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(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院,遼寧錦州 121001)

蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)最常見(jiàn)的病因是顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的破裂,致死、致殘率較高[1]。研究表明,SAH引起的腦缺血、缺氧均伴有大量氧自由基產(chǎn)生,從而造成神經(jīng)細(xì)胞損傷,影響神經(jīng)功能[2]。原花青素(PC)被證實(shí)在腦缺血再灌注損傷及創(chuàng)傷性腦損傷中有顯著的抗氧化作用[3,4]。2010年～2011年,本實(shí)驗(yàn)觀察了 PC對(duì) SAH后大鼠腦組織含水量、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響,并探討其意義。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器 PC粉劑,用蒸餾水配制成懸浮液。MDA、SOD測(cè)定試劑盒。

1.2 SAH模型的建立 10%水合氯醛麻醉大鼠(300mg/kg),固定頭部,取頸部正中切口切開(kāi)皮膚,顯微鏡下顯露左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)和頸外動(dòng)脈(ECA),分離頸外動(dòng)脈近分叉處分支,雙極電凝器電凝離斷,電凝翼腭動(dòng)脈,于 ECA遠(yuǎn)心端結(jié)扎并剪斷,拉直 ECA使其與 ICA成一直線(xiàn)。用顯微手術(shù)鑷將 3-0單絲尼龍線(xiàn)經(jīng) ECA導(dǎo)入 ICA至其顱內(nèi)段,有阻力感后再插入 2 mm左右刺破 willis環(huán),造成SAH,迅速將尼龍線(xiàn)拔出,整個(gè)過(guò)程不超過(guò) 30 s。以大鼠有明確的 SAH或血凝塊而無(wú)腦實(shí)質(zhì)損害作為建模成功標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 健康成年雄性 Sprague-Dawley大鼠 72只,體質(zhì)量 250～300 g。隨機(jī)分為 3組,各 24只。①PC組:SAH造模成功后即經(jīng)腹腔注射 PC 100mg/kg,1次/d。②手術(shù)組:SAH造模成功后即經(jīng)腹腔注射生理鹽水 5m l/kg,1次/d。③對(duì)照組:不進(jìn)行 SAH造模,余操作與手術(shù)組相同。

1.4 腦組織含水量、MDA含量、SOD活性的測(cè)定PC組、手術(shù)組分別于造模后 24、48、72 h,對(duì)照組于相應(yīng)時(shí)間各取 8只大鼠快速斷頭取腦,其中 2只取相同部位大腦皮質(zhì)以干濕重法作含水量檢測(cè),余 6只取相同部位腦組織制備腦組織勻漿作 SOD和MDA檢測(cè)。①腦組織含水量測(cè)定:將腦組織放入預(yù)先已稱(chēng)重的玻璃杯中,用電子分析天平稱(chēng)量濕重,再置入 110℃恒溫干燥箱內(nèi),24 h后取出,再次稱(chēng)重(干重)。用Eliot公式計(jì)算腦含水百分率:腦含水百分率 =(腦組織濕重 -腦組織干重)/腦組織濕重 ×100%。②MDA含量及 SOD活性測(cè)定:采用 TBA硫代巴比妥酸法測(cè)定 MDA含量,黃嘌呤氧化酶法測(cè) SOD活性。SOD活性以每克組織蛋白中 SOD抑制率達(dá) 50%時(shí)的 SOD量表示。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,數(shù)據(jù)以±s表示,多個(gè)樣本均數(shù)間的比較行單因素方差分析,兩兩比較行 q檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 建模結(jié)果 PC組、手術(shù)組大鼠均見(jiàn)蛛網(wǎng)膜下腔中有彌漫分布的血液及血凝塊,主要分布于前顱窩、蝶鞍處及后顱窩,覆蓋腦底部的主要血管,證實(shí)大鼠 SAH模型制作成功。對(duì)照組未見(jiàn) SAH現(xiàn)象。所有大鼠均未見(jiàn)腦實(shí)質(zhì)出血或機(jī)械損傷。

2.2 各組處理不同時(shí)點(diǎn)大鼠腦組織含水量比較見(jiàn)表1。

表1 各組處理不同時(shí)點(diǎn)大鼠腦組織含水量比較(±s)

表1 各組處理不同時(shí)點(diǎn)大鼠腦組織含水量比較(±s)

注:與手術(shù)組相比,*P＜0.05;與對(duì)照組相比,#P＜0.05

組別 腦組織含水量(%)24 h 48 h 72 h對(duì)照組 63.51±0.17 64.26±0.27 64.39±0.12手術(shù)組 75.52±0.21# 77.63±0.25# 81.96±0.36#PC組 71.17±0.27* 73.21±0.65* 74.52±0.72*

2.3 各組處理不同時(shí)點(diǎn)大鼠腦組織 MDA濃度、SOD活性比較 見(jiàn)表 2。

3 討論

表2 各組處理不同時(shí)點(diǎn)大鼠腦組織 M DA濃度、SOD活性比較(±s)

表2 各組處理不同時(shí)點(diǎn)大鼠腦組織 M DA濃度、SOD活性比較(±s)

注:與手術(shù)組相比,*P＜0.05;與對(duì)照組相比,#P＜0.05

組別 MDA(nmol/mg)24 h 48 h 72 h SOD(NU/mg)24 h 48 h 72 h對(duì)照組 1.37±0.27 1.35±0.13 1.38±0.16 68.31±3.35 67.24±6.67 68.98±4.12手術(shù)組 4.32±0.56# 4.41±0.25# 4.56±0.67# 50.82±1.58# 43.86±5.32# 38.19±5.37#PC組 3.77±0.25* 3.61±0.61* 3.02±0.42* 60.17±6.31* 54.11±5.16* 50.75±2.63*

SAH后產(chǎn)生的過(guò)量氧自由基可以直接作用于神經(jīng)細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸,破壞神經(jīng)細(xì)胞膜的完整性引起神經(jīng)細(xì)胞壞死,還可直接攻擊神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的線(xiàn)粒體,引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞凋亡[5],并能產(chǎn)生直接縮血管作用引發(fā)腦血管痙攣加重腦損傷[6]。腦組織本身對(duì)自由基損傷缺乏足夠抵抗力,需要外源性抗氧化劑來(lái)清除氧自由基。

PC是多酚類(lèi)化合物,是一種天然有效的自由基清除劑。其能中斷自由基連鎖反應(yīng),保護(hù)脂質(zhì)免受病理性過(guò)氧化損傷,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)外 Ca2+的穩(wěn)定。有研究表明,PC在腦缺血損傷中有抗氧化活性和清除自由基的作用[7]。

MDA是氧自由基與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物,其產(chǎn)生量與氧自由基含量呈正比。MDA含量是反映氧自由基水平的重要指標(biāo),可間接反映細(xì)胞損傷的程度。SOD是體內(nèi)主要的自由基清除酶,是反映機(jī)體內(nèi)源性抗氧化能力的重要指標(biāo)。

研究[8]表明,不同劑量的 PC能增強(qiáng)大鼠缺血再灌注損傷腦組織中的 SOD活性,降低 MDA含量。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PC組大鼠腦組織含水量低于手術(shù)組,說(shuō)明PC可減輕 SAH后腦水腫。有研究表明,自由基可激活中性粒細(xì)胞信號(hào)通路,嚴(yán)重?fù)p傷血腦屏障,啟動(dòng)某些與離子轉(zhuǎn)運(yùn)和血管通透性有關(guān)的分子通路,引起腦水腫[9]。PC可通過(guò)清除氧自由基,從而減輕腦水腫。本研究還發(fā)現(xiàn),PC組、手術(shù)組 MDA含量高于對(duì)照組、SOD活性低于對(duì)照組;PC組大鼠腦組織 MDA含量低于手術(shù)組,SOD活性高于手術(shù)組。說(shuō)明 SAH發(fā)病中存在 MDA含量升高和 SOD活性降低,而 PC對(duì) SAH后氧自由基的產(chǎn)生有明顯的抑制作用。PC可能通過(guò)增加腦組織抗氧化酶的含量,提高機(jī)體的抗氧化能力,清除自由基,從而減少腦細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的損傷、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。

綜上所述,PC可通過(guò)清除氧自由基、減輕腦水腫,對(duì) SAH后大鼠腦組織發(fā)揮保護(hù)作用。然而,SAH繼發(fā)性腦損害是多因素共同作用的結(jié)果,PC的確切作用尚待進(jìn)一步研究證實(shí)。

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