寧 琳，賈 卉

1.陜西省婦幼保健院婦科，陜西西安 710003；2.陜西省婦幼保健院醫(yī)學(xué)實驗中心，陜西西安 710003

習(xí)慣性流產(chǎn)（RSA）為自然流產(chǎn)連續(xù)3次以上者，每次流產(chǎn)往往發(fā)生在同一妊娠月份。RSA的原因大多與孕婦黃體功能不全、甲狀腺功能低下、子宮發(fā)育異常、染色體異常、自身免疫等有關(guān)。人巨細胞病毒（HCMV）是宮內(nèi)感染最常見的病原體之一，易導(dǎo)致流產(chǎn)、死產(chǎn)、新生兒畸形、智力低下等[1]。傳統(tǒng)的HCMV-DNA檢查不能很好的顯示病毒的活動狀態(tài)，本文筆者采用免疫熒光技術(shù)檢測外周單個核細胞HCMVpp65抗原，探討HCMV活動性感染與習(xí)慣性流產(chǎn)的關(guān)系，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年5月～2010年5月本院婦產(chǎn)科收治的反復(fù)性流產(chǎn)患者40例作為研究組，年齡25～37歲，平均（26.5±3.7）歲；全部孕婦均有不明原因3次及以上自然流產(chǎn)，平均流產(chǎn)（3.5±1.2）次；流產(chǎn)時間為妊娠1～3個月。選擇同期體檢正常孕婦50例作為對照組，年齡23～35歲，平均（25.7±3.2）歲，妊娠1～3個月。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

兩組患者均采集外周靜脈血5 ml，離心后分離血漿及外周血有核細胞，無菌PBS洗滌后計數(shù)細胞，制作外周血單個核細胞涂片（2×105/片）并固定。采用免疫熒光法（美國DAKO公司試劑盒）檢測外周血單個核細胞HCMVpp65抗原，嚴(yán)格按說明書操作。熒光顯微鏡下觀察每片HCMVpp65抗原陽性細胞數(shù)≥10個為陽性。采用HCMV-DNA熒光定量PCR試劑盒（中山大學(xué)達安基因診斷公司）以及全自動熒光定量PCR顯示儀（美國Roche公司），檢測外周血HCMV-DNA含量。HCMV-DNA拷貝數(shù)≥103/ml為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用spearman相關(guān)性檢驗進行HCMVpp65抗原陽性細胞數(shù)與HCMV-DNA拷貝數(shù)的相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血有核細胞HCMVpp65抗原陽性率比較

研究組外周血有核細胞HCMVpp65抗原陽性率明顯高于對照組，兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組HCMVpp65抗原陽性率比較（例）

2.2 研究組不同流產(chǎn)次數(shù)孕婦HCMVpp65抗原陽性率比較

研究組中流產(chǎn)次數(shù)多的孕婦，HCMVpp65抗原陽性率明顯高于流產(chǎn)次數(shù)相對較少的孕婦，兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明HCMVpp65抗原陽性率增高孕婦流產(chǎn)的危險性也升高。見表2。

表2 研究組不同流產(chǎn)次數(shù)孕婦HCMVpp65抗原陽性率比較（例）

2.3 研究組HCMVpp65抗原與HCMV-DNA檢測的一致性

研究組中實時熒光定量PCR檢測HCMV-DNA和免疫熒光法檢測HCMVpp65抗原的一致性較好，達92.5%（37/40）。見表3。并且每份標(biāo)本中HCMVpp65抗原陽性細胞數(shù)與HCMV-DNA 拷貝數(shù)呈正相關(guān)（r=0.647，P<0.05）。

表3 研究組HCMVpp65抗原與HCMV-DNA檢測結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

HCMV是人類皰疹病毒的一種，有典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)，在人群中廣泛傳播。程麗平等[2]報道顯示，我國成人HCMV感染率可達80%～97%，并且多為隱性感染。HCMV可由唾液、血液、尿液、乳液、精液、子宮分泌物等攜帶，通過口腔、生殖道、胎盤、出血等途徑轉(zhuǎn)移[3]。正常情況下患者無明顯臨床癥狀，當(dāng)機體免疫功能下降時，病毒激活發(fā)生顯性感染。妊娠期婦女免疫力下降，容易導(dǎo)致病毒激活[4-5]，尤其是妊娠早期，病毒通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，可引起胎兒神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等損害而發(fā)生流產(chǎn)。

傳統(tǒng)的HCMV檢測多采用HCMV-DNA及抗HCMV IgM抗體檢測，但該方法不能很好地顯示病毒的活動狀態(tài)。近年來孕婦外周血單個核細胞HCMVpp65抗原檢測逐漸成為檢測HCMV活動性感染的標(biāo)準(zhǔn)[6]。本研究結(jié)果顯示，HCMVpp65抗原檢測與HCMV-DNA定量檢測一致性達92.5%，且HCMVpp65抗原陽性細胞數(shù)與HCMV-DNA拷貝數(shù)呈正相關(guān)（r=0.64、P＜0.05），從而證實了 HCMVpp65 抗原檢測在判斷HCMV活動性感染中的有效性。本研究結(jié)果還顯示，RSA孕婦外周血有核細胞HCMVpp65抗原陽性率明顯高于正常孕婦，并且隨著HCMVpp65抗原陽性率的升高，孕婦流產(chǎn)次數(shù)增加，提示HCMV活動性感染與孕婦RSA有密切關(guān)系。至于HCMV活動性感染導(dǎo)致孕婦流產(chǎn)的具體機制尚需進一步研究證實。

綜上所述，HCMV活動性感染與孕婦RSA有密切關(guān)系，外周血有核細胞HCMVpp65抗原檢測，對判斷孕婦HCMV活動性感染，早期預(yù)防RSA有較高的應(yīng)用價值。

[1]蘆雅蘋,李冬梅,張燕玲,等.人巨細胞病毒感染與自然流產(chǎn)的關(guān)系[J].廣東醫(yī)學(xué),2006,27(3):406-407.

[2]程麗平,韓愛民.自然流產(chǎn)婦女中人巨細胞病毒感染調(diào)查[J].山西臨床醫(yī)藥,2001,10(3):204-205.

[3]張富青,宮亞紅,劉毅,等.早孕自然流產(chǎn)婦女人巨細胞病毒感染的臨床分析[J].中國婦幼保健,2004,19(7):97-98.

[4]Nigro G,Adler SP,La-Torrre R,et al.Passive immunization during pregnancy for corgenital cytomegalovirus infection [J].N Engl J MED,2005,353(13):1350-1362.

[5]夏吉榮,王富蘭,祝繼華.人巨細胞病毒活動性感染的分析[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2003,28(2):195-197.

[6]Boeckh M,Huang M,Ferrenberg J,et al.Optimization of quantitative detection of cytomegalovirus DNA in plasma by Real-Time PCR[J].J Clin Microbiol,2005,42:1142-1148.