韓 峰 周亞麗

1.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市紅山區(qū)中醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000

富馬酸比索洛爾為新一代選擇性β1受體阻滯劑，它具有選擇性高、藥理作用強、藥效持續(xù)時間長及毒副作用小等優(yōu)點。目前已在國內(nèi)外廣泛用于高血壓、心絞痛及其他心血管疾病的治療，療效確切、安全性好。

1 實驗與方法

1.1 試劑試藥

富馬酸比索洛爾對照品，純度：99.7%；酒石酸美托洛爾對照品，由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：100084-200101；富馬酸比索洛爾片：市售，規(guī)格為5 mg/片。試驗用水為純化水，甲醇為色譜純；其他試劑為AR級。

1.2 儀器及設(shè)備

Agilent 1100液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀，柱溫箱、四極桿質(zhì)譜檢測器。色譜工作站：Agilent Chem Station。

1.3 受試者及標本采集

健康成年男性19例。在受試前兩周內(nèi)未服過任何藥物，無食物和藥物過敏史，均為自愿參加試驗。

受試者禁食過夜后于次日晨7：00空腹給藥，用溫開水送服，服藥后4 h統(tǒng)一進食?？诜幬锴俺槿】瞻籽獦? mL，在服藥后的 0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、14、24、36、48 h 分別采集靜脈血 4 mL。

1.4 質(zhì)譜條件

離子檢測方式：選擇性離子檢測（SIM）；離子極性：正離子（positive）；離子化方式：氣動輔助電噴霧離子化（ESI）；比索洛爾，[M+H]+離子，m/z 326.4；內(nèi)標：美托洛爾，[M+H]+離子，m/z 268.4；傳輸區(qū)電壓：70 V；干燥氣流速：10 L/min；霧化室壓力：40 psig；干燥氣溫度：350 ℃。

1.5 血漿樣品的處理

于10 mL離心管中精密加入血漿樣品1 mL，內(nèi)標溶液（0.5040 μg/mL）50 μL，旋渦，加入 1M 氫氧化鈉 100 μL，旋渦，加入乙酸乙酯5 mL，旋渦1 min，于4000 r/min離心5 min，取上層有機相轉(zhuǎn)移至另一10 mL離心管中，于40 ℃水浴中氮氣流吹干。殘渣用100 μL流動相溶解，于16000 r/min離心3 min，吸取上清液進樣10 μL，進行HPLC-MS分析。

1.6 方法學考察

1.6.1 標準曲線的制備 取10 mL離心管數(shù)支，分別精密加入不同量的比索洛爾對照品溶液后以氮氣流吹干，加入空白血漿1 mL，旋渦，配成含比索洛爾的濃度分別為0.05071、0.09961、0.2998、0.9980、2.990、9.980、29.81，59.66，119.6 ng/mL 的標準含藥血漿，計算比索洛爾As和內(nèi)標Ai的比值（=As/Ai）。以血漿中比索洛爾濃度對比索洛爾峰As和內(nèi)標Ai的比值進行線性回歸，結(jié)果表明，在0.0507～119.6 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性良好， 回歸方程 = 0.0007099+ 0.04300C，r=0.9981，最低定量限為0.0507 ng/mL。

1.6.2 準確度及精密度試驗 按標準曲線的制備方法配制含比索洛爾濃度分別為0.1494、14.94、99.60 ng/mL的低、中、高3種濃度的標準含藥血漿，按標準曲線方法分別處理測定，分別精密加入不同量的比索洛爾對照品溶液，以氮氣流吹干，精密加入1 mL空白血漿，旋渦30 s混勻，配成含比索洛爾濃度分別為0.1494、14.94、99.60 ng/mL的含藥血漿，按標準曲線方法分別于日內(nèi)和日間處理測定，并計算日內(nèi)和日間精密度（n=5）。本研究建立的血藥濃度測定方法準確度在93.6%～108.8%范圍內(nèi)，精密度RSD均不大于7.0%。

1.6.3 樣本穩(wěn)定性考察 按標準曲線的制備方法配制含比索洛爾濃度分別為0.1494和99.60 ng/mL的含藥血漿，每種濃度各配制適量，然后每種濃度分取12份，每份1 mL。3份于配制好后按“血漿樣品的處理”項下操作立即分析；3份于室溫放置8 h后分析；3份于配制好后放入冰箱冰凍后取出化凍，反復凍融后分析；3份于配制好后放入冰箱中于-20℃冷凍保存4周后取出化凍，按“血漿樣品的處理”項下操作分析，考察反復凍融條件下穩(wěn)定性。結(jié)果表明，比索洛爾血漿樣品在上述條件下穩(wěn)定性均良好。

1.6.4 提取回收率試驗 配制成0.1494、14.94、99.60 ng/mL的三種濃度的標準含藥血漿，按1.6.3項下操作，進樣。另取對照品溶液配制成濃度相同的比索洛爾標準樣品進樣。求得相應(yīng)的提取回收率，平均回收率為94.6%，RSD=3.9%。

1.6.5 質(zhì)量控制 在每批血漿樣品測定的同時建立相應(yīng)的標準曲線（即隨行標準曲線）及質(zhì)控樣品，隨行標準曲線的配制方法見“標準曲線的制備”項下，質(zhì)控樣品為含比索洛爾濃度分別為0.1494、14.94、99.60 ng/mL的標準含藥血漿，每批血漿樣品的濃度數(shù)據(jù)用隨行標準曲線求得。在血漿樣品測定過程中，于每日平行測定低、中、高3個濃度的質(zhì)控樣品，其測得值均維持在對應(yīng)真實值的±20%范圍內(nèi)。

2 討論

本試驗中采用的參比藥物為進口的富馬酸比索洛爾片，并為原研發(fā)單位，在國內(nèi)外同類上市的產(chǎn)品，占主導地位，其質(zhì)量穩(wěn)定可靠。試驗方法采用兩制劑雙周期交叉試驗設(shè)計，抵消了試驗周期和個體差異對試驗結(jié)果的影響。4批隨行標準曲線的相關(guān)系數(shù)均達到0.997，質(zhì)控樣品均在真實值的基礎(chǔ)加減20%，因此本試驗的結(jié)果供試制劑與參比制劑生物等效的結(jié)論是可以信服。通過本方法質(zhì)量控制實驗，說明提取方法可行，能夠考察人體內(nèi)的藥物代謝情況。

[1]喬逸，彭潔，賈艷艷，等. LC-MS/MS法測定美托拉宗血濃度及其藥物動力學研究 [J]. 中國藥師，2011，14（5）：606-609.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.新藥轉(zhuǎn)正標準西藥第三十七[S].169-170，47冊：74-76.

[3]劉錫鈞，陳鷺穎，楊正管，等.國產(chǎn)富馬酸比索洛爾膠囊的人體相對生物利用度研究[J].中國臨床藥理學雜志，16（1）：40-42.