王美惠，李 巖

（遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110101）

用雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)檢測(cè)甲胎蛋白的安全模擬方法

王美惠，李 巖

（遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110101）

雙向瓊脂；擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)；甲胎蛋白

雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)是將抗原和抗體分別加到瓊脂板相對(duì)應(yīng)的孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，若二者相對(duì)應(yīng)，在比例合適處形成白色沉淀線。若同時(shí)含有多種抗原抗體系統(tǒng)，因其擴(kuò)散速度不同，可在瓊脂層中形成多條沉淀線。這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)可用于多種抗原成分的分析和鑒定，如檢測(cè)甲胎蛋白。用雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)檢測(cè)甲胎蛋白需要肝癌患者的血清和健康人血清，為避免學(xué)生和實(shí)驗(yàn)教師接觸患者血液標(biāo)本，我們用模擬方法做這個(gè)實(shí)驗(yàn)。

1 材料

（1）1%瓊脂（生理鹽水配制）。（2）陽(yáng)性血清。（3）甲胎蛋白診斷學(xué)清。（4）待檢血清。（5）陰性對(duì)照血清。（6）載玻片、打孔器等。

2 模擬方法

（1）陽(yáng)性血清——人免疫球蛋白IgG代替；

（2）甲胎蛋白診斷血清——羊抗人IgG免疫血清代替；

（3）待檢血清（肝癌患者的血清）——人免疫球蛋白IgG代替；

（4）陰性對(duì)照血清——生理鹽水代替。

用生理鹽水將人免疫球蛋白IgG稀釋一定濃度來代替肝癌患者血清（IgG代替肝癌患者血清中的甲胎蛋白），用生理鹽水將羊抗人IgG免疫血清稀釋一定濃度來代替甲胎蛋白診斷血清（IgG抗體代替甲胎蛋白抗體），抗原IgG和IgG抗體在比例合適處形成白色沉淀線。在做實(shí)驗(yàn)之前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，找出抗原IgG和IgG抗體能形成白色沉淀線的最佳濃度。

3 實(shí)驗(yàn)方法

（1）用1%瓊脂（生理鹽水配制）鋪板。

（2）用打孔器打梅花孔（見圖1）。

（3）1、4孔加入陽(yáng)性血清，2、6 孔加入待檢學(xué)清，3、5孔加入陰性對(duì)照血清，中心孔加入甲胎蛋白診斷血清。

（4）將加好樣品的瓊脂板放于濕盒內(nèi)，置37℃溫箱24小時(shí)，觀察并記錄結(jié)果。

4 結(jié)果判斷

若待檢血清標(biāo)本產(chǎn)生沉淀線，并與陽(yáng)性對(duì)照所產(chǎn)生的沉淀線吻接成一線，則表示陽(yáng)性。如無沉淀線，則表示陰性。

5 優(yōu)點(diǎn)

此模擬方法安全，實(shí)驗(yàn)效果非常好。

G424.31

B

1671-1246（2011）01-0132-01