仝志琴

隨著我國(guó)人民生活水平的提高，對(duì)食品衛(wèi)生的要求也越來(lái)越高。食品微生物檢驗(yàn)是食品衛(wèi)生監(jiān)督的重要組成部分。傳統(tǒng)的國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)方法要經(jīng)過(guò)增菌、分離培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)等，過(guò)程繁瑣，需要耗費(fèi)大量的人力物力。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法的基礎(chǔ)上，研究和探索出了許多快速的儀器檢驗(yàn)方法。本文應(yīng)用VIDAS 和VITEK32 儀器對(duì)食品中致病菌進(jìn)行檢測(cè)，并與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較，以探索快速檢驗(yàn)方法在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源 樣品為本單位公共衛(wèi)生研究所無(wú)菌采集的全市超市、集貿(mào)市場(chǎng)、飯店及個(gè)體商店肉與肉制品，糧食加工品及米面制品、豆制品，動(dòng)物性水產(chǎn)品，生食類(lèi)蔬菜，嬰兒配方食品，冷凍食品，餐飲食品，共257 份，無(wú)菌包裝，每件樣品至少250 g，及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行增菌培養(yǎng)。

1.2 檢驗(yàn)項(xiàng)目 沙門(mén)氏菌、單增李斯特菌。

1.3 主要材料與儀器 干燥培養(yǎng)基購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限公司;致病菌顯色平板由鄭州貝瑞特公司提供;診斷血清由寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn);全自動(dòng)熒光免疫分析儀(miniVIDAS)及試紙條由法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn);全自動(dòng)微生物生化鑒定儀(VITEK32)及鑒定卡由法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)。

1.4 檢驗(yàn)方法 國(guó)標(biāo)法:按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789－2010 檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。VIDAS +VITEK32 法:按照miniVIDAS 操作手冊(cè)，樣品經(jīng)過(guò)前增菌和后增菌，以無(wú)菌操作取1 mL 后增菌肉湯，在100℃水浴中加熱15 min，取出0.5 mL 煮沸滅活的肉湯加入VIDAS試劑條的樣品孔中，根據(jù)VIDAS 操作規(guī)程檢驗(yàn)，得出結(jié)果。對(duì)于VIDAS 檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性者，挑取后增菌液轉(zhuǎn)種相應(yīng)的致病菌顯色平板經(jīng)36℃、24 h 培養(yǎng)，再挑取可疑菌落轉(zhuǎn)種營(yíng)養(yǎng)瓊脂36℃、24 h 純化后，挑取菌落作革蘭氏染色鏡檢及氧化酶或觸酶、血漿凝固酶試驗(yàn)。根據(jù)細(xì)菌種類(lèi)選卡片，作外部試驗(yàn)標(biāo)記，然后按要求配置一定濁度的菌懸液填充鑒定卡，封口后，放入孵育箱孵育后自動(dòng)判讀。

2 結(jié)果

2.1 VIDAS 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果比較 ①VIDAS法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)沙門(mén)氏菌結(jié)果比較:共檢測(cè)樣品257份，VIDAS 法檢測(cè)沙門(mén)氏菌陽(yáng)性樣品11 份，國(guó)標(biāo)法檢測(cè)沙門(mén)氏菌陽(yáng)性樣品8 份，這8 份VIDAS 法都檢出陽(yáng)性。由此計(jì)算出檢測(cè)沙門(mén)氏菌VIDAS 的靈敏度=8/8 ×100% =100%，特異度=246/249 ×100% =98.80，表1。②VIDAS 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)單增李斯特菌結(jié)果比較:共檢測(cè)樣品257 份，VIDAS 法檢測(cè)單增李斯特菌陽(yáng)性樣品17 份，國(guó)標(biāo)法檢測(cè)單增李斯特菌陽(yáng)性樣品10 份，這10 份VIDAS 法都檢出陽(yáng)性。由此計(jì)算出檢測(cè)單增李斯特菌VIDAS 的靈敏度=10/10 ×100% =100%，特異度=240/247 ×100% =97.17%，表2。

表1 VIDAS 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)沙門(mén)氏菌結(jié)果比較(n)

表2 VIDAS 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)單增李斯特菌結(jié)果比較(n)

2.2 VIDAS +VITEK32 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)沙門(mén)氏菌結(jié)果比較 ①VIDAS+VITEK32 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)沙門(mén)氏菌結(jié)果比較:共檢測(cè)樣品257 份，國(guó)標(biāo)法檢測(cè)沙門(mén)氏菌陽(yáng)性樣品8 份，檢出率3.11%，VIDAS+VITEK32 法檢測(cè)沙門(mén)氏菌陽(yáng)性樣品9 份檢出率3.50%。為了驗(yàn)證VIDAS+VITEK 法的可靠性，將VIDAS +VITEK 法做出的陽(yáng)性菌種再用國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行生化鑒定，結(jié)果完全一致。②VIDAS+VITEK32 法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)單增李斯特菌結(jié)果比較:共檢測(cè)樣品257 份，國(guó)標(biāo)法檢測(cè)單增李斯特菌陽(yáng)性樣品10 份，檢出率3. 89%，VIDAS +VITEK32 法檢測(cè)單增李斯特菌陽(yáng)性樣品12 份，檢出率4.67%。將VIDAS +VITEK 法做出的陽(yáng)性菌種再用國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行生化鑒定，結(jié)果完全符合。

3 討論

VIDAS 是聯(lián)免疫吸附方法的全自動(dòng)熒光免疫分析系統(tǒng)。它采用一系列增菌培養(yǎng)基和大量可供選擇的選擇性培養(yǎng)基，促進(jìn)目標(biāo)致病菌的生長(zhǎng)，使其達(dá)到檢測(cè)方法對(duì)檢測(cè)限的要求。另外，針對(duì)不同致病菌，VIDAS 采用不同抗體，抗體捕獲樣品目標(biāo)致病菌的特異性抗原，捕獲后進(jìn)行洗滌，使抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分離，然后加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體，它只結(jié)合目標(biāo)致病菌的特異性抗原，此時(shí)酶量與目標(biāo)致病菌的量呈一特定比例。由于堿性磷酸酶可分解試劑條中的熒光底物，發(fā)出熒光，因此系統(tǒng)可通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度，判斷致病菌的含量［1］。VIDAS 檢測(cè)能力強(qiáng)、速度快，一般上機(jī)后幾十分鐘可以得到初篩結(jié)果。從本研究可以看出，VIDAS 法的靈敏度為100%，所以可以作為大批量樣品的篩查，能有效地節(jié)約檢驗(yàn)時(shí)間和工作量。

VITEK32 對(duì)細(xì)菌的鑒定是以每種細(xì)菌的微量生化反應(yīng)為基礎(chǔ)。VITEK 測(cè)試卡含有多種生化反應(yīng)孔，內(nèi)含不同反應(yīng)所需要的底物。將手工分離的待檢純菌落制成符合規(guī)定濁度要求的菌懸液，經(jīng)充填機(jī)將菌懸液注入測(cè)試卡內(nèi)，封口后放入讀數(shù)器中，由讀數(shù)器按光學(xué)掃描原理，定時(shí)測(cè)定各生化介質(zhì)中指示劑的顯色并在電腦上自動(dòng)打?。?］。VITEK32 鑒定過(guò)程程序化、規(guī)范化，簡(jiǎn)便快捷。本研究表明，VITEK32 鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，經(jīng)國(guó)標(biāo)法驗(yàn)證，結(jié)果完全一致，這與黃雪珍等人的研究結(jié)果一致［3］。而由于VIDAS 存在一定的假陽(yáng)性結(jié)果，需要進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定，正好可以利用VITEK32 鑒定快捷、準(zhǔn)確的特點(diǎn)進(jìn)行最終的鑒定［4］。

國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)方法在篩選可疑菌落的過(guò)程中，受許多人為因素的影響，比如平板劃線(xiàn)技術(shù)、對(duì)可疑菌落的判定經(jīng)驗(yàn)等，在篩查中難免遺漏。而VIDAS 采用儀器化程序操作，去掉了人為因素，再經(jīng)過(guò)VITEK32進(jìn)一步的鑒定，檢出率有可能高于國(guó)標(biāo)法，從而提高了工作效率和結(jié)果的準(zhǔn)確性［5］。

［1］卜慶婧. VIDAS(R)實(shí)現(xiàn)致病菌的全自動(dòng)檢測(cè)—訪(fǎng)生物梅里埃公司行業(yè)科學(xué)事務(wù)總監(jiān)Stan Bailey［J］. 食品安全導(dǎo)刊，2008，6:45.

［2］楊毓環(huán)，陳偉偉. VITEK 全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)原理及其應(yīng)用［J］.海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2000，6(3):38－39.

［3］黃雪珍，譚海芳，陳華. 食品中沙門(mén)菌污染狀況調(diào)查及VITEK 微生物分析系統(tǒng)的應(yīng)用效果評(píng)價(jià)［J］. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2007，3(7):263－265.

［4］林濤，蘭敏，馮小均，等.VIDAS－VITEK 法快速檢驗(yàn)食品中大腸O157 的研究［J］. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，8(18):1660－1662.

［5］王穎，顧其芳，劉誠(chéng)，等.食品中沙門(mén)菌快速檢測(cè)方法的探索［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2006，10(16):1220－1221.