尹占東,夏建新,王延龍,王勁風(fēng),牟 妍,梅向林,倪勁松

(1.吉林大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科,吉林長春 130041;2.吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,吉林長春 130021;3.松原占東皮膚科診所,吉林松原 138000）

黑素瘤的病理表現(xiàn)千變?nèi)f化,免疫染色尤為重要。到目前為止,我們常用的黑素細(xì)胞的標(biāo)記物有S-100蛋白和HMB45,S-100蛋白敏感性高,但缺乏特異性,除了黑素細(xì)胞以外,雪旺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、組織細(xì)胞以及郎格罕細(xì)胞均陽性。而HMB45特異性較強(qiáng),但敏感性較低,尤其對(duì)梭形細(xì)胞黑素瘤、促纖維生成性黑素瘤不表達(dá)。MITF(Microphthalmia Transcription Factor）是一微小轉(zhuǎn)錄因子,國外多數(shù)學(xué)者認(rèn)為MITF是一敏感性和特異性均較強(qiáng)的診斷黑素瘤和色素痣的免疫標(biāo)記物。為了探討MITF、S100蛋白以及HMB45在黑素瘤、色素痣中的表達(dá)情況,做了以下實(shí)驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料鼠抗人S-100蛋白單克隆抗體、鼠抗人HMB45單克隆抗體、PV9000以及 DAB、AEC顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,NCL-MITF鼠多克隆抗體購于Novocastra Laboratories公司。石蠟包埋組織標(biāo)本來源于日本九州大學(xué)皮膚科以及吉林大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科,共收集黑素瘤標(biāo)本32例,色素痣4例,藍(lán)痣2例及Spitz痣2例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 載玻片及標(biāo)本處理 將載玻片行硫酸浸泡、自來水沖洗、乙醇浸泡、烤箱烤干后用多聚賴氨酸包被、備用。將石蠟包埋組織標(biāo)本進(jìn)行薄切3.5 μ m,置于事先處理好的載玻片上,37℃過夜烤干。將標(biāo)本常規(guī)脫蠟、脫水。做HMB45免疫染色時(shí),將標(biāo)本用微波加熱進(jìn)行抗原修復(fù),做MITF免疫染色時(shí),將標(biāo)本進(jìn)行高壓處理,進(jìn)行抗原修復(fù),S100蛋白免疫染色無需抗原修復(fù)。

1.2.2 免疫染色 具體步驟按操作說明書進(jìn)行,AEC顯色劑顯色,顯微鏡下觀察。

MITF抗體的免疫染色緩沖液為TBS,而S-100蛋白及HMB45抗體的免疫染色緩沖液為PBS。

1.2.3 結(jié)果判斷 S-100蛋白和HMB45陽性部位為細(xì)胞質(zhì)見棕褐色顆粒,陽性細(xì)胞＞75%為(+++）,＞50%為(++）,＞25%為(+）,＜25%為(-）;MITF為細(xì)胞核著色,＞10%即判為(+）。

2 結(jié)果

2.1 黑素瘤的組織病理分型32例黑素瘤標(biāo)本中,表淺擴(kuò)散型(SSM）6例,結(jié)節(jié)型(NM）5例,惡性雀斑樣痣型(L MM）6例,末端雀斑樣痣型黑素瘤(ALM）9例,轉(zhuǎn)移至皮膚的黑素瘤3例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)本3例。細(xì)胞學(xué)分類中多數(shù)為上皮樣細(xì)胞型,其中梭型細(xì)胞黑素瘤2例。

2.2 S-100蛋白、HMB45、MITF在黑素瘤以及色素痣中的表達(dá)見表 1及圖 1、2、3。

表1 S-100蛋白、HMB45、MITF在黑素瘤、色素痣中的表達(dá)

從S-100蛋白免疫染色結(jié)果中看到:黑素瘤的陽性率為96.8%(圖1）,色素痣的陽性率為100%。正常人表皮黑素細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞,部分纖維細(xì)胞均陽性,4例色素痣、2例藍(lán)痣以及2例Spitz痣均陽性。在HMB45免疫染色中看到:黑素瘤的陽性率為81.2%(圖2）。其陽性僅出現(xiàn)于黑素瘤、活躍的色素痣和Spitz痣(圖3）,正常表皮黑素細(xì)胞不表達(dá)。從MITF的免疫染色結(jié)果可以看到:黑素瘤的陽性率為96.8%,色素痣的陽性率為100%。除黑素細(xì)胞、痣細(xì)胞以及黑素瘤細(xì)胞陽性外,其余皮膚組織未見陽性反應(yīng)。

圖1 MM S100蛋白(+++,SP法×200）

圖2 MM HMB45(SP×400）

圖3 Spitz痣HMB45(+++）(sp×200）

3 討論

惡性黑色素瘤(Malignant Melanoma,MM）是一種高度惡性的腫瘤,其診斷除臨床、組織病理外,免疫染色尤為重要。本研究通過免疫染色的方法觀察了32例黑素瘤、4例色素痣、2例藍(lán)痣以及2例Spitz痣中MITF、S-100蛋白以及HMB45的表達(dá)情況,結(jié)果顯示:S100蛋白在診斷黑素瘤以及色素痣中具有較高的敏感性,其陽性率分別為96.8%和100%,此結(jié)果與國內(nèi)外的一些文獻(xiàn)報(bào)道相一致[1],但由于S100蛋白除黑素細(xì)胞,黑素瘤細(xì)胞外,在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以及來源的腫瘤、雪旺細(xì)胞以及來源的腫瘤、正常橫紋肌、心肌、脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等均有表達(dá),因而一些與上述相關(guān)的腫瘤也均表達(dá)S100蛋白[2,3],在本實(shí)驗(yàn)中也觀察到毛囊肌上皮細(xì)胞和部分纖維細(xì)胞也表達(dá)S100蛋白,因而,S100蛋白在診斷黑素瘤以及色素性皮膚病中具有敏感性高而特異性低的特點(diǎn),臨床應(yīng)用受到一定限制。在HMB45染色中觀察到,其陽性僅出現(xiàn)于黑素瘤和增生活躍的黑素細(xì)胞,如交界痣細(xì)胞、Spitz痣中真表皮交界處的細(xì)胞,皮膚組織中的其他成分也未見陽性反應(yīng),提示HMB45對(duì)黑素瘤的診斷具有較高的特異性[4]。MITF是黑素細(xì)胞的核蛋白,對(duì)黑素細(xì)胞的生成和活性起著關(guān)鍵性作用,調(diào)節(jié)包括黑素細(xì)胞起源的細(xì)胞如黑素母細(xì)胞、黑素細(xì)胞以及黑素瘤細(xì)胞的形態(tài)、分化和生存[5]。但對(duì)于MITF在色素性疾病以及黑素瘤中的表達(dá)情況國外文獻(xiàn)報(bào)道并不一致[6,7,8],國內(nèi)尚未見到相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。在觀察Ncl-MITF的染色中發(fā)現(xiàn),Ncl-MITF在皮膚組織中幾乎出現(xiàn)在所有黑素瘤細(xì)胞、色素痣細(xì)胞、以及正常黑素細(xì)胞中,在黑素瘤中的陽性率為96.8%。在色素痣、藍(lán)痣以及Spitz痣中均表達(dá),此表達(dá)陽性率與S100蛋白在黑素瘤以及色素痣中的表達(dá)相同,同時(shí),Ncl-MITF對(duì)于皮膚組織的其他成分均無反應(yīng),此點(diǎn)又與HMB45的表達(dá)情況相似,因此,Ncl-MITF是一種對(duì)于黑素瘤的診斷敏感性和特異性均較強(qiáng)的免疫標(biāo)記物[6]。MITF陰性出現(xiàn)在1例患者,此標(biāo)本S-100蛋白及HMB45均陽性,從中可以看出,對(duì)于MM的診斷要結(jié)合臨床、組織病理以及多項(xiàng)免疫組化指標(biāo)進(jìn)行綜合分析判斷,最終得出正確的結(jié)論。

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