(楊盧軍 秦榮新 黃義昆)

(廣西柳州市人民醫(yī)院藥劑科 廣西柳州 545006)

止血寶顆粒是由小薊經(jīng)提取后加輔料制成的綠褐色至深褐色顆粒劑,具有涼血止血,祛瘀消腫作用。涼血止血、祛瘀消腫。常用于鼻出血、吐血、尿血、便血、崩漏下血,外傷出血,癰腫瘡毒等癥。小薊為菊科薊屬植物刺兒菜Cirsium estosum(Willd)MB。生長(zhǎng)于海拔140～2650米的地區(qū),一般生于荒地、草地、山坡林中、路旁、灌叢中、田間、林緣及溪旁。有人工栽培作藥用。夏、秋二季花開(kāi)時(shí)采割,除去雜質(zhì),曬干[1]。小薊為傳統(tǒng)的止血中藥,已證實(shí)其具有止血作用,小薊主要含有黃酮類、有機(jī)酸類以及甾醇類化合物[2]?？Х人峋哂休^廣泛的抑菌作用,但在體內(nèi)能被蛋白質(zhì)滅活,另外還具有縮短血凝及出血時(shí)間的作用。本實(shí)驗(yàn)采用50%甲醇,通過(guò)超聲波取樣后,用HPLC法測(cè)定咖啡酸含量,分離良好,精密度高。

1 儀器及試藥

1． 1 儀器

島津LC-10AT泵,島津SPD-10AVP紫外檢測(cè)器(日本津島公司);Sartorius BP211D型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 試藥

甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其余試劑為分析純。

1.3 對(duì)照品

咖啡酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)：070417)。

1.4 試樣

止血寶顆粒(陜西永壽制藥有限責(zé)任公司,批號(hào)：071025、071225、080216)。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱;Hypersil C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸(12∶88),流速為0.5mL.min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為323nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取減壓干燥至恒重的咖啡酸對(duì)照品,加50%甲醇制成50.3μg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下[4]的本品,研細(xì),約取1g,進(jìn)行精密稱定,然后加人10mL50%的甲醇,稱定重量,超聲處理(頻率40KHz,功率250W)30min,放冷至室溫,用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻?yàn)V過(guò),精密量取續(xù)濾液1～10mL棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),避光保存,即得。同法制得止血寶顆粒陰性空白溶液。

2.4 方法

2.4.1 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性空白溶液各10μL,注入液相色譜儀,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。陰性對(duì)照色譜圖無(wú)色譜峰出現(xiàn),表明其它成分對(duì)咖啡酸的測(cè)定無(wú)干擾。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 稱取咖啡酸對(duì)照品,加50%甲醇制含1.2024mg·mL-1咖啡酸的溶液為儲(chǔ)備液,分別取儲(chǔ)備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置于10mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10μL進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明進(jìn)樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.3 吸取10μL“2.2”項(xiàng)對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,記錄色潛圖,求得峰面積的RSD為0.68%,表明精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品5份,按“2.3”項(xiàng)供試品溶液制備方法同法操作,測(cè)定咖啡酸的含量,其RSD為1.2%。

2.4.5 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取已知含量樣品,精密稱定,共6份,分別加人4.356 1mg·mL-1對(duì)照品溶液1mL,混勻后,按“2.3”項(xiàng)供試品溶液的制備項(xiàng)下,自“加人50%甲醇”操作,各進(jìn)樣10μL,記錄色譜圖,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 樣品的測(cè)定

取3批樣品,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下,吸取10μL供試品溶液和5.0314μg·mL-1對(duì)照品溶液進(jìn)樣。計(jì)算結(jié)果為3批樣品中咖啡酸的含量分別為5.225 8,5.074 5,5.165 2(mg·g-1)。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

考察了止血寶顆粒中咖啡酸在乙腈-水、甲醇-水2種體系中的分離效果。由于乙腈-水體系中,基線不穩(wěn)定,干擾較大,故選擇甲醇-水體系。在此基礎(chǔ)上,考察了甲醇-水的不同配比,最終選擇比例為12∶88,由于水提取物成分較復(fù)雜,加人0.4%磷酸調(diào)節(jié)pH值,可抑制咖啡酸解離,改善咖啡酸的分離度,對(duì)稱性好。

3.2 流速的確定

流速對(duì)分離度起著至關(guān)重要的影響,當(dāng)流速為1mL·min-1時(shí),分離度1.1,當(dāng)流速降到0.5mL·min-1時(shí),分離度就會(huì)＞1.5,基本可達(dá)到基線分離。

3.3 實(shí)驗(yàn)研究

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究,建立了高效液相色譜法測(cè)定止血寶顆粒中咖啡酸的含量測(cè)定法,該方法簡(jiǎn)便易行,具有較好的準(zhǔn)確性,可以有效控制藥品的質(zhì)量。

[1] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：32.

[2] 潘坷,尹永芹,孔令義.小薊化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2006,8(4)：7～9.

[3] 張來(lái)新.從小薊中提取止血藥成分咖啡酸[J].中成藥,2002,24(10)：807～808.

[4] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：244.