劉海燕，蔣紅霞

(河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 周口 466000)

硫酸阿托品(AtropineSulfate)屬莨菪堿類(lèi)生物堿，是一種常用的抗膽堿藥，其注射劑的含量測(cè)定采用經(jīng)典的酸性染料比色法[1]。該法操作比較煩瑣，影響因素多[2]。參照有關(guān)文獻(xiàn)[3－4]，筆者建立了測(cè)定其含量的高效液相色譜(HPLC)法，可以消除輔料的干擾，簡(jiǎn)化分析步驟，結(jié)果比較滿(mǎn)意?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010CHT型全自動(dòng)高效液相色譜儀(日本島津);UV Detector紫外檢測(cè)器;92SM－202A－DR型電子分析天平;V－530型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)。硫酸阿托品對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100040－200510);硫酸阿托品注射液(鄭州羚銳制藥股份有限公司，批號(hào)分別為0910072，1001081，1006162，規(guī)格為2∶1 mg);乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、庚烷磺酸鈉、氫氧化鈉、三氯甲烷、溴甲酚綠和鄰苯二甲酸氫鉀均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:30 ℃;流動(dòng)相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.0025 mol/L庚烷磺酸鈉，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié) pH至 5.0)－乙腈(82∶18);流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL;檢測(cè)波長(zhǎng):225 nm。外標(biāo)法計(jì)算峰面積。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取于120℃干燥的硫酸阿托品對(duì)照品50.12 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液25 mL置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取供試品25 mL，置50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):按處方比例及制備工藝制備不含硫酸阿托品的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液，并按上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在硫酸阿托品對(duì)照品出峰位置未見(jiàn)干擾峰，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 0.5，1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加水至刻度，搖勻，各精密量取20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積 A為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量 C(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程 A=389800 C+11262，r=0.99975(n=7)。結(jié)果表明，硫酸阿托品進(jìn)樣量在1.0024～10.024μg范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一份對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果峰面積積分值的 RSD為0.56%(n=6)，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取同一供試品溶液，在室溫下分別于0，1，3，5，8，12 h時(shí)進(jìn)樣，依法測(cè)定。結(jié)果峰面積積分值的 RSD為0.93%(n=6)，表明硫酸阿托品在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取供試品，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，并按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果硫酸阿托品平均含量為標(biāo)示含量的 99.1%，RSD 為 1.05%(n=6)。

加樣回收試驗(yàn):精密量取已知含量的樣品(批號(hào)為0910072，含量為0.4955 g/L)10 mL，共6份，置50 mL量瓶中，每2份為1組，分別精密加入對(duì)照品貯備液 2.5，5.0，7.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。照擬訂的色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批供試品，按擬訂的方法制備供試品溶液并測(cè)定含量，同時(shí)以藥典中的含量測(cè)定方法測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

取對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在225 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選用225 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。本試驗(yàn)比較了幾種不同流動(dòng)相體系，如0.025 mol/L磷酸(以三乙胺調(diào) pH為 3.0)－乙腈 (82 ∶18)，甲醇 (加0.05%三乙胺，用磷酸調(diào) pH=5.8)－水(50∶50)0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.0025 mol/L庚烷磺酸鈉)－(82∶18)－乙腈(用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH至5.0)，發(fā)現(xiàn)最后1種流動(dòng)相體系所得色譜圖峰形較好、保留時(shí)間適中，且峰面積和出峰時(shí)間較穩(wěn)定，故采用此種流動(dòng)相。

表1 硫酸阿托品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(標(biāo)示量%，n=3)

原標(biāo)準(zhǔn)中硫酸阿托品含量測(cè)定方法為酸性染料提取后紫外分光法[1]，此方法操作較復(fù)雜，其中用三氯甲烷提取易造成誤差，而且三氯甲烷對(duì)人體危害較大。采用高效液相色譜法，方法專(zhuān)屬性較強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可更有效地控制本品的質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:982－983.

[2]安登魁.現(xiàn)代藥物分析選論[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2001:276－277.

[3]刑利平，歐世強(qiáng).高效液相色譜法測(cè)定硫酸阿托品片的含量[J].華夏醫(yī)藥，1999，12(4):24－25.

[4]林慧青，李 潔.高效液相色譜法測(cè)定硫酸阿托品滴眼液的含量[D].上海:中國(guó)科學(xué)院上海冶金研究所，2000.