鄭海燕 陳浩慧

（龍口市人民醫(yī)院，山東 龍口 265701）

腫瘤轉(zhuǎn)化是多因素作用下，經(jīng)歷多步驟、多物質(zhì)、復(fù)雜演變過(guò)程。癌細(xì)胞演變特點(diǎn)及一般規(guī)律是經(jīng)歷了增生-不典型增生-瘤變-癌變的過(guò)程。在臨床及病理觀察發(fā)現(xiàn)很多癌前病變、不典型增生病例；也可在癌組織周邊發(fā)現(xiàn)癌前病變-不典型增生-正常組織之間的“過(guò)渡現(xiàn)象”。因此可以認(rèn)為腫瘤形成過(guò)程中存在細(xì)胞的基因表達(dá)、物質(zhì)生產(chǎn)的逐步的自我調(diào)節(jié)性的演變，最終導(dǎo)致細(xì)胞性質(zhì)轉(zhuǎn)化。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)癌變、“癌過(guò)渡區(qū)”及正常組織的相關(guān)主要的增殖蛋白基因表達(dá)狀態(tài)，并對(duì)細(xì)胞演變過(guò)程中基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用趨向、物質(zhì)變化及其意義進(jìn)行對(duì)比分析，以探討基因表達(dá)調(diào)節(jié)及細(xì)胞增殖調(diào)控蛋白在細(xì)胞演變過(guò)程作用地位。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

搜集龍口市人民醫(yī)院2005年后不同組織起源的惡性腫瘤，選擇具有癌-重度不典型增生（瘤變）-正常組織的典型病例之典型部位，確定在同一病例切片內(nèi)包含以上3種病變。其中過(guò)渡區(qū)組織細(xì)胞的特點(diǎn)為：細(xì)胞及核異型、核增大、染色質(zhì)增多濃染、核分裂多見，細(xì)胞排列極向消失，但原組織結(jié)構(gòu)存在、無(wú)浸潤(rùn)。收集92例典型病例中有：腺癌55例：包括胃腺癌31例結(jié)腸癌9例、肺癌6例、子宮內(nèi)膜癌7例、腮腺黏液表皮癌2例；鱗癌37例：包括皮膚癌14例、食道癌8例、宮頸癌11例、牙齦癌4例。

1.2 方法

應(yīng)用邁新公司提供的免疫組織化學(xué)抗體（能夠代表組織細(xì)胞增殖受體、增殖蛋白、周期素、蛋白酶的抗體）試劑13種，隨機(jī)提取所選病例，分四批次進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)。選擇切片、染片范圍為2～1cm2面積以上，并確保同一切片內(nèi)包含癌、過(guò)渡區(qū)及正常組織區(qū)域。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

把免疫組織化學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性率10%≤30%記為一個(gè)（+）加號(hào)、≥30%的歸屬于兩個(gè)（++）加號(hào)統(tǒng)計(jì)分析比較。

試劑中英對(duì)照（表皮生長(zhǎng)因子受體：EGFR；生長(zhǎng)因子：TGF-β1；癌基因蛋白：p21；增殖細(xì)胞核抗原：PCNA；癌胚抗原：CEA；原癌基因：C-myc；周期素Cyclin-D1，周期素E：Cyclin-E；周期素A：Cyclin-A；周期素依賴激酶CDK-2；金屬蛋白酶：MMP-9；組織蛋白酶cathepsin-D1；增殖細(xì)胞核抗原Ki-67）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)算不同區(qū)域陽(yáng)性率比較的μ檢驗(yàn)，得出P值分析判斷差異的意義。

2 結(jié) 果

2.1 按病變性質(zhì)區(qū)域不同分類并統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性表達(dá)率，分析比較結(jié)果：癌組織和過(guò)渡區(qū)內(nèi)的增殖受體（EGFR，TGF-β1）、增殖基因蛋白（p21，PCNA，CEA，CyclinD1，Ki-67，C-myc）、細(xì)胞周期素及周期蛋白酶（Cycin-E，Cycin-A，CDK-2）表達(dá)均高于正常組織；11項(xiàng)目在癌組織與過(guò)渡區(qū)陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯差異，合計(jì)陽(yáng)性率（一個(gè)加號(hào)以上的病例）分別為：癌組織87.6%、過(guò)渡區(qū)組織81.7%，μ檢驗(yàn)：P1=0.874，P2=0.817，Pc=0.837，SP1-P2=1.068，μ=0.0533，所以P＞0.01無(wú)明顯差異。與正常組織的陽(yáng)性率（6.8%）比較P值＜0.01，存在明顯差異。見表1。

表1 癌組織、過(guò)渡區(qū)及正常組織免疫組織化學(xué)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 癌組織區(qū)域內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9、組織蛋白酶D1檢測(cè)合計(jì)陽(yáng)性率：癌變區(qū)（95.1%）、過(guò)渡區(qū)陽(yáng)性率45.6%、兩區(qū)比較：MMP-9的μ=6.966＞2.58；cathepsin-的μ=7.979＞2.58，二者的前兩區(qū)比較P值＜0.01具有明顯差異。與正常組織區(qū)的陽(yáng)性率（8.6%）比較P值＜0.01也具有明顯差異。見表1。

2.3 不同病例的陽(yáng)性項(xiàng)目及程度不完全相同；其中過(guò)渡區(qū)的檢測(cè)有191項(xiàng)/例的陽(yáng)性程度高于癌組織，占16.3%，其多為低分化癌/晚期病例；有9例過(guò)渡區(qū)Ki-67表達(dá)高于癌組織，且與癌細(xì)胞分化無(wú)明顯相關(guān)性。

2.4 不同起源組織發(fā)生的腫瘤之間的相關(guān)增殖基因表達(dá)無(wú)明顯差異；腺癌與鱗癌及個(gè)體之間的相關(guān)增殖基因蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異，且受病例數(shù)量限制，因此列項(xiàng)單獨(dú)統(tǒng)計(jì)比較。

3 分析討論

3.1 在腫瘤的周邊區(qū)域?？砂l(fā)現(xiàn)從正常組織-增生-不典型增生-癌變的“過(guò)渡演變”現(xiàn)象，目前多認(rèn)為不典型增生為癌前病變（廣義也包括交界性腫瘤）或?yàn)榧?xì)胞演變前期狀態(tài)。不同階段細(xì)胞形態(tài)變化和基因表達(dá)的物質(zhì)變化，在一定程度上反映了腫瘤細(xì)胞的演變動(dòng)態(tài)過(guò)程[1]。見圖1和圖2。

圖1 腮腺黏液表皮癌交界區(qū)

圖2 腮腺黏液表皮癌交界區(qū)PCNA

本文統(tǒng)計(jì)，過(guò)渡區(qū)與癌變區(qū)域內(nèi)增殖受體（EGFR，TGF-β1）、增殖基因蛋白（p21，PCNA，CEA，CyclinD1，Ki-67，C-myc）、細(xì)胞周期素及周期蛋白酶，Cycin-E，Cycin-A，CDK-2均高表達(dá)，在過(guò)渡區(qū)與癌組織之間的表達(dá)無(wú)明顯差異，但明顯高于正常組織。顯示在癌變前期已發(fā)生細(xì)胞增殖相關(guān)基因趨向高表達(dá)的調(diào)節(jié)變化（基因擴(kuò)增基因高表達(dá)），此調(diào)節(jié)的結(jié)果只是增殖相關(guān)蛋白數(shù)量的增加[2]，致細(xì)胞增殖性能強(qiáng)化，尚未達(dá)到細(xì)胞性質(zhì)改變。而細(xì)胞增殖性強(qiáng)化為癌細(xì)胞及演變前的主要/共同特征。

在不同起源組織發(fā)生的腫瘤之間，增殖相關(guān)基因表達(dá)無(wú)明顯差異，提示不同腫瘤細(xì)胞演變過(guò)程的增殖基因表達(dá)調(diào)節(jié)趨向、步驟基本一致，細(xì)胞增殖性強(qiáng)化為細(xì)胞演變提供前期條件。此結(jié)果顯示了增殖基因表達(dá)及調(diào)控作用在腫瘤早期演變過(guò)程中的基礎(chǔ)作用地位[2,3]。因此在細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化進(jìn)程中，有理由把前期增殖相關(guān)基因表達(dá)的趨向性調(diào)節(jié)物質(zhì)視為細(xì)胞演變“啟動(dòng)”物質(zhì)，其生物調(diào)節(jié)調(diào)控作用，驅(qū)動(dòng)著細(xì)胞演變進(jìn)程的發(fā)展。

而不同病例的陽(yáng)性項(xiàng)目及程度的不完全相同性，又可表明癌組織細(xì)胞基因表達(dá)的差異性（相對(duì)不穩(wěn)定性），以及組織細(xì)胞的增殖調(diào)節(jié)物質(zhì)作用的調(diào)節(jié)非嚴(yán)格的準(zhǔn)確性。而共同的調(diào)節(jié)趨向-細(xì)胞增殖性的強(qiáng)化，細(xì)胞向高增殖性轉(zhuǎn)化[4]。

3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)化達(dá)到具有高增殖性及侵蝕性即具備惡性腫瘤的演變特征。本組檢測(cè)癌組織的基質(zhì)金屬蛋白酶9、組織蛋白酶D1的表達(dá)明顯高于“過(guò)渡渡區(qū)”及正常組織，為癌與過(guò)渡區(qū)突出的差異點(diǎn)。顯示細(xì)胞的內(nèi)部代謝強(qiáng)化調(diào)節(jié)活動(dòng)，導(dǎo)致了相關(guān)蛋白酶基因的發(fā)生高表達(dá)。（正常情況下，蛋白酶基因在多數(shù)已分化的功能細(xì)胞為低表達(dá)/或多數(shù)狀態(tài)情況下此基因處封閉狀態(tài)。蛋白酶為細(xì)胞代謝最基本的奢侈基因蛋白，高表達(dá)是細(xì)胞增殖代謝強(qiáng)化的另一標(biāo)志[4]）。蛋白酶高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的破壞周圍、攝取物質(zhì)能力增強(qiáng)相關(guān)，為細(xì)胞癌變及轉(zhuǎn)移性能強(qiáng)弱的標(biāo)志之一。細(xì)胞此變化可以視為基因表達(dá)調(diào)節(jié)改變/紊亂導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生性質(zhì)、功能及行為方面變化依據(jù)之一。現(xiàn)已研究證實(shí)，細(xì)胞在調(diào)節(jié)演變過(guò)程中，達(dá)到增殖基因高表達(dá)、必有部分分化、功能相關(guān)的基因受到抑制而低表達(dá)；部分封閉基因啟動(dòng)，可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部其它基因的調(diào)節(jié)作用蛋白物質(zhì)比例失衡，進(jìn)一步導(dǎo)致生物代謝程序紊亂及基因表達(dá)調(diào)控時(shí)序紊亂，最終也必然能夠?qū)е录?xì)胞代謝生產(chǎn)異常（基因突變等）而發(fā)生細(xì)胞性能演變-癌變[5,6]。

4 觀 點(diǎn)

增殖受體（EGFR，TGF-β1）、增殖基因蛋白（p21，PCNA，CEA，CyclinD1，Ki-67，C-myc）、細(xì)胞周期素及周期蛋白酶，Cycin-E，Cycin-A，CDK-2在腫瘤過(guò)渡區(qū)與癌變區(qū)域內(nèi)均高表達(dá)，其為細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)強(qiáng)化/增殖能力強(qiáng)化的標(biāo)志，細(xì)胞增殖性強(qiáng)化為癌細(xì)胞及演變前的主要/共同特征?；|(zhì)金屬蛋白酶-9、組織蛋白酶D1高表達(dá)為癌與過(guò)渡區(qū)突出的差異點(diǎn)，標(biāo)志腫瘤細(xì)胞的破壞周圍、攝取物質(zhì)能力增強(qiáng)及細(xì)胞性能轉(zhuǎn)化（癌轉(zhuǎn)化）。利用正常組織、過(guò)渡區(qū)、癌組織區(qū)代表腫瘤演變不同階段，有利于從動(dòng)態(tài)角度認(rèn)識(shí)細(xì)胞演變過(guò)程；應(yīng)用免疫標(biāo)記方法檢測(cè)細(xì)胞演變不同階段基因表達(dá)變化，統(tǒng)計(jì)比較分析表達(dá)特點(diǎn)，從部分角度探討其細(xì)胞內(nèi)部物質(zhì)變化規(guī)律，意義在探討細(xì)胞演變過(guò)程的不同階段的基因表達(dá)及相關(guān)增殖蛋白的作用地位以及與細(xì)胞性能變化的關(guān)系，此研究方式可行性及觀點(diǎn)供參考及討論。

[1]曹更生,柳愛蓮,李寧.隱藏在基因組中的遺傳信息[J].遺傳,2004,26(5) :714-720.

[2]喬蕾,董信春.表皮生長(zhǎng)因子受體和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在胃近端癌組織中的表達(dá)[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2009,35(1):9-10.

[3]金惠銘,盧建,殷蓮華.分子病理生理學(xué)[M].鄭州:鄭州大學(xué)出版社,2002.

[4]谷志遠(yuǎn),趙亞力.醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2002.

[5]田軍,王躍建,王天鐸,等.基質(zhì)金屬蛋白酶與下咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究[J].山東大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,19(4):212.

[6]李梅,曹學(xué)全,陳奎生.組織蛋白酶B表達(dá)與宮頸鱗癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].河南醫(yī)學(xué)研究,2007,16(3):197.