高 羽 ，李榮秀，?；勖?，范國榮，高亞萍，呂麗華

1.河北省計劃生育科學技術研究院，河北石家莊 050071；2.河北省承德市雙灤區(qū)人民醫(yī)院，河北承德 0670003.河北省行唐縣計劃生育技術服務站，河北行唐 050600

國內外許多研究報道，由于環(huán)境污染和不良飲食習慣所致的一些營養(yǎng)素缺乏等因素會使精液質量下降[1]。一些有害化學物質，如鉛、鎘、一氧化氮，電磁輻射和鋅元素缺乏等因素介導機體的組織細胞脂質過氧化反應，產生過多的氧自由基和脂質降解產物丙二醛（MDA）損傷精子，使精液質量降低。有關研究資料表明[2-3]，使用具有抗氧化作用的營養(yǎng)素，可拮抗氧自由基、汞、砷、鉛、隔等有害物質對精子的損傷，提高精子質量。為了觀察一些營養(yǎng)素的復方制劑改善精子質量的效果，本文選擇精液質量低下的不育男性患者服用營養(yǎng)素，以觀察服用營養(yǎng)素前后不育患者精液質量、血清及精漿中MDA含量的變化。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集與處理

1.1.1 精液標本的收集 標本來源于2009年1月～2010年12月前來河北省計劃生育科學技術研究院和青縣計劃生育技術服務站男科門診就診的患者176例，不育時間為1年以上，年齡22～35歲。受試者禁欲3～7 d，取樣前3個月內未服用對精子有影響的食物或藥物，6個月內未使用過激素，除去精液中白細胞異常增多、精索靜脈曲張、輸精管梗阻和嚴重的全身性疾病患者。手淫法收集精液，標本置37℃液化后作精液常規(guī)檢查，余下精液3000 r/min離心5 min，分離精漿用于MDA檢測。按照世界衛(wèi)生組織（WHO）的精液分析標準，選擇精子活力（a+b）級<50%、精子活率<60%、精子形態(tài)畸形率>30%的患者。本試驗受試者自身對照分為服用營養(yǎng)素前組和服用營養(yǎng)素后組。男性不育患者在服用營養(yǎng)素前半個月內進行2次精液常規(guī)檢查，在服用營養(yǎng)素后的1、2、3個月末時各進行1次精液常規(guī)檢查。

1.1.2 血樣采集 取肘內側靜脈血，采血區(qū)皮膚依次經過碘酒、酒精棉球消毒，用一次性真空采血管取靜脈血約2 ml，室溫靜置20 min后,2000 r/min離心5 min，取血清于塑料具塞離心管中，-20℃保存?zhèn)溆?。在服用營養(yǎng)素前7 d內和服用營養(yǎng)素后1個月末時各采血1次，進行MDA含量測定。

1.1.3 營養(yǎng)素服用法與用量 溢德生牌營養(yǎng)素膠囊由石家莊經濟技術開發(fā)區(qū)利生技術開發(fā)有限公司提供，組成成分為維生素C、維生素E、鋅和硒，規(guī)格0.25 g/粒。用法：口服，3粒/次，1次/d，飯后半小時后用溫水送服。男性不育患者在第二次精液常規(guī)檢測后開始服用，連續(xù)服用3個月。

1.2 方法

精液常規(guī)檢驗使用計算機輔助精子分析儀（CASA北京偉力精液分析系統(tǒng)）進行精液常規(guī)檢查。MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法測定，試劑盒均購自上海源葉生物科技有限公司，按說明書嚴格操作。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 10.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示，服用營養(yǎng)素前后所有均數(shù)的比較采用配對t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 男性不育患者服用營養(yǎng)素前后精子參數(shù)各項均值比較

服用營養(yǎng)素后精子密度和精子活力明顯高于服用前（P＜0.05），精子畸形率明顯下降（P＜0.05），精子活率高于服用前，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），表明服用營養(yǎng)素后精子質量有明顯改善。見表1。

2.2 服用營養(yǎng)素后血清和精漿中MAD水平

服用營養(yǎng)素后血清和精漿中MAD均明顯降低，與服用前比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 服用營養(yǎng)素前后精子質量的變化（）

表1 服用營養(yǎng)素前后精子質量的變化（）

注：與服用營養(yǎng)素前比較，*P<0.05

時間 例數(shù) 精子密度（×106/ml）服用營養(yǎng)素前服用營養(yǎng)素后1個月服用營養(yǎng)素后2個月服用營養(yǎng)素后3個月17617617617631.96±11.0946.35±12.01*50.75±10.56*51.25±11.09*精子活力（a+b）（%）27.31±11.9131.01±12.65*33.06±10.86*35.02±13.35*精子活率（%）57.09±6.3163.31±9.8666.27±9.7967.61±8.73精子畸形率（%）39.85±8.4723.79±8.65*24.29±9.36*20.89±9.67*

表2 服用營養(yǎng)素前后血清和精漿中MAD含量的變化（，nmol/ml）

表2 服用營養(yǎng)素前后血清和精漿中MAD含量的變化（，nmol/ml）

注：與服用營養(yǎng)素前比較，*P<0.05

時間 例數(shù)176176服用營養(yǎng)素前服用營養(yǎng)素后血清0.166±0.0810.105±0.016*精漿0.186±0.0870.091±0.013*

3 討論

環(huán)境污染、鉛鎘含量升高、鋅含量的降低[4]和病原體的侵襲等因素可使組織細胞產生過多的活性氧（ROS）和MDA，精子細胞對這些物質較為敏感，因此易受到損傷。精液中ROS主要來源有2種途徑，白細胞和未成熟或形態(tài)異常的精子，ROS增高可使脂質降解產物MDA增多，MDA的增多標志著過氧化反應程度的增加。本試驗排除了精液中白細胞增多、生殖器和全身性疾病因素的影響，結果表明，不育癥患者MDA升高是造成精子質量下降的主要原因，也是男性不育的主要因素，營養(yǎng)素能使MDA含量迅速下降，精子質量迅速提高。

營養(yǎng)素中的維生素C存在于細胞外液中，抑制羥氫氧基、過氧化物和過氧化氫自由基，防止精子凝集，并且有助于維生素E重復利用。維生素E在細胞膜上發(fā)揮作用，抑制H2O2，保護精子膜免受脂質過氧化反應的攻擊。鋅參與組成過氧化物歧化酶，鋅的缺乏還可影響下丘腦—垂體—性腺軸，使垂體分泌的促性腺激素減少，導致性腺功能減退，睪酮下降，精子數(shù)量減少，質量降低，蛋白質合成障礙，精子形成停滯，精子活動受到影響。硒是谷胱甘肽過氧化物酶復合體的必要組成部分，具有抗精子脂肪酸過氧化功能，它可協(xié)同維生素E發(fā)揮作用，使少精癥、精子活力低下，嚴重精子畸形癥得到改善。

ROS對精子的危害已成為公認的事實，使用營養(yǎng)素能夠改善精液質量的文章已有人報道[5-6]。根據(jù)營養(yǎng)素的上述作用，其可能是通過拮抗ROS對精子細胞的損傷，使MDA含量下降，使精液質量得到改善。

本試驗結果表明，營養(yǎng)素能夠迅速、有效提高精子密度、精子活力和降低精子畸形率，MDA含量的減少表明脂質過氧化程度降低，從而對精子的損傷減少。

本研究結果為男性不育者和接受輔助生殖技術治療前及欲求優(yōu)生的男性補充營養(yǎng)素提供了依據(jù)，MDA的測定可作為男性不育癥和過氧化反應增強的一個診斷指標。

[1]李文英.環(huán)境與精液質量的研究進展[J].國外醫(yī)學:計劃生育分冊,2003,22(3):169-171.

[2]劉容菊,李志凌.輔助生殖技術中預防活性氧對精子的損傷[J].生殖與避孕,2007,27(3):213-217.

[3]Yentilmen E,Yildirmis S,Yulug E,et al.Ham’s F-10 medium and Ham’s F-10 medium plus vitamin E have protective effect against oxidative stress in human semen[J].Urology,2006,67(2):384-387.

[4]張紀云.精漿中SOD測定及臨床意義[J].男性學雜志,1994,8(3):164-165.

[5]李紅,楊學農,趙萌,等.不育男性的精子DNA完整性與活性氧及尿酸的關系[J].中國計劃生育學雜志,2010,3(174):149-151.

[6]姜全心.男性不育患者精漿SOD和MDA含量的觀察[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2005,4(4):223-224.