潘海敏，方慧華，嚴(yán)士海

(江蘇省中醫(yī)院1.藥劑科;2.科技處，南京 210029)

鬼針草藥材為菊科管狀花亞科鬼針屬植物的干燥全草，其藥用歷史悠久，始載于唐·陳藏器《本草拾遺》［1］。鬼針草有清熱解毒、散瘀消腫之功效，目前國內(nèi)報道鬼針草具有抗菌、抗?jié)?、抗肝癌、降脂及降壓作用?-3］。文獻(xiàn)［4］報道，鬼針草中黃酮類化合物含有金絲桃苷、奧卡寧、海生菊苷等，是鬼針草中的主要有效成分。為揭示其心血管藥理效應(yīng)，筆者在本實(shí)驗(yàn)采用比濁法，以二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)及凝血酶(thrombase，Thr)作誘導(dǎo)劑，考察鬼針草總黃酮對ADP及Thr誘導(dǎo)的兔血小板聚集的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 血小板聚集及血凝測定儀(北京世帝科學(xué)儀器公司)，二磷酸腺苷(ADP，Sigma公司)，凝血酶(Thr，Sigma公司)，枸櫞酸鈉(BDH公司)。鬼針草總黃酮(南京中醫(yī)藥大學(xué)提供，批號:20090604)，丹參注射液(正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號:0907082)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物 日本大耳白家兔，體質(zhì)量1.8～2.2 kg，由南京青龍山實(shí)驗(yàn)動物繁殖廠提供，動物許可證號SCXK(蘇)2007-2008。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血漿樣品的制備 取日本大耳白家兔6只，頸總動脈放血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝全血，600 r·min-1離心10 min，吸取上層富血小板血漿(PRP)。再將所剩血液3 500 r·min-1，10 min離心，吸取上清液為貧血小板血漿(PPP)。

1.3.2 動物分組及血小板聚集率測定 用PPP調(diào)零，以PRP為血小板供體，實(shí)驗(yàn)分為6組，分別為空白對照組，溶媒對照組(給予二甲亞砜溶液)，低、中、高劑量藥物組(給予25，50，100 mg·mL-1鬼針草總黃酮溶液)，丹參注射液組，每組6個平行樣。分別取PRP250 μL，與不同濃度的藥物溶液10 μL 混合，空白對照組給予0.9%氯化鈉溶液。37℃溫育3 min后，分別加入 20 μmol·L-1的 ADP 20 μL、15 U·mL-1的Thr 20 μL，按文獻(xiàn)［1］方法，用血小板聚集及血凝測定儀測定血小板聚集率，并計(jì)算抑制率。抑制率(%)=(溶媒對照組最大聚集率－給藥組最大聚集率)/溶媒對照組最大聚集率×100%［5-6］。

2 結(jié)果

2.1 對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集最大聚集率的影響結(jié)果見表1。鬼針草總黃酮對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集具有較好的抑制作用。

表1 6組ADP誘導(dǎo)的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.1 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by ADP in six groups %，±s

表1 6組ADP誘導(dǎo)的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.1 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by ADP in six groups %，±s

與溶媒對照組比較，*1P＜0.01Compared with vehicle control group，*1P＜0.01

組別 樣本/份濃度/(mg·mL-1)最大聚集率 抑制率鬼針草總黃酮提取物高劑量藥物組 6 100 26.40±4.27*1 45.82中劑量藥物組 6 50 34.77±4.56*1 28.65低劑量藥物組 6 25 45.88±4.43 5.85丹參注射液組 6 10 μL 37.05±6.24*1 23.97空白對照組 6 51.67±6.06 …溶媒對照組 6 48.73±4.02…

2.2 對Thr誘導(dǎo)的血小板聚集最大聚集率的影響結(jié)果見表2。鬼針草總黃酮對Thr誘導(dǎo)的血小板聚集具有較好的抑制作用。

表2 6組Thr誘導(dǎo)的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.2 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by Thr in six groups %，±s

表2 6組Thr誘導(dǎo)的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.2 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by Thr in six groups %，±s

與溶媒對照組比較，*1P＜0.01;與空白對照組比較，*2P＜0.05Compared with vehicle control group，*1P＜0.01;Compared with blank control group，*2P＜0.05

組別 樣本/份濃度/(mg·mL-1)最大聚集率 抑制率鬼針草總黃酮提取物高劑量藥物組 6 100 29.73±4.74*1 48.36中劑量藥物組 6 50 38.10±5.84*1 33.82低劑量藥物組 6 25 47.55±5.36 17.40丹參注射液組 6 10 μL 38.72±5.64*1 32.74空白對照組 6 63.33±3.94 …溶媒對照組 6 57.57±3.36*2…

3 討論

血小板聚集指血小板被活化后互相之間黏附并形成聚集物的現(xiàn)象，是形成血栓的重要原因。ADP和Thr等誘導(dǎo)劑均能誘導(dǎo)血小板的活化，但其誘導(dǎo)強(qiáng)度和機(jī)制不同。ADP屬于中等強(qiáng)度血小板聚集誘導(dǎo)劑，主要通過作用于血小板膜使有限的顆粒內(nèi)容物釋放，經(jīng)G蛋白連接受體，促進(jìn)細(xì)胞外鈣內(nèi)流而達(dá)到促進(jìn)血小板聚集的作用。而Thr則是一種強(qiáng)誘導(dǎo)劑，可引起不依賴于血小板顆粒分泌的聚集反應(yīng)，通過凝血酶-血小板膜蛋白糖相互作用誘導(dǎo)聚集反應(yīng)。

鬼針草是我國常用的中藥，具有較大的開發(fā)和應(yīng)用前景。目前，對鬼針草藥材及其提取物已經(jīng)有較多的研究，其化學(xué)成分也不斷得到闡明。鬼針草總黃酮是保肝作用與降低血壓的有效成分［7-9］，鬼針草提取物還具有對抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)與降低血脂的作用［10］。本研究結(jié)果提示，鬼針草總黃酮具有較好的抗血栓作用，能夠抑制ADP和凝血酶所誘導(dǎo)的血小板聚集，劑量效應(yīng)明顯。

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