王亞薇，沈喜海，張志偉，張丹丹，李 洋

(河北科技師范學(xué)院理化學(xué)院，河北秦皇島，066600)

紫花地丁(Viola yedoensis Makino)為堇菜科(Violaceae)植物，又名野堇菜、遼堇菜、光瓣堇菜，分布于我國(guó)東北、華北、華東、中南等地［1］。為多年生蓮座狀草本，高7～14 cm，花有卡柄，萼片卵狀披針形，花瓣紫堇色，具細(xì)管狀，直或稍上彎;花期4～5月，紫色小花，全草可入藥，其性寒，味苦、辛，有清熱解毒、涼血消腫之功效，臨床上常用于治療痢疾、乳房炎、黃疸、目赤腫痛，以及外敷治跌打損傷、毒蛇咬傷等［2，3］。據(jù)報(bào)道［4］，紫花地丁含有有機(jī)酸、黃酮及其甙類(lèi)、酚類(lèi)成分、糖類(lèi)、氨基酸、多糖及蛋白質(zhì)、皂甙等10 多種有效成分［5］，并可富集 Cu，F(xiàn)e，Mn，Zn，Mg 等微量元素［6］。白殿罡［7］、陳玉花［8］等采用氣相色譜及質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)紫花地丁全草成分進(jìn)行了研究，并確定了其主要成分。紫花地丁作為一種中藥材，研究植株各部分的成分更有助于對(duì)其藥用價(jià)值的利用。而有關(guān)紫花地丁花成分的研究很少。筆者用乙醚對(duì)其花中成分進(jìn)行提取，經(jīng)過(guò)柱色譜和薄層色譜分離后，采用紫外分析儀對(duì)分離物進(jìn)行了初步的測(cè)定。對(duì)紫花地丁花成分的研究具有十分重要的意義。

1 材料和方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料

紫花地丁花2010年4月采于河北科技師范學(xué)院院內(nèi)。將其置于干燥箱中，40℃烘干，用研缽充分研細(xì)，保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2 儀器與試劑

1．2．1 儀器 DGF－1A型立式電熱鼓風(fēng)干燥箱，電子天平，KQ－100DB型數(shù)控超聲波清洗器，SHZ－D(III)循環(huán)水式真空泵，TGL－16B(高速)離心機(jī)，UV－2401PC紫外分析儀。

1．2．2 試劑 層析用硅膠(0．075～0．150 mm，0．053 ～0．075 mm)，薄層色譜用硅膠，乙醚，無(wú)水乙醇，甲醇，正丁醇，丙酮，二氯甲烷，三氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯等為分析純。

1．3 提取與分離

1．3．1 提取方法 稱(chēng)取5．0 g備用粉末放入250 mL的三角瓶中，加入100 mL乙醚，超聲波提取0．5 h。過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)^續(xù)提取2次，合并3次提取的濾液，在34～35℃蒸發(fā)濃縮至4 mL左右。置于表面皿中，在空氣中使乙醚自然揮發(fā)，得到青黑色膏狀物質(zhì)。

1．3．2 分離方法 在薄層板上點(diǎn)樣，分別用乙醚、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇作展開(kāi)劑展開(kāi)。其中乙醚和乙酸乙酯中展開(kāi)速度較快且效果較好，但兩者展開(kāi)點(diǎn)顏色不同。故選用乙醚和乙酸乙酯分別作展開(kāi)劑，點(diǎn)樣多次，分離展開(kāi)，將顏色、位置相同的樣點(diǎn)刮下合并，分別用展開(kāi)劑溶解，高速離心取上清液放于小瓶中待測(cè)。

稱(chēng)取100．0 g層析用硅膠(0．075～0．150 mm)在110℃下活化4 h，加入適量的石油醚，浸泡一段時(shí)間，濕法裝柱。柱高40 cm左右。濃縮所得膏狀物在少量石油醚浸泡的硅膠中拌勻，注入層析柱中洗脫分離。操作如圖1所示。另稱(chēng)取100．0 g層析用硅膠(0．053～0．075 mm)在110℃下活化2 h，加入適量的石油醚，浸泡一段時(shí)間，濕法裝柱，然后梯度洗脫(溶劑極性B＞A，B溶劑梯度洗脫，即A，B兩溶劑混合體積比為 A∶B=10∶0→9∶1→8∶2→7∶3→6∶4→5∶5→4∶6→3∶7→2∶8→1∶9→0∶10)，操作如圖2 所示。

圖1 紫花地丁花粉末提取物提取分離示意圖一

圖2 紫花地丁花粉末提取物提取分離示意圖二

1．4 分離液鑒定

1．4．1 薄層色譜分離液紫外光譜測(cè)定 將薄層色譜法所得上清液，調(diào)整濃度，測(cè)定紫外圖譜。分別用展開(kāi)劑作參比溶液，消除溶劑的影響。

1．4．2 第1次柱色譜分離液紫外光譜測(cè)定 第1次柱色譜分離液，放于干燥的小瓶中，在空氣中使乙醚自然揮發(fā)，然后用乙醚溶解測(cè)定紫外圖譜。乙醚作參比液，消除溶劑干擾。

1．4．3 第2次柱色譜分離液紫外光譜測(cè)定 第2次柱色譜分離液，直接測(cè)定紫外圖譜，用對(duì)應(yīng)的梯度洗脫液作參比溶液，消除溶劑干擾。

2 測(cè)定結(jié)果與分析

根據(jù)圖譜中吸收峰的位置和峰形，分析確定了部分應(yīng)用價(jià)值較廣泛的分離物的名稱(chēng)(表1)。

表1 部分分離產(chǎn)物

3 結(jié) 論

采用超聲波提取方法及柱色譜和薄層色譜分離技術(shù)對(duì)紫花地丁花的成分進(jìn)行了初步測(cè)定，確定了其中的部分分離產(chǎn)物，主要為黃酮類(lèi)，香豆精類(lèi)，飽和脂肪酸類(lèi)等物質(zhì)。已確定物質(zhì)為7－羥基－5－甲氧基黃酮，山萘黃素－3－二葡萄糖苷，山萘黃素－7－鼠李糖－3－二葡萄糖苷，7－羥基－5－甲氧基黃酮，槲皮素－3－氧－二葡萄糖苷，4′－羥基－7，3′－二甲氧基二氫黃酮，7－羥基－4′－甲氧基－二氫黃酮，7，8－二甲氧基香豆精，8－異戊烯－7－氧－異戊烯基香豆精。為紫花地丁花的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

［1］楊鵬鵬，閆福林，梁一兵，等．紫花地丁化學(xué)成分的研究［J］．新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，25(2):185－187．

［2］李定剛，張武崗，宋毓民，等．紫花地丁抗菌活性成分研究［J］．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2006，34(4):87－90．

［3］李海濤，楊琳，章廣玲，等．紫花地丁煎劑調(diào)節(jié)小鼠巨噬細(xì)胞功能的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究［J］．華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，6(5):553－554．

［4］劉嘉，徐潤(rùn)生，程存歸．兩產(chǎn)地紫花地丁揮發(fā)油的化學(xué)成分研究［J］．中成藥，2009，31(10):1 575－1 577．

［5］李金艷，偉忠民．中藥紫花地丁的研究進(jìn)展［J］．中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008，10(1):27－29．

［6］梁雪芹，李志宏，李秀珍，等．紫花地丁中微量元素淺析［J］．黑龍江醫(yī)藥，1995，8(3):166－167．

［7］白殿罡．紫花地丁揮發(fā)性化學(xué)成分的分析［J］．長(zhǎng)春大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，18(5):69－71．

［8］陳玉花，肖德華．紫花地丁揮發(fā)油化學(xué)成分分析［J］．內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2008，23(1):22－23．