，Shijiazhuang 051430，China）

? Objective：To determine the content of Berberine hydrochloride in Lianshentonglin Tablets.

Methods：HPLCmethod was used.Using C18（4.6 mm×250 mm，5μm）as analytical column.The mobile phase was acetonitrile-water（1∶1）［contain potassium dihydrogen phosphate 3.4 g and sodium dodecyl sulfate 1.7 g·（1 000mL）－1］.Detection wavelength is 345 nm.Results：A good linear range was shown at the concentration from 0.127 4μg to 0.637 0μg.The average recovery was98.62%and the RSD was1.17%.Conclusion：Themethod is simple，sensitive，accurate，and can be used for the quality control of Lianshentonglin Tablets.

HPLC；Lianshentonglin Tablets；Berberine hydrochloride

*盧樹杰，Tel：（0311）88030066-2320，E-mail：sun＠shineway.com

2010-12-13）