陳志清，張 杰，蔣劍平

1.廣東省佛山市三水區(qū)婦幼保健院婦科，廣東 佛山 528100；2.廣東省佛山市三水區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東 佛山 528100；3.廣東省佛山市三水區(qū)婦幼保健院醫(yī)務(wù)科，廣東 佛山 528100

宮頸癌是女性常見腫瘤之一，常危及患者生命。隨著發(fā)病原因的初明確及癌前篩查技術(shù)的提高，得益于早期診斷和及時(shí)治療。盡管初步認(rèn)識(shí)到宮頸癌是人乳頭瘤病毒（HPV）感染后引起的疾病，確切的發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚[1]。越來越多的證據(jù)表明，信號(hào)通路不僅在人體胚胎發(fā)育調(diào)控中起至關(guān)重要的作用，而且它們?cè)谌梭w疾病的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮著重要作用，其中信號(hào)通路與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展可能有一定關(guān)系[2]。本研究旨在探討研究信號(hào)通路分子（SHH）、乳頭狀甲狀腺癌基因（PTC1）、鋅指轉(zhuǎn)錄因子（GLI1）在 CIN1、CIN2、CIN3 中的表達(dá)，探討SHH、PTC1、GLI1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇我院婦產(chǎn)科2008年1月～2011年6月90例患有子宮疾病的患者，所有標(biāo)本均是經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí) CIN1（CIN1 組）、CIN2（CIN2 組）、CIN3（CIN3 組）的病理標(biāo)本。患者年齡最小26歲，最大52歲，平均（39.5±6.5）歲。排除月經(jīng)無規(guī)律，合并內(nèi)科癥，術(shù)前6個(gè)月接受激素治療等患者。同時(shí)選擇正常宮頸上皮（正常宮頸上皮組）及宮頸癌病理標(biāo)本（宮頸癌組）各30例作為對(duì)照。各組年齡、婚育史等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)本經(jīng)常規(guī)福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)組織切片成4 mm厚。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水化，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3 min×3次；3%H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶 10 min，PBS沖洗 3 min×3次；滴加即用型鼠抗人 PTC1、GLI1、SHH/Bax單克隆抗體，室溫下孵育2 h；PBS沖洗3 min×3次，滴加即用型生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG，室溫下孵育20 min；PBS沖洗3 min×3次，滴加即用型鏈霉素生物素蛋白30 min；PBS沖洗3 min×3次，切片滴加新配置的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色，蘇木精復(fù)染核8 min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。采用雙盲法進(jìn)行結(jié)果判定，在高倍鏡下觀察，根據(jù)著色強(qiáng)度和面積進(jìn)行綜合評(píng)分：①著色強(qiáng)度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；②著色面積：＜5%為 0分，5%～25%為 1分，26%～50%為 2分，51%～75% 為3分，＞75%為 4分。以上兩項(xiàng)結(jié)果相加，1～2分為陰性，3～5分為陽性，6～7分為強(qiáng)陽性。③每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 信號(hào)通路分子表達(dá)情況比較

SHH主要表達(dá)于腺體細(xì)胞的胞漿內(nèi)，在各組的陽性表達(dá)率分別為：正常宮頸上皮組為13.3%，CIN1組為40.0%，CIN2組為63.3%，CIN3組為83.3%及宮頸癌組為93.3%，且強(qiáng)陽性率隨陽性率增高而明顯增高。CIN1、CIN2、CIN13組及宮頸癌組的陽性率與正常宮頸上皮組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CIN3組的陽性和強(qiáng)陽性表達(dá)與宮頸癌組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 5組信號(hào)通路分子表達(dá)情況比較[n（%）]

2.2 乳頭狀甲狀腺癌基因、鋅指轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)情況比較

PTC1、GLI1在胞質(zhì)及胞膜上陽性染色多呈彌漫狀分布。

PTC1在各組的陽性表達(dá)率，正常宮頸上皮組為23.3%，CIN1組為40.0%，CIN2組為43.3%，CIN3組為63.3%及宮頸癌組為73.3%。CIN1、CIN2、CIN13組及宮頸癌組與正常宮頸上皮組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CIN3組與宮頸癌組比較，陽性和強(qiáng)陽性表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 5組乳頭狀甲狀腺癌基因表達(dá)情況比較[n（%）]

GLI1在各組的陽性表達(dá)率分別為：正常宮頸上皮組10.0%、CIN1組 16.7%、CIN2組 26.7%、CIN3組 50.0%及宮頸癌組56.7%。CIN1、CIN2、CIN13組及宮頸癌組與正常宮頸上皮組比較，陽性表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CIN3組與宮頸癌組比較，陽性和強(qiáng)陽性表達(dá)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 見表 3。

表3 5組鋅指轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)情況比較[n（%）]

3 討論

宮頸癌是婦科最常見惡性腫瘤之一。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與多種因素相關(guān)，如HPV感染、遺傳不定性、多種腫瘤抑制基因失活、癌基因激活、端粒酶活化等。有研究表明Sonic Hedgehog（SHH）信號(hào)通路在宮頸癌發(fā)生中起著重要作用[3-4]。

在SHH信號(hào)通路中，SHH基因定位于7號(hào)染色體長臂遠(yuǎn)端，它編碼生成SHH前體蛋白，經(jīng)過自我水解、加工產(chǎn)生一個(gè)固定或者靠近細(xì)胞表面的氨基末端分泌肽和一個(gè)糖基化的羧基末端肽段。在發(fā)育成熟的宮頸組織中，SHH蛋白是由宮頸壁細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的，Benesch等[5]認(rèn)為它在維持宮頸組織的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和正常胃上皮組織的分化中扮演重要角色。有研究表明，SHH基因與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如在基底細(xì)胞癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌以及膀胱癌都有高表達(dá)[6]，這表明SHH在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中確有其重要作用。PTC1是新發(fā)現(xiàn)的一種SHH跨膜蛋白質(zhì)受體，其胞外區(qū)與PTC2具有高度同源性，其功能尚不清。Dutton等[7]認(rèn)為，Hedgehog（Hh）信號(hào)通路可能通過上調(diào)PTC1的表達(dá)促進(jìn)胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。聯(lián)合檢測(cè)胃癌組織中Shh、Ptc1蛋白水平，可作為胃癌預(yù)后的客觀參考指標(biāo)。SHH信號(hào)通路中的核轉(zhuǎn)錄因子GLI有 3種， 分別命名為 GLI1、GLI2、GLI3，3種 GLI蛋白之間氨基序列十分相似，都含有5個(gè)高度保守的串聯(lián)鋅指結(jié)構(gòu)以及它們之間的組氨酸一半胱氨酸連接序列。但3種GLI蛋白卻發(fā)揮不同的核轉(zhuǎn)錄激活或抑制功能，GLI1僅有激活功能，而GLI2、GLI3同時(shí)具有轉(zhuǎn)錄激活與抑制活性。由于GLI1蛋白在細(xì)胞中的具體定位還沒有統(tǒng)一的結(jié)論，在HCC中GLI1是否調(diào)控C-myc功能及作用，值得進(jìn)一步探討[8]。德國科學(xué)家Ten等分析了229個(gè)樣本，指出GLI1蛋白升高的患者傾向于患有惡性程度更高的腫瘤和更多的轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)，死亡率也隨之升高[9]。

本研究結(jié)果顯示，SHH、PTC1、GLI1在正常宮頸上皮細(xì)胞中多為陰性或少量弱陽性表達(dá)。而宮頸癌前病變及宮頸癌變中的陽性率較在正常宮頸上皮細(xì)胞的陽性率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，SHH、PTC1、GLI1在宮頸CIN3中的表達(dá)與在宮頸癌中的表達(dá)相近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明SHH信號(hào)通路在宮頸癌發(fā)生中起著重要作用

總之，SHH、PTC1、GLI1介導(dǎo)著多種死亡受體誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路，與宮頸癌的癌前病變過程密切相關(guān)，或可成為宮頸癌前病變的輔助診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)。

[1]郎景和.子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥研究的新里程[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2009,40(1):3-4.

[2]劉云建,楊靜,劉皎.特異性阻斷Shh信號(hào)通路對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞系Hep-3B增殖和凋亡的影響[J].中國癌癥雜志,2008,25(11):55-56.

[3]顏朗,孔憲炳.Smo、GLI1在大鼠肝癌中的表達(dá)及維生素D3對(duì)Smo、GLI1的抑制[J].中國癌癥雜志,2011,21(1):88-90.

[4]李鳳賀,辛世杰,楊棟,等.SHH信號(hào)通路在血小板源性生長因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用研究[J].中國血管外科雜志:電子版,2010,2(4):85-87.

[5]Benesch M,Platzbecker U,Ward J,et al.Expression of FLIPlong and FLIPshort in bone m W mononuclear and CD34+cells in patients with myelodysplastie syndrome:correlation with apoptosis[J].Leukemia,2003,17(12):2460-2466.

[6]Wajant H.Targeting the FLICE inhibitory protein(FLIP)in cancer therapy[J].Mol Interv,2003,3(3):124-127.

[7]Dutton A,Young Ls,Murray PG.The role of celhlar FLICE inhibitory protein(c-FUP)in the pathogenesis and treatment of cancer[J].Expert Opin Ther Targets,2006,10(1):27-35.

[8]American Cancer Society.Detailed ide:Endometrial cancer:What are the riskfactors for endometrial cancer[J].American Cancer Society,2005,67(24):3537-3549.

[9]Boehm A,Sen M,Seethala R,et al.Combined targeting of EGFR,STAT3,and Bcl-XI enhances antitumor effects in squamous cell car cinoma of the head and neck[J].Mol Pharmacol,2008,69(25):3806-3816.