亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        紅法夫酵母高產(chǎn)蝦青素菌株的選育

        2011-08-29 07:35:36張蕊周博李賢宇天津渤海職業(yè)技術學院天津300402
        天津科技 2011年4期
        關鍵詞:青素苯胺酵母

        張蕊 周博 李賢宇 (天津渤海職業(yè)技術學院 天津300402)

        蝦青素的化學名稱為3,3'-二羥基-4,4'-二酮基-β,β'-胡蘿卜素,分子式為C40H52O4(見圖1),相對分子量為596.86,是一種天然非維生素A原的類胡蘿卜素,廣泛存在于蝦蟹、鮭魚和某些藻類及真菌中,常用作魚蝦等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的飼料添加劑。[1]動物實驗表明蝦青素有抑制腫瘤發(fā)生、增強免疫功能、延緩衰老等多方面的功能,在功能食品、飼料、化妝品和醫(yī)藥等方面有著廣闊的應用前景。[2-4]

        圖1 蝦青素的結構式

        紅法夫酵母可以發(fā)酵糖類產(chǎn)生蝦青素,最初于1970年在美國阿拉斯加的高山和日本北海道一帶山區(qū)落葉松的滲出液中分離得到。紅法夫酵母有生長速度快、容易實現(xiàn)細胞高密度培養(yǎng)以及提取色素后的酵母細胞可以作為飼料添加劑等優(yōu)點,已越來越受到人們的重視。但紅法夫酵母的野生型胞內(nèi)蝦青素含量比較低,一般為0.05%細胞干重,要進行連續(xù)化生產(chǎn)最終實現(xiàn)較高的經(jīng)濟效益,必須對紅法夫酵母原始菌株進行改造,以達到增產(chǎn)的目的。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料和儀器

        1.1.1 菌種 紅法夫酵母(Phaffia rhodozyma),中科院微生物所提供,編號As2.1557。

        1.1.2 培養(yǎng)基 搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基比例:葡萄糖20,酵母粉3,蛋白胨5,pH值自然。

        1.1.3 主要儀器 紫外誘變箱(自制),高速離心機(北京醫(yī)用離心機廠),回轉式恒溫調速搖瓶柜(上海欣蕊自動化設備有限公司),高效液相色譜儀(美國Laballiance公司)。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 紫外誘變 ①菌體前培養(yǎng)[5]:取活化后斜面種子1環(huán)接至盛有30 mL種子培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,20℃,160 r/min振蕩培養(yǎng)48 h。然后取培養(yǎng)液5 mL接至盛有50 mL搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中,20℃,160 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,使細胞處于對數(shù)期后期。②誘變處理:取5 mL菌液于Ф75 cm的培養(yǎng)皿中(帶磁棒),置于紫外誘變箱的磁力攪拌器上,開啟磁力攪拌器,打開皿蓋,分別照射 5 s、10 s、15 s、30 s、45 s、60 s、75 s、90 s。移取不同照射時間的菌液1 mL,將其稀釋到合適的濃度(3個梯度),然后分別取0.1 mL在固體完全培養(yǎng)基平板上涂布,每個稀釋度作3個平行,在20℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3 d。待菌落長出后計數(shù)。

        1.2.2 篩選[6-7]按照1.2.1的方法對出發(fā)菌株進行誘變處理,取誘變后的菌液3 mL接入盛有30 mL液體完全培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,20℃,160 r/min培養(yǎng)過夜,取10 mL培養(yǎng)液離心,收集菌體,洗滌后配制成濃度適中的菌懸液;取0.1 mL涂布于二苯胺抗性篩選平板上,20℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3 d,待菌落長出后,挑選顏色較紅、較大的菌落點接于固體完全培養(yǎng)基平板上,挑選較紅的、生長較快的菌株接到斜面上,并編號保存。

        2 實驗結果

        2.1 出發(fā)菌株的致死曲線(見圖2)

        圖2 出發(fā)菌株紅法夫酵母AS2.1557的紫外誘變致死曲線

        根據(jù)誘變結果繪制出紅法夫酵母AS2.1557的紫外誘變致死曲線,如圖2所示。一般認為紫外誘變的致死率在75%~85%之間時菌株的突變率較高,本實驗選擇80%左右的致死率,即誘變時間為30 s。

        2.2 出發(fā)菌株二苯胺抗性檢驗

        二苯胺是八氫番茄紅素脫氫酶的抑制劑,能抑制類胡蘿卜素的合成。把紅法夫酵母涂布在含二苯胺的平板上,菌落為土白色。但如果細胞發(fā)生突變,八氫番茄紅素脫氫酶活性不再受二苯胺等抑制劑的抑制,該菌落便是紅色的。實驗研究了不同二苯胺濃度下出發(fā)菌株的生長狀況,其結果見表1。

        表1 不同二苯胺濃度下出發(fā)菌株生長狀況

        由表1可以看出,二苯胺在較低濃度下對出發(fā)菌株的生長狀況影響不大;當二苯胺濃度增加至50~80 μmol/L時,菌體的生長受到一定的限制,菌落較小,生長緩慢,顏色為土白色;當二苯胺濃度增加至150 μmol/L時,菌體的生長受到很大的限制,菌落極小,生長極其緩慢,菌落顏色較難辨別;當二苯胺濃度達到200 μmol/L以上時,菌體的生長受到抑制。

        二苯胺不僅抑制紅法夫酵母胞內(nèi)類胡蘿卜素的合成,而且強烈抑制紅法夫酵母的生長。但誘變后需要篩選的是菌落相對較紅的菌株,綜合考慮,誘變后的二苯胺篩選培養(yǎng)基的濃度選為 80 μmol/L。

        2.3 高產(chǎn)菌株的篩選

        按照方法1.2.1對出發(fā)菌株進行誘變處理,誘變時間為30 s。誘變處理后,取誘變后的菌液3 mL接入盛有30 mL液體完全培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,20℃,160 rpm培養(yǎng)過夜,取10 mL培養(yǎng)液離心,收集菌體,洗滌后配制成濃度適中的菌懸液,取0.1 mL涂布于濃度為80 μmol/L的二苯胺抗性篩選平板上,20℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3 d,待菌落長出后,挑選顏色較紅、較大的菌落點接于固體完全培養(yǎng)基平板上,培養(yǎng)2~3 d后,挑選較紅生長較快的菌株接到斜面上,并編號保存。最終得到突變株81株,進一步篩選,共得到25株菌株,統(tǒng)一編號為Puv-1~Puv-25。

        2.4 誘變菌株發(fā)酵性能的測定

        2.4.1 高產(chǎn)菌株發(fā)酵性能的測定 對上述篩選的25株菌株進行發(fā)酵性能測定,實驗結果如表2所示,從中可以看出,Puv-7、Puv-11、Puv-16及Puv-24這4株菌的增產(chǎn)幅度較大。

        2.4.2 誘變菌株的遺傳穩(wěn)定性檢驗 將得到的4株高產(chǎn)突變菌株進行遺傳穩(wěn)定性檢驗,連續(xù)液體傳20代,期間測定其發(fā)酵性能,結果如表3所示。從中可以看出,4株高產(chǎn)突變菌株除Puv-11產(chǎn)量有所下降外,其他3株遺傳性能比較穩(wěn)定。

        表2 高產(chǎn)菌株發(fā)酵性能的測定

        表3 高產(chǎn)菌株的遺傳穩(wěn)定性檢驗

        3 結果討論

        依照出發(fā)菌株紅法夫酵母AS2.1557的紫外誘變致死曲線,選擇致死率在80%左右,即誘變時間為30 s,對出發(fā)菌株進行誘變。經(jīng)過篩選,得到突變株81株,進一步篩選,共得到25株菌株。經(jīng)過發(fā)酵性能測定和菌株穩(wěn)定性檢驗,最終得到3株穩(wěn)定的高產(chǎn)菌Puv-7、Puv-16、Puv-24,其產(chǎn)量相對原始菌株分別提高了34.7%、35.3%和46%?!?/p>

        [1]朱宏娟,田科雄,李玲,等.酵母在飼料工業(yè)中的新應用[J].飼料工業(yè),2005(12):23-25.

        [2]王菊芳,吳振強,梁世中.蝦青素的生理功能及其應用[J].食品與發(fā)酵工業(yè),1999,26(2):66-69.

        [3]姬德衡,錢方,祖國仁.微生物工程在保健食品開發(fā)中的應用[J].江蘇食品與發(fā)酵,2002(2):32-34.

        [4]Whyte,J.N.C,Sherry,K.L.Pigmentation and composition of flesh of Atlantic salmon fed diets supplemented with the yeast Phaffia rhodozyma [J].North American Journal of Aquaculture,2001,63(1):52-57.

        [5]FANG,T.J.and Chiou T.Y.Batch cultivation and astaxanthin production by a mutant of the red yeast phaffia rhodozyma NCHU-FS501[J].Journal of industrial Microbiology,2003(16):175-181.

        [6]王普,裘娟萍,鄭裕國,等.高產(chǎn)蝦青素的紅法夫酵母菌種的選育[J].微生物學通報,2002,29(1):15-19.

        [7]裘娟萍,沈寅初.紅法夫酵母高產(chǎn)蝦青素突變株的選育方法[J].工業(yè)微生物,2000(4):55-57.

        猜你喜歡
        青素苯胺酵母
        一種有效回收苯胺廢水中苯胺的裝置
        能源化工(2021年6期)2021-12-30 15:41:26
        6000倍抗氧化能力,“完爆”維C!昶科將天然蝦青素研發(fā)到極致
        蝦青素在設施草莓上的應用效果
        落葉果樹(2021年6期)2021-02-12 01:29:04
        酵母抽提物的研究概況
        中國調味品(2017年2期)2017-03-20 16:18:25
        酵母魔術師
        人CyclinD1在畢赤酵母中的表達
        抗氧劑壬基二苯胺的合成及其熱穩(wěn)定性
        合成化學(2015年9期)2016-01-17 08:57:20
        生物量高的富鋅酵母的開發(fā)應用
        對甲苯胺紅不加熱血清試驗改良的探討
        采后二苯胺處理減輕夏橙果實油胞病的作用
        食品科學(2013年24期)2013-03-11 18:30:50
        亚洲成a∨人片在线观看无码 | 久久国产亚洲av高清色| 日韩一区二区三区人妻免费观看| 老色鬼在线精品视频| 欧美粗大无套gay| 国产成人福利在线视频不卡| 亚洲hd高清在线一区二区| 亚洲国产果冻传媒av在线观看 | 白白色发布永久免费观看视频| 日本一区二区三区四区啪啪啪| 亚洲av网一区二区三区| 大地资源中文在线观看官网第二页| 亚洲av永久青草无码精品| 人妻精品一区二区三区蜜桃| 国产片精品av在线观看夜色| 婷婷亚洲综合五月天小说| 男女上床视频免费网站| 国产高清在线一区二区不卡| 亚洲成在人线在线播放无码| 日韩AV无码免费二三区| 午夜精品一区二区三区视频免费看| 亚洲人成在久久综合网站| 日本一卡2卡3卡四卡精品网站| 国产在线视欧美亚综合| 日韩精品午夜视频在线| 久久久国产乱子伦精品| 亚洲av无码片一区二区三区| 精品国产又大又黄又粗av| 国产手机在线观看一区二区三区| 闺蜜张开腿让我爽了一夜| 色伊人国产高清在线| 亚洲国产精品成人一区二区在线| 国产乱人偷精品人妻a片| 色妺妺视频网| 精品蜜桃视频在线观看| 免费久久99精品国产| 东北老女人高潮疯狂过瘾对白| 中文精品久久久久中文| 女优av一区二区在线观看| 人妻少妇偷人精品无码| 精品国产亚洲一区二区在线3d|