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        VIDAS 和VITEK32 在食品衛(wèi)生檢驗中的應用

        2011-07-08 01:02:30仝志琴
        食管疾病 2011年2期
        關鍵詞:單增李斯特國標

        仝志琴

        隨著我國人民生活水平的提高,對食品衛(wèi)生的要求也越來越高。食品微生物檢驗是食品衛(wèi)生監(jiān)督的重要組成部分。傳統(tǒng)的國標檢驗方法要經(jīng)過增菌、分離培養(yǎng)、生化實驗、血清學實驗等,過程繁瑣,需要耗費大量的人力物力。近年來,國內(nèi)外學者在傳統(tǒng)檢驗方法的基礎上,研究和探索出了許多快速的儀器檢驗方法。本文應用VIDAS 和VITEK32 儀器對食品中致病菌進行檢測,并與傳統(tǒng)方法進行比較,以探索快速檢驗方法在食品檢驗中的應用。

        1 材料與方法

        1.1 樣品來源 樣品為本單位公共衛(wèi)生研究所無菌采集的全市超市、集貿(mào)市場、飯店及個體商店肉與肉制品,糧食加工品及米面制品、豆制品,動物性水產(chǎn)品,生食類蔬菜,嬰兒配方食品,冷凍食品,餐飲食品,共257 份,無菌包裝,每件樣品至少250 g,及時送實驗室進行增菌培養(yǎng)。

        1.2 檢驗項目 沙門氏菌、單增李斯特菌。

        1.3 主要材料與儀器 干燥培養(yǎng)基購自北京陸橋技術有限公司;致病菌顯色平板由鄭州貝瑞特公司提供;診斷血清由寧波天潤生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn);全自動熒光免疫分析儀(miniVIDAS)及試紙條由法國生物梅里埃公司生產(chǎn);全自動微生物生化鑒定儀(VITEK32)及鑒定卡由法國生物梅里埃公司生產(chǎn)。

        1.4 檢驗方法 國標法:按照國家標準GB4789-2010 檢驗方法進行檢驗。VIDAS +VITEK32 法:按照miniVIDAS 操作手冊,樣品經(jīng)過前增菌和后增菌,以無菌操作取1 mL 后增菌肉湯,在100℃水浴中加熱15 min,取出0.5 mL 煮沸滅活的肉湯加入VIDAS試劑條的樣品孔中,根據(jù)VIDAS 操作規(guī)程檢驗,得出結果。對于VIDAS 檢驗結果陽性者,挑取后增菌液轉種相應的致病菌顯色平板經(jīng)36℃、24 h 培養(yǎng),再挑取可疑菌落轉種營養(yǎng)瓊脂36℃、24 h 純化后,挑取菌落作革蘭氏染色鏡檢及氧化酶或觸酶、血漿凝固酶試驗。根據(jù)細菌種類選卡片,作外部試驗標記,然后按要求配置一定濁度的菌懸液填充鑒定卡,封口后,放入孵育箱孵育后自動判讀。

        2 結果

        2.1 VIDAS 法與國標法檢測結果比較 ①VIDAS法與國標法檢測沙門氏菌結果比較:共檢測樣品257份,VIDAS 法檢測沙門氏菌陽性樣品11 份,國標法檢測沙門氏菌陽性樣品8 份,這8 份VIDAS 法都檢出陽性。由此計算出檢測沙門氏菌VIDAS 的靈敏度=8/8 ×100% =100%,特異度=246/249 ×100% =98.80,表1。②VIDAS 法與國標法檢測單增李斯特菌結果比較:共檢測樣品257 份,VIDAS 法檢測單增李斯特菌陽性樣品17 份,國標法檢測單增李斯特菌陽性樣品10 份,這10 份VIDAS 法都檢出陽性。由此計算出檢測單增李斯特菌VIDAS 的靈敏度=10/10 ×100% =100%,特異度=240/247 ×100% =97.17%,表2。

        表1 VIDAS 法與國標法檢測沙門氏菌結果比較(n)

        表2 VIDAS 法與國標法檢測單增李斯特菌結果比較(n)

        2.2 VIDAS +VITEK32 法與國標法檢測沙門氏菌結果比較 ①VIDAS+VITEK32 法與國標法檢測沙門氏菌結果比較:共檢測樣品257 份,國標法檢測沙門氏菌陽性樣品8 份,檢出率3.11%,VIDAS+VITEK32 法檢測沙門氏菌陽性樣品9 份檢出率3.50%。為了驗證VIDAS+VITEK 法的可靠性,將VIDAS +VITEK 法做出的陽性菌種再用國標方法進行生化鑒定,結果完全一致。②VIDAS+VITEK32 法與國標法檢測單增李斯特菌結果比較:共檢測樣品257 份,國標法檢測單增李斯特菌陽性樣品10 份,檢出率3. 89%,VIDAS +VITEK32 法檢測單增李斯特菌陽性樣品12 份,檢出率4.67%。將VIDAS +VITEK 法做出的陽性菌種再用國標方法進行生化鑒定,結果完全符合。

        3 討論

        VIDAS 是聯(lián)免疫吸附方法的全自動熒光免疫分析系統(tǒng)。它采用一系列增菌培養(yǎng)基和大量可供選擇的選擇性培養(yǎng)基,促進目標致病菌的生長,使其達到檢測方法對檢測限的要求。另外,針對不同致病菌,VIDAS 采用不同抗體,抗體捕獲樣品目標致病菌的特異性抗原,捕獲后進行洗滌,使抗原抗體復合物與液體中的其他物質分離,然后加入堿性磷酸酶標記的抗體,它只結合目標致病菌的特異性抗原,此時酶量與目標致病菌的量呈一特定比例。由于堿性磷酸酶可分解試劑條中的熒光底物,發(fā)出熒光,因此系統(tǒng)可通過檢測熒光強度,判斷致病菌的含量[1]。VIDAS 檢測能力強、速度快,一般上機后幾十分鐘可以得到初篩結果。從本研究可以看出,VIDAS 法的靈敏度為100%,所以可以作為大批量樣品的篩查,能有效地節(jié)約檢驗時間和工作量。

        VITEK32 對細菌的鑒定是以每種細菌的微量生化反應為基礎。VITEK 測試卡含有多種生化反應孔,內(nèi)含不同反應所需要的底物。將手工分離的待檢純菌落制成符合規(guī)定濁度要求的菌懸液,經(jīng)充填機將菌懸液注入測試卡內(nèi),封口后放入讀數(shù)器中,由讀數(shù)器按光學掃描原理,定時測定各生化介質中指示劑的顯色并在電腦上自動打?。?]。VITEK32 鑒定過程程序化、規(guī)范化,簡便快捷。本研究表明,VITEK32 鑒定結果準確,經(jīng)國標法驗證,結果完全一致,這與黃雪珍等人的研究結果一致[3]。而由于VIDAS 存在一定的假陽性結果,需要進行進一步的鑒定,正好可以利用VITEK32 鑒定快捷、準確的特點進行最終的鑒定[4]。

        國標檢驗方法在篩選可疑菌落的過程中,受許多人為因素的影響,比如平板劃線技術、對可疑菌落的判定經(jīng)驗等,在篩查中難免遺漏。而VIDAS 采用儀器化程序操作,去掉了人為因素,再經(jīng)過VITEK32進一步的鑒定,檢出率有可能高于國標法,從而提高了工作效率和結果的準確性[5]。

        [1]卜慶婧. VIDAS(R)實現(xiàn)致病菌的全自動檢測—訪生物梅里埃公司行業(yè)科學事務總監(jiān)Stan Bailey[J]. 食品安全導刊,2008,6:45.

        [2]楊毓環(huán),陳偉偉. VITEK 全自動微生物檢測系統(tǒng)原理及其應用[J].海峽預防醫(yī)學雜志,2000,6(3):38-39.

        [3]黃雪珍,譚海芳,陳華. 食品中沙門菌污染狀況調(diào)查及VITEK 微生物分析系統(tǒng)的應用效果評價[J]. 熱帶醫(yī)學雜志,2007,3(7):263-265.

        [4]林濤,蘭敏,馮小均,等.VIDAS-VITEK 法快速檢驗食品中大腸O157 的研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2008,8(18):1660-1662.

        [5]王穎,顧其芳,劉誠,等.食品中沙門菌快速檢測方法的探索[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,10(16):1220-1221.

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