劉 濤，王 瑞，陳宏智

（信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校動物科學(xué)系，河南 信陽 464000）

豬繁殖與呼吸綜合征(豬藍(lán)耳病)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起豬的一種高度接觸性傳染病，以母豬發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、高死亡率等為主要特征[1]。豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌引起豬的一種高度接觸性呼吸道傳染病，臨床上以急性纖維素性胸膜肺炎或慢性局灶性壞死性肺炎為特征，急性者病死率高[2]。

1 發(fā)病情況

信陽某發(fā)酵床豬場存欄母豬300多頭，自繁自養(yǎng)。2011年3月，該豬場飼養(yǎng)在發(fā)酵床上的300多頭體重50～70 kg左右的育肥豬發(fā)生以呼吸困難、采食量下降、皮膚發(fā)紺、急性死亡等為主要特征的傳染性疾病。此批發(fā)病豬集中在三棟育肥舍內(nèi)，發(fā)病率約30%，病死率為10%。

2 臨床癥狀

病豬表現(xiàn)精神沉郁，食欲不振或廢絕，體溫升高到41～42 ℃，呼吸困難、腹式呼吸明顯、喘氣，嚴(yán)重者呈犬坐式，隨著病程發(fā)展，部分豬只皮膚變紫，耳、臀、腹部、四肢發(fā)紺（見圖1-2）。

3 病理變化

剖檢可見肺臟充血、淤血，呈暗紅色，肺間質(zhì)增寬，呈水腫樣，肺表面有大量出血斑點(diǎn)和大片紅色肝變樣病灶（見圖3—4）。肺切面濕潤，從支氣管斷端流出較多的泡沫樣液體。氣管充斥著黃色黏液、腸系膜淋巴結(jié)索樣腫大、其他各處淋巴結(jié)有不同程度的出血和壞死變化，脾臟顯著腫大，脾頭卷曲，表面可見暗紅色質(zhì)地較硬的出血性梗死。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 涂片鏡檢

無菌取心血、肝、肺涂片，革蘭氏染色均可見革蘭氏陰性小桿菌。

4.2 病原分離培養(yǎng)

無菌取病(死)豬心血、肝臟、脾臟、肺臟(病變區(qū)與正常組織交界處)、腎臟、胸腔積液接種于巧克力瓊脂、鮮血瓊脂、普通瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃燭缸培養(yǎng)24 h。巧克力瓊脂培養(yǎng)基長出圓形、邊緣整齊、直徑約0.5 mm的菌落，鮮血瓊脂培養(yǎng)基長出圓形、β型溶血、針尖狀大小菌落，普通瓊脂培養(yǎng)基無菌落生長。

4.3 CAMP試驗(yàn)(衛(wèi)星試驗(yàn))

在兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基上用金黃色葡萄球菌劃一直線，將純化菌與金黃色葡萄球菌作垂直劃線但不接觸，37 ℃培養(yǎng)24 h，可見金黃色葡萄球菌周圍出現(xiàn)加強(qiáng)的溶血帶，呈典型的CAMP現(xiàn)象。

圖1 豬群扎堆

圖2 腹部皮膚發(fā)紅

圖3 肺臟切面充滿泡沫

圖4 肺臟大片紅色肝變樣病灶

4.4 V因子依賴試驗(yàn)

將純化菌分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基和含0.01%NAD的普通瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，含NAD的普通瓊脂培養(yǎng)基長出灰白色、半透明、邊緣整齊、直徑約0.5 mm的菌落，不含NAD的普通培養(yǎng)基上無菌落生長。

4.5 生化試驗(yàn)

分離菌發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、鼠李糖、蔗糖、木糖產(chǎn)酸，不發(fā)酵乳糖、阿拉伯糖、棉子糖、海藻糖、甘露醇、衛(wèi)矛醇、山梨醇、肌醇，觸酶、尿素酶、丙二酸鹽、鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶、精氨酸脫羧酶、精氨酸雙水解酶陽性，氧化酶、硫化氫、七葉苷、水楊素、側(cè)金盞花醇、枸櫞酸鹽利用、硝酸鹽還原、M．R試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)陰性，具有胸膜肺炎放線桿菌的生化特性，說明分離菌是胸膜肺炎放線桿菌[3]。

4.6 藥敏試驗(yàn)

分離菌對丁胺卡那霉素敏感，對環(huán)丙沙星、諾氟沙星、復(fù)達(dá)欣中敏，對頭孢噻呋、慶大霉素、恩諾沙星、卡那霉素、復(fù)方新諾明、氨芐西林、羧芐青霉素、先鋒霉素V、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素等不敏感。

4.7 分子生物學(xué)診斷

1）無菌采集病死豬的肺、脾、淋巴結(jié)組織，用RT-PCR檢測豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株（引物序列和具體檢測方法見參考文獻(xiàn)[4]），結(jié)果見圖5。由圖5可見，豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株為陽性，豬瘟病毒為陰性。

2）采集呼吸道癥狀較為典型豬只血清10份，采用間接ELISA檢測方法，檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體值，見表1。

5 防治

將發(fā)病豬轉(zhuǎn)移至隔離舍，采用地圈飼喂，帶豬消毒。原發(fā)酵床進(jìn)行消毒，疫情平息后，重新添加新鮮發(fā)酵床菌種。使用丁胺卡那霉素6～8 mg／kg，肌肉注射，每日2次，連用3～5 d。1 t飼料中添加清開靈粉1 000～1 500 g、抗菌肽200 g，連續(xù)飼喂12 d。維生素C 3～5 mg／kg，肌肉注射，每日2次，連用5 d。

表1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體

圖5 PRRSVRT-PCR與豬瘟病毒的RTPCR檢測結(jié)果

經(jīng)過上述治療，同時加強(qiáng)飼養(yǎng)管理7 d后，豬群發(fā)病率、死亡率降低，病情得到較好控制。

6 討論與分析

1）因?yàn)樵搱鑫催M(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的免疫，其抗體陽性率很高，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室病原檢測可以初步確定引起本次豬只發(fā)病死亡的主要病原性病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒，并存在豬傳染性胸膜肺炎的混合感染。

2）該場大群發(fā)病前3 d，本地區(qū)適逢天氣降溫，房舍保溫和通風(fēng)條件一般。因該場采用發(fā)酵床飼養(yǎng)肥豬技術(shù)，據(jù)筆者觀察，豬只習(xí)慣用鼻吻拱發(fā)酵床地面，可以清晰的看到鼻孔處粘帶有許多鋸末，誘發(fā)豬只咳嗽現(xiàn)象明顯。因該技術(shù)不適合消毒，所以發(fā)病期間豬圈并未消毒，加速了病原的蓄積與擴(kuò)散。

3）本豬場分離菌對丁胺卡那霉素敏感，對頭孢噻呋不敏感。因此，該場最開始使用頭孢曲松鈉來治療，是不對癥的。臨床分離的致病菌株要進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，篩選敏感藥物，從而為疫病的預(yù)防和治療提供依據(jù)。

4）PRRSV可使豬免疫功能受損，易引發(fā)一些細(xì)菌繼發(fā)感染，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和胸膜肺炎放線桿菌混合感染時，病情會難以控制且病程較長，從而給治療增加難度。

5）通過實(shí)驗(yàn)室檢測，該場已經(jīng)是豬藍(lán)耳病陽性場。今后該場最好對種豬群和育肥豬群進(jìn)行豬藍(lán)耳病疫苗的免疫。必要時，對肥豬進(jìn)行豬傳染性胸膜肺炎疫苗的免疫。

[1] 陸承平．獸醫(yī)微生物學(xué)[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001： 254-256．

[2] 白文彬，于康震．動物傳染病診斷學(xué)[M]． 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：476-483．

[3] 王亞軍，段艷萍，邱翔宇．豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的分離與鑒定[J]．獸醫(yī)導(dǎo)報，2008(17)：17-18．

[4] 周海范，夏平安，崔保安，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒河南分離株ORF5基因的克隆與變異分析[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2007(6):810-813.