張得鈞

（青海大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，青海 西寧810001）

當(dāng)歸養(yǎng)血丸是由當(dāng)歸、白芍、地黃、炙黃芪、阿膠、牡丹皮等中藥組成的制劑，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的功效［1］，常用于治療氣血兩虛、月經(jīng)不調(diào)。白芍具有平肝止痛、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗等功效，其主要有效成分為芍藥苷。目前，僅有測定當(dāng)歸養(yǎng)血丸中阿魏酸的文獻(xiàn)報(bào)道，而未見測定芍藥苷的方法［2］，本文建立了當(dāng)歸養(yǎng)血丸中芍藥苷的反相高效液相色譜含量測定方法，該方法不但能更好地控制當(dāng)歸養(yǎng)血丸的質(zhì)量，而且操作簡單，重復(fù)性、回收率和精密度均較好。

1 材料與儀器

1.1 材料

芍藥苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0736－200116，純度≥98%。當(dāng)歸養(yǎng)血丸購于各大藥店，詳見表1。

1.2 儀器

高效液相色譜儀（Agilent Technologies 1200），超純水器（1trL－10A）；KQ－500E型超聲儀。

表1 當(dāng)歸養(yǎng)血丸樣品來源及批次

2 方法

2.1 色譜條件

Hypersil ODS色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇－水（32：68），檢測波長為230nm，流速1mL／min，柱溫30℃，進(jìn)樣量10μL，色譜見圖1。

2.2 供試品溶液的制備

分別取不同廠家生產(chǎn)的當(dāng)歸養(yǎng)血丸，搗碎后研細(xì)（過3號(hào)篩）。精密稱定1g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，超聲處理30min（500W，40kHz），放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，濾液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

圖1 芍藥苷含量測定HPLC

2.3 空白試驗(yàn)

按處方制備缺白芍的陰性樣品，按照上述方法制備供試液并分析，結(jié)果見圖1，表明缺白芍樣品在芍藥苷對照品保留時(shí)間處無色譜峰，其他藥味無干擾，分析方法專屬性良好。

2.4 芍藥苷線性關(guān)系考察

精密吸取對照品貯備溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置25mL量瓶中，分別用甲醇稀釋至刻度，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μL，記錄色譜，見圖1；以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）與含量為橫坐標(biāo)（X）得回歸方程為：Y＝138.63X－69.82，r＝0.999 7，結(jié)果表明芍藥苷在150～750ng／mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下方法制備同一批樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣7次，結(jié)果RSD為0.635%（n＝7），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下方法制備同一批樣品溶液，分別在0、2、4、6、8、12、18、24h進(jìn)樣，測得峰面積，計(jì)算得峰面積的 RSD為1.0%。表明供試品溶液在24h內(nèi)含量基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下方法制備同一批樣品溶液7份，分別依本法處理進(jìn)行測定，結(jié)果芍藥苷平均含量為4.321mg·g－1，RSD為1.4%（n＝7），結(jié)果表明以本法測定重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測知含量的樣品約2.0g，共7份，分別準(zhǔn)確加入一定量的芍藥苷對照品溶液，依上述方法進(jìn)行含量測定并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。方法平均回收率為98.7%，RSD為1.7%（n＝7），符合中藥制劑分析要求。

表2 芍藥苷加樣回收率

2.9 樣品測定

分別取不同廠家的當(dāng)歸養(yǎng)血丸按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 不同提取方法的比較

根據(jù)芍藥苷的理化性質(zhì)，在制備供試品溶液的過程中，分別對不同的提取溶劑、不同的提取方法、不同的提取時(shí)間分別進(jìn)行了考察，最終確定選用超聲處理的方法提取制備供試品溶液，選用50%甲醇溶液為制備供試品溶液的提取溶劑，確定30min作為所有樣品的超聲處理時(shí)間。最終確定的方法簡單易行、分析快速，精密度高，重現(xiàn)性好，且空白無干擾，可較好控制本品的質(zhì)量。

3.2 不同廠家當(dāng)歸養(yǎng)血丸質(zhì)量比較

從5個(gè)不同廠家當(dāng)歸養(yǎng)血丸芍藥苷含量的測定結(jié)果可以看出，產(chǎn)品中芍藥苷含量均高于2.5mg·g－1，但不同廠家的芍藥苷含量仍存在一定的差異，這可能與中藥制劑的藥材來源、生產(chǎn)工藝等因素有關(guān)，從而導(dǎo)致其特征性化學(xué)成分含量差異較大［2－3］；芍藥苷含量是當(dāng)歸養(yǎng)血丸的重要指標(biāo)，在不同廠家的當(dāng)歸養(yǎng)血丸產(chǎn)品中芍藥苷含量存在顯著差異，為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，建議設(shè)定該產(chǎn)品含芍藥苷的標(biāo)準(zhǔn)量，以便有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［2］夏明，董曉燁.當(dāng)歸養(yǎng)血丸中阿魏酸的含量測定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29（1）：103－104.

［3］王曉燕，朱寶珠，李順吉，等.RP－HPLC法測定逍遙丸（濃縮丸）中芍藥苷的含量［J］.中醫(yī)研究，2008，21（5）：14－16.