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        RNAi沉默N-cadherin表達(dá)對EC9706細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的影響*

        2011-08-02 07:38:40劉文靜侯新芳何素英王居峰
        中國病理生理雜志 2011年8期
        關(guān)鍵詞:鱗狀克隆質(zhì)粒

        李 克, 劉 鶯, 劉文靜, 侯新芳, 何素英, 王居峰

        (河南省腫瘤醫(yī)院腫瘤科,河南 鄭州 450008)

        食管癌是最常見的惡性腫瘤之一,我國特別是河南等省份是食管癌的高發(fā)地區(qū)[1,2],其死亡率居惡性腫瘤的第4位。由于侵襲、轉(zhuǎn)移是引起食管癌患者死亡的主要原因,因此對食管癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的探討已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。

        鈣黏附蛋白家族(cadherin family)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其中以上皮型鈣黏附蛋白(E-cadherin)和神經(jīng)型鈣黏附蛋白(N-cadherin)分布最廣泛。國內(nèi)外已有研究表明,食管鱗狀細(xì)胞癌的侵襲、轉(zhuǎn)移與E-cadherin的低表達(dá)或不表達(dá)有關(guān)。最近研究表明,在前列腺癌和乳腺癌中N-cadherin表達(dá)增多,并且在引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方面有著比E-cadherin 減少更為重要的作用[3,4]。N-cadherin 對于腫瘤上皮細(xì)胞及表達(dá) N-cadherin的血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附起著重要作用。在腫瘤形成過程中,N-cadherin的表達(dá)有助于血管形成及上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞的遷移,從而使腫瘤細(xì)胞更加富于侵襲性,易于轉(zhuǎn)移[5]。此外,N-cadherin還是一種凋亡抑制因子,可以通過抑制凋亡而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和存活。如前文所述[6],本研究首先通過對食管鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁不典型增生組織及正常食管黏膜組織中E-cadherin、N-cadherin的蛋白表達(dá)及其與臨床病理諸因素的關(guān)系進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)人食管鱗狀細(xì)胞癌組織中E-cadherin的低表達(dá)和N-cadherin的高表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān);然后又通過逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù),降低人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞中N-cadherin mRNA和蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn):RNAi沉默N-cadherin表達(dá)可以使EC9706細(xì)胞的體外侵襲力顯著降低,從而提示N-cadherin與食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān),食管鱗狀細(xì)胞癌的侵襲、轉(zhuǎn)移可能是N-cadherin和MMP-9共同作用的結(jié)果。因此,本研究通過荷瘤裸鼠實(shí)驗(yàn),將RNA干擾前后的EC9706細(xì)胞通過皮下注射的方式接種于裸鼠體內(nèi),觀察各組裸鼠成瘤期、成瘤大小、瘤體重量及細(xì)胞凋亡的情況,檢測各組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和 MMP-9的表達(dá),從而為N-cadherin治療食管鱗狀細(xì)胞癌的可行性研究提供理論基礎(chǔ)。

        材料和方法

        1 材料

        4-6周 BALB/c-nude裸鼠15只,雌性,平均體重16-18 g,購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司。pEGFP-MSCVneo質(zhì)粒和 pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒由協(xié)和醫(yī)科大學(xué)馬杰博士饋贈。pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒大小為7.5 kb,內(nèi)含EGFP基因序列、U6啟動子序列和多克隆位點(diǎn)等。人食管癌細(xì)胞株EC9706由中科院提供;包裝細(xì)胞株P(guān)T67購自Clontech;E-cadherin、N-cadherin和 MMP-9Ⅰ抗(鼠抗人單克隆抗體)購自Abcam;脂質(zhì)體Lipofectamine 2000TM購自Invitrogen;TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。

        2 方法

        2.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的RNAi沉默N-cadherin基因在EC9706細(xì)胞中的表達(dá)

        ①脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞PT67及抗性克隆的篩選與擴(kuò)增 將病毒包裝細(xì)胞PT67接種至6孔培養(yǎng)板中,待其融合達(dá)90%-95%時(shí),用脂質(zhì)體法對其進(jìn)行轉(zhuǎn)染(具體方法見 LipofectamineTM2000說明書)。轉(zhuǎn)染共分4組:正常對照組﹑脂質(zhì)體組和pEGFP-MSCVneo質(zhì)粒組﹑pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒組。

        選用G418進(jìn)行抗性克隆的篩選和擴(kuò)增,初選濃度為1000 mg/L(由預(yù)實(shí)驗(yàn)得出),10-15 d后降為300 mg/L,繼續(xù)維持10-15 d。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞每隔3-4 d在倒置熒光顯微鏡下488 nm波長處觀察細(xì)胞中綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。

        ②病毒滴度的測定 從pEGFP-MSCVneo質(zhì)粒組、pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒組經(jīng)G418篩選形成的PT67抗性克隆中,分別挑取2個(gè)邊界清楚的克隆進(jìn)行擴(kuò)增,收集病毒上清用以感染NIH3T3細(xì)胞,并用G418(600 mg/L)加壓篩選,用未感染的NIH3T3細(xì)胞作對照。2周后計(jì)算每瓶內(nèi)的克隆數(shù),按下式計(jì)算病毒滴度。病毒滴度(cfu/L)=克隆數(shù)/[病毒原液的體積(L)×復(fù)制因子×稀釋度]。選取病毒滴度最高的病毒上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

        ③EC9706細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及抗性克隆的篩選與擴(kuò)增將EC9706細(xì)胞接種至6孔培養(yǎng)板中,待其融合達(dá)90%-95%時(shí),進(jìn)行感染,感染共分3組:正常對照組﹑pEGFP-MSCVneo病毒上清組(空載體組)﹑pMSCVneo/N-cadherin病毒上清組(干擾載體組),方法與病毒滴度測定相同,篩選出具有G418抗性的EC9706細(xì)胞克隆,并用含G418(300 mg/L)的條件培養(yǎng)基進(jìn)行維持培養(yǎng)。

        2.2 裸鼠異種腫瘤接種實(shí)驗(yàn)

        ①EC9706細(xì)胞懸液的制備 大量擴(kuò)增并收獲處于對數(shù)生長期的正常對照組、空載體組和干擾載體組EC9706細(xì)胞,用不含 Ca2+、Mg2+的 PBS液(0.01 mol/L,pH 8.0)洗滌2次并制備成1×1010cells/L的細(xì)胞懸液。

        ②動物準(zhǔn)備及腫瘤細(xì)胞接種 將15只裸鼠隨機(jī)分為3組:正常對照組、空載體組和干擾載體組,每組各5只。將裸鼠常規(guī)消毒后,選取各組裸鼠背部肩胛旁區(qū)作為注射點(diǎn),分別皮下注射3組EC9706細(xì)胞懸液(1 ×1010cells/L),0.2 mL/只。

        ③生長曲線的繪制 定期觀察裸鼠成瘤情況,每隔7d測量移植瘤的長徑(L)和短徑(S),根據(jù)公式V(cm3)=L×S2×0.5來計(jì)算移植瘤的近似體積,并繪制腫瘤生長曲線,計(jì)算成瘤率。

        ④瘤體終重量和終體積的比較 接種5周后,頸椎脫臼處死裸鼠,完整剝離瘤體,測量瘤體終體積,并稱取瘤重,以計(jì)算腫瘤抑制率,腫瘤抑制率=(對照組瘤重-實(shí)驗(yàn)組瘤重)/對照組瘤重×100%;切除部分新鮮標(biāo)本投入液氮中保存,以備Western blotting實(shí)驗(yàn)所用;剩余腫瘤組織用40 g/L多聚甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,用于HE染色、免疫組化及細(xì)胞凋亡的檢測。

        2.3 裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá)

        ①免疫組織化學(xué)法檢測裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá) 將各組裸鼠移植瘤組織經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,連續(xù)切片,切片厚度4-6 μm。染色方法嚴(yán)格參照免疫組化PV-9000試劑盒說明書進(jìn)行操作,以PBS液代替Ⅰ抗作為陰性對照。胞膜/胞質(zhì)棕黃色染色為陽性,其中E-cadherin以胞膜著色為主,N-cadherin和MMP-9以胞質(zhì)染色為主,每張切片隨機(jī)取5個(gè)視野(×400),觀察200個(gè)細(xì)胞,計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞。

        ②Western blotting檢測裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá) 研缽常規(guī)消毒后,加入液氮,取約50 mg組織塊研磨,磨碎后加入適量(約200 μL)蛋白裂解液,繼續(xù)研磨至粉末,轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的EP管中,待粉末溶化后,1500×g離心30 min,去上清轉(zhuǎn)移至一新的EP管中,即為組織蛋白。嚴(yán)格參照Western blotting試劑盒說明書進(jìn)行操作,用β-actin抗體作為上樣對照。Western blotting結(jié)果的灰度值分析采用Gene Tools軟件完成。

        2.4 凋亡的原位酶標(biāo)記檢測(TUNEL法) 將石蠟包埋的組織切片預(yù)處理后,嚴(yán)格參照TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒說明書進(jìn)行染色,同時(shí)設(shè)陰性及陽性對照。以背景無顏色,細(xì)胞核內(nèi)著棕黃色顆粒為陽性。每張切片隨機(jī)取5個(gè)視野(×400),觀察200個(gè)細(xì)胞,計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞。

        3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,多個(gè)樣本均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

        結(jié) 果

        1 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的RNAi沉默N-cadherin基因在EC9706細(xì)胞中的表達(dá)

        1.1 脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞PT67及陽性克隆的篩選與擴(kuò)增 轉(zhuǎn)染24 h后在熒光顯微鏡下488 nm波長處觀察,pEGFP-MSCVneo質(zhì)粒組、pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒組PT67細(xì)胞均可見明亮的綠色熒光,胞漿和胞核都有,正常對照組、脂質(zhì)體組未見綠色熒光。20-30 d后正常對照組、脂質(zhì)體組細(xì)胞全部死亡,從而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的PT67細(xì)胞。

        1.2 病毒滴度的測定 pEGFP-MSCVneo質(zhì)粒組PT67細(xì)胞克隆1和2的病毒滴度分別為6×107cfu/L和 1×107cfu/L,pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒組PT67細(xì)胞克隆1和2的病毒滴度分別為2×107cfu/L和8×107cfu/L,遂選擇pEGFP-MSCVneo質(zhì)粒組PT67細(xì)胞克隆1和pMSCVneo/N-cadherin質(zhì)粒組PT67細(xì)胞克隆2的病毒上清對EC9706進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

        1.3 EC9706的轉(zhuǎn)染及抗性克隆的篩選與擴(kuò)增 將病毒上清轉(zhuǎn)染EC970624 h后,空載體組及干擾載體組即可見綠色熒光,胞漿和胞核都有,而正常對照組未見綠色熒光。當(dāng)G418以600 mg/L的初選濃度作用5-7 d后,正常對照組細(xì)胞絕大部分死亡,然后將G418濃度降為300 mg/L維持,10-15 d后正常對照組細(xì)胞全部死亡,而空載體組及干擾載體組則形成大小不一的抗性克隆,后續(xù)培養(yǎng)中仍用含300 mg/L G418的條件培養(yǎng)基維持。

        2 荷瘤裸鼠異種腫瘤接種實(shí)驗(yàn)

        2.1 人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞異種移植瘤動物模型的建立 正常對照組、空載體組裸鼠均于接種后第7-8 d左右的時(shí)間出現(xiàn)肉眼可見的瘤體,而干擾載體組裸鼠出瘤時(shí)間較前2組延長大2-4 d。瘤體起初為橢圓形,以后生長漸不規(guī)則,凸凹不平。接種5周后,處死裸鼠并迅速測量瘤體體積和重量,見圖1。與正常對照組、空載體組相比,干擾載體組裸鼠移植瘤體積和重量均明顯減小,差異顯著(P<0.05)??蛰d體組的腫瘤抑制率為6.89%,而干擾載體組的腫瘤抑制率為79.52%。解剖學(xué)檢查各組沒有明顯差別,瘤體有完整包膜,未見腫瘤向周圍組織侵襲,全身未見腫瘤轉(zhuǎn)移,淋巴結(jié)不易找到,無胸腺,肺臟無栓塞。心、肝、脾、腎等器官肉眼觀察無異常。

        Figure 1.Effect of N-cadherin knock-down on EC9706 tumor growth in nude mice.A:photograph of nude mice at the 5th week;B:photograph of tumor tissues in nude mice at the 5th week;C:down-regulation of N-cadherin reduced the volumes of tumor tissues in N-cadherin RNAi group at the 5th week;D:down-regulation of N-cadherin reduced the weights of tumor tissues in N-cadherin RNAi group at the 5th week..n=5.*P<0.05 vs untreated and control vector groups.圖1 RNA干擾沉默N-cadherin表達(dá)對EC9706細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤能力的影響

        2.2 生長曲線的繪制 接種后定期觀察各組裸鼠移植瘤生長情況,每7 d測量1次裸鼠瘤體體積,然后繪制其生長曲線,結(jié)果顯示:干擾載體組裸鼠瘤體生長緩慢且瘤體體積顯著小于正常對照組和空載體組,組間比較差異顯著(P<0.05),見圖2。

        Figure 2.The grouth curves of tumor tissues in the 3 groups of nude mice..n=5.**P<0.01 vs untreated and control vector groups.圖2 3組裸鼠移植瘤體積生長曲線

        2.3 裸鼠移植瘤的組織學(xué)觀察 3組裸鼠移植瘤組織HE染色后,光鏡下觀察可見大小不等的瘤細(xì)胞團(tuán),其中散在灶狀、片狀凝固性壞死,瘤細(xì)胞多為圓形或多角形上皮樣細(xì)胞,大小不一,排列緊密,核染色質(zhì)致密,染色深,異型性明顯,部分腫瘤細(xì)胞病理性核分裂像可見。瘤細(xì)胞團(tuán)周圍有少量纖維結(jié)締組織包繞,未見色素顆粒,見圖3。

        3 3 組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá)

        3.1 免疫組織化學(xué)法檢測各組裸鼠腫瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá) 3組裸鼠移植瘤組織均見到E-cadherin蛋白陽性染色,呈棕黃色顆粒,陽性信號定位于細(xì)胞膜,3組比較差異無顯著(P>0.05);正常對照組和空載體組裸鼠腫瘤組織中可見到N-cadherin和MMP-9蛋白陽性染色,呈棕黃色顆粒,陽性信號定位于細(xì)胞質(zhì),而干擾載體組中N-cadherin和MMP-9蛋白的陽性染色較弱,與正常對照組和空載體組比較,差異均顯著(P <0.05),見表1、圖4。

        3.2 Western blotting檢測3組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá) 正常對照組、空載體組和干擾載體組3組裸鼠腫瘤組織中E-cadherin的蛋白表達(dá)比較,無顯著差異(P>0.05);正常對照組和空載體組2組裸鼠腫瘤組織中N-cadherin的蛋白表達(dá)相比無明顯變化(P>0.05),而干擾載體組中N-cadherin的蛋白表達(dá)與以上2組相比則明顯降低(P<0.05);正常對照組和空載體組2組裸鼠腫瘤組織中MMP-9的蛋白表達(dá)相比無明顯變化(P>0.05),而干擾載體組中MMP-9的蛋白表達(dá)與以上2組相比則明顯降低(P<0.05),見圖5。

        Figure 3.HE staining of tumor tissue in the 3 groups of nude mice(×400).圖3 3組裸鼠移植瘤組織的HE染色結(jié)果

        表1 3組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白表達(dá)的比較Table 1.Comparision of E-cadherin,N-cadherin and MMP-9 protein expression in the 3 groups of nude mice

        Figure 4.Expression of E-cadherin,N-cadherin and MMP-9 proteins in the 3 groups of nude mice(×400).圖4 3組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá)

        Figure 5.Western blotting analysis for N-cadherin,E-cadherin and MMP-9 expression in nude mice.1:untreated group;2:control vector group;3:N-cadherin RNAi group..n=5.*P<0.05 vs untreated and control vector groups.圖5 3組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9的蛋白表達(dá)

        4 裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞凋亡的檢測

        凋亡的原位酶標(biāo)記檢測結(jié)果顯示,凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒,干擾載體組凋亡的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加,與正常對照組和空載體組相比差異顯著(P<0.05),見圖6。

        Figure 6.Apoptosis analysis of tumor tissues in the 3 groups of nude mice(TUNEL,×200)..n=5.*P<0.05 vs untreated and control vector groups.圖6 3組裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞凋亡情況

        討 論

        E-cadherin和N-cadherin不僅在介導(dǎo)鈣離子依賴的同型細(xì)胞間的黏附中發(fā)揮作用,而且在細(xì)胞遷移和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方面也有著重要作用。許多研究表明,E-cadherin是作為一種抑癌基因發(fā)揮作用的[7]。而最近研究表明,和 E-cadherin相反,N-cadherin在促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移方面具有重要作用。

        為了研究RNAi沉默N-cadherin表達(dá)對人食管鱗狀細(xì)胞癌EC9706細(xì)胞體內(nèi)生物學(xué)行為的影響,我們將轉(zhuǎn)染前后的EC9706細(xì)胞大量擴(kuò)增、收集后分別種植于裸鼠皮下,成功建立EC9706細(xì)胞異種移植瘤動物模型,該模型為進(jìn)一步研究N-cadherin與食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系奠定了良好基礎(chǔ)。接種5周后,處死裸鼠并分離瘤體,分別行3組裸鼠移植瘤體積和重量的組間比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn):正常對照組、空載體組相比無顯著差異(P>0.05),而干擾載體組與以上2組相比,組間比較差異顯著(P<0.05)。這提示,RNAi沉默 N-cadherin表達(dá)對EC9706細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長有顯著抑制作用。

        本研究聯(lián)合運(yùn)用免疫組織化學(xué)法和Western blotting方法比較了3組裸鼠移植瘤組織中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示:3組裸鼠皮下移植瘤中E-cadherin蛋白的表達(dá)無顯著差異;而與正常對照組和空載體組相比,干擾載體組N-cadherin和MMP-9蛋白的表達(dá)明顯減弱。這提示,干擾載體組EC9706細(xì)胞移植于裸鼠體內(nèi)后,N-cadherin和MMP-9蛋白仍維持低表達(dá),RNA干擾沉默N-cadherin表達(dá)可能通過下調(diào)MMP-9的表達(dá),降低細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)的降解能力,進(jìn)而降低EC9706細(xì)胞的體內(nèi)侵襲力。

        已有多項(xiàng)體外實(shí)驗(yàn)表明[8-10],N-cadherin的異常高表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。Li等[11]發(fā)現(xiàn),黑色素瘤細(xì)胞中N-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附可以激活A(yù)kt/PKB通路,而導(dǎo)致預(yù)凋亡蛋白Bad失活和穩(wěn)定態(tài)β-catenin的聚集,最終促進(jìn)癌細(xì)胞的存活。Tran 等[12]發(fā)現(xiàn),在前列腺腫瘤中,N-cadherin/catenin黏著復(fù)合體可以通過一個(gè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),進(jìn)而增加轉(zhuǎn)移過程中癌細(xì)胞的生存能力。Makrigiannakis等[13]發(fā)現(xiàn),抑制N-cadherin功能的抗N-cadherin抗體可以誘導(dǎo)表達(dá)N-cadherin的卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡。Gwak等[14]發(fā)現(xiàn),通過反義載體轉(zhuǎn)染抑制N-cadherin的功能后,與對照組相比,肝癌細(xì)胞在膽汁酸作用下更容易發(fā)生凋亡。Jiang等[15]發(fā)現(xiàn),表達(dá)TIP30腫瘤抑制因子突變型(可以保護(hù)細(xì)胞抵抗順鉑誘導(dǎo)的凋亡)的人肝癌細(xì)胞HepG2對化療不敏感,但如果運(yùn)用RNA干擾技術(shù)沉默N-cadherin的表達(dá),這類細(xì)胞又重新獲得了對順鉑的敏感性。以上研究結(jié)果均表明,N-cadherin是一種凋亡抑制因子,可以通過抑制凋亡而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和存活。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用TUNEL法比較了3組裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞的凋亡情況,結(jié)果顯示:干擾載體組裸鼠移植瘤組織中凋亡的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加。這提示,RNAi沉默N-cadherin表達(dá)可能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,進(jìn)而抑制EC9706細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長。

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