樊占兵

(灤縣人民醫(yī)院普外一科，河北 灤縣 063700)

生長抑素是存在于胃黏膜、胰島、胃腸道神經(jīng)、垂體后葉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的肽激素，能夠抑制胃分泌和蠕動，以及在下丘腦/垂體中抑制促生長素的釋放，是一種具有廣泛的生物效應(yīng)的環(huán)狀多肽類激素[1]。人工合成生長抑素類似物如醋酸奧曲肽注射液(善寧)是一種天然生長抑素的八肽衍生物，它保留了與生長抑素類似的藥理作用，且作用持久[2]。在動物實驗中，善寧抑制生長激素、胰高糖素和胰島素的作用較生長抑素更強，且對生長激素和胰高糖素的選擇性更高。長期(26周)給藥，大鼠的劑量達1 mg/(kg·d)(腹膜內(nèi)注射)，狗的劑量達0.5 mg/(kg·d)(靜脈注射)，均能被很好耐受[3]。有研究表明，奧曲肽不僅能抑制絕大多數(shù)具有神經(jīng)內(nèi)分泌功能的腫瘤增殖，對普通的實體性腫瘤亦存在抑制作用[4]。黃芪是祖國醫(yī)學里一味常用的中藥，在臨床上應(yīng)用廣泛。也有研究表明，傳統(tǒng)的補氣藥黃芪具有抗腫瘤能力。實驗證實，黃芪在體內(nèi)和體外均有抗腫瘤作用。但二者的報導均較少見。二者聯(lián)合的抗腫瘤研究更少[5]。本研究通過建立人結(jié)腸癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型探討生長抑素聯(lián)合應(yīng)用黃芪對裸鼠結(jié)腸原位移植瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 建立裸鼠人結(jié)腸癌原位移植瘤模型 制作裸鼠人結(jié)腸癌原位種植轉(zhuǎn)移模型，采用BALB/C裸鼠81只[購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司：SCXK(滬)2011—0010]，全為雄性，鼠齡5周左右，體重20 g左右，在SPF級條件下飼養(yǎng)。在超凈生物層流架內(nèi)飼養(yǎng)裸鼠，定期環(huán)境紫外線消毒，保持恒溫、恒濕，高壓蒸汽滅菌籠具、飲水，在無菌罩內(nèi)進行實驗操作。采用中國科學院上海細胞所提供的人的結(jié)腸癌瘤株，在裸鼠腹股溝接種癌細胞的懸液，得到實體瘤后將瘤組織切成2 mm×2 mm×2 mm的瘤塊。用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉實驗裸鼠。無菌罩內(nèi)常規(guī)消毒皮膚，經(jīng)腹正中切口入腹，鉗出盲腸壁，于腸末端切開漿膜，將腫瘤組織塊縫入盲腸切開處。

1.2 實驗分組及所用藥物 采用隨機分組方法將荷瘤鼠分為4組，每組20只，種植后第1天開始腹腔注射藥物，每12 h注射1次，各組所用藥物如下：生長抑素聯(lián)合黃芪組：腹腔注射注射善寧注射液50 μg/(kg·次)+黃芪注射液500 mg/(kg·次)；生長抑素組：腹腔注射善寧注射液50 μg/(kg·次)；黃芪組：腹腔黃芪注射液500 mg/(kg·次)；D組：生理鹽水組，腹腔注射生理鹽水10 μl/(g·d)。

1.3 評價指標 移植瘤瘤體積：種植后35 d，將荷瘤鼠處死，取出原位腫瘤，用游標卡尺測量腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，按公式計算腫瘤體積：V(mm3)=∏/6×(a+b)3。腫瘤抑制率：腫瘤抑制率=(1-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100%。相對腫瘤增殖率：(實驗組相對腫瘤體積/對照組相對腫瘤體積)×100%。肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率：處死小鼠后，檢查肝、肺和腹膜，對可疑轉(zhuǎn)移病灶送病理檢查，肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率=(肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移裸鼠個數(shù)/該組裸鼠總個數(shù))×100%。腹水發(fā)生率：檢查荷瘤鼠結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移情況標本用10%甲醛固定、包埋后蘇木精一伊紅染色，作組織病理學檢測。觀察腹水出現(xiàn)情況。腹水發(fā)生率=(腹水發(fā)生裸鼠數(shù)/該組裸鼠總個數(shù))×100%。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計學分析軟件包進行數(shù)據(jù)處理，計量資料采用均值±標準差（±s）表示，計量資料行t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 四組裸鼠平均移植瘤瘤體積的比較 生長抑素聯(lián)合黃芪組的平均移植瘤瘤體積小于其他三組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；生長抑素組與黃芪組的平均移植瘤瘤體積差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而生理鹽水組的平均移植瘤瘤體積最大，見表1。

表1 四組裸鼠的平均移植瘤瘤體積比較（±s）

表1 四組裸鼠的平均移植瘤瘤體積比較（±s）

組別 只數(shù) 移植瘤瘤體積(mm3)t值P值生長抑素聯(lián)合黃芪組生長抑素組黃芪組生理鹽水組20 20 20 20 1061±165 1361±251 1392±326 1698±435＞10.3621 0.3369＜0.01 0.3737＞19.6184＜0.01

2.2 四組裸鼠腫瘤抑制率的比較 生長抑素聯(lián)合黃芪組的腫瘤抑制率高于其他三組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的腫瘤抑制率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 四組裸鼠的腫瘤抑制率比較（±s）

表2 四組裸鼠的腫瘤抑制率比較（±s）

χ2組別生長抑素聯(lián)合黃芪組生長抑素組黃芪組生理鹽水組只數(shù)20 20 20 20腫瘤抑制率(%)89.34±3.45 60.31±6.81 61.52+5.21 0 20.7764 0.6310 P值＜0.01 0.2643

2.3 四組裸鼠相對腫瘤增殖率的比較 生長抑素聯(lián)合黃芪組的相對腫瘤增殖率小于其他三組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的相對腫瘤增殖率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 四組裸鼠的相對腫瘤增殖率比較（±s）

表3 四組裸鼠的相對腫瘤增殖率比較（±s）

組別生長抑素聯(lián)合黃芪組生長抑素組黃芪組生理鹽水組只數(shù)20 20 20 20相對腫瘤增殖率(%)25.62±6.94 53.61±12.36 63.95±15.92 100 χ2 8.8306 2.2943 P值＜0.01 0.0110

2.4 四組裸鼠肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率的比較 生長抑素聯(lián)合黃芪組的肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率(10%)小于其他三組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，生理鹽水組的肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率最大，見表4。

表4 四組裸鼠的肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率比較

2.5 四組裸鼠腹水發(fā)生率的比較 生長抑素聯(lián)合黃芪組的腹水發(fā)生率(10%)小于其他三組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，生長抑素組與黃芪組的腹水發(fā)生率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，D組(生理鹽水組)的腹水發(fā)生率最大，見表5。

表5 四組裸鼠的腹水發(fā)生率比較

3 討論

研究證實生長抑素能抑制不同正常細胞和腫瘤細胞的生長和發(fā)展。在體內(nèi)和體外實驗中，生長抑素類似物對多種實驗室模型顯示出抗腫瘤作用[6]。奧曲肽注射液(善寧)是一種人工合成的天然生長抑素的八肽衍生物，它保留了與生長抑素類似的藥理作用，且作用持久[7]。研究表明，奧曲肽不僅能抑制絕大多數(shù)具有神經(jīng)內(nèi)分泌功能的腫瘤增殖，對普通的實體性腫瘤亦存在抑制作用[8]。黃芪是祖國醫(yī)學里一味常用的中藥，在臨床上應(yīng)用廣泛，而傳統(tǒng)的補氣藥黃芪具有抗腫瘤能力，在體內(nèi)和體外均有抗腫瘤作用[9-11]。本研究通過建立人結(jié)腸癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型探討生長抑素聯(lián)合應(yīng)用黃芪對裸鼠結(jié)腸原位移植瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用。本研究結(jié)果提示生長抑素聯(lián)合黃芪組在抑瘤率和相對腫瘤增值率，肝、肺或腹膜轉(zhuǎn)移率，腹水發(fā)生率等方面均優(yōu)于生長抑素組和黃芪組(P＜0.01)，其具體機制有待進一步研究。

綜上所述，筆者認為生長抑素聯(lián)合應(yīng)用黃芪比單獨應(yīng)用生長抑素或黃芪更能顯著抑制裸鼠結(jié)腸原位移植瘤的生長和轉(zhuǎn)移，臨床可考慮使用。

[1]孫培龍,汪永錄,林萬隆,等.奧曲肽對小白鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用及機制研究[J].中華肝膽外科雜志,2002,8(5)：305-306.

[2]孫培龍,汪永錄,周 正,等.生長抑素對大鼠移植性肝癌VEGF、MMP的影響[J].中華肝膽外科雜志,2004,10(6)：405-407.

[3]Shi W,Teschendorf C,Muzyezka N,et a1.Adeno-associated virus-mediated gene transfer of endostatin inhibits an giogenesis an d tumor growth in vivo[J].Cancer Gene Therapy,2002,9：513-521.

[4]Cho WC,Leung KN.In vitro and in vivo anti.tumor effects of As-tragalus membraneeeus[J].Cancer Lett,2007,252(1)：43-54.

[5]Li YX,Yan QJ,Sun Y,et a1.Antiproliferation and apoptosis of K562 cells by Astragalus Mongholicus Lectin[J].Chin Pharmacol Bull,2009,25(7)：904-907.

[6]劉鵬熙,周瑞芳,譚 敏.黃芪注射液對basal-1ike型乳腺癌MDA-MB-231細胞株增殖和凋亡的影響[J].中華乳腺病雜志,2009,3(2)：28-31.

[7]Liu PX,Zhou RF,Tan M.Efects ofAstragalus injection on proliferation and apoptosis ofbas',fl-like breastcancercellline MDA-MB-231[J].Chin J Breast Dis,2009,3(2)：28-31.

[8]許杜娟,吳 強,楊 雁,等.黃芪總苷的抑瘤作用及其作用機制[J].中國藥理學通報,2003,19(7)：823-826.

[9]Xu DJ,Wu Q,Yang Y,et al.Antitumor activity ofAST and its mechanism of action[J].Chin Pharmacol Bull,2003,19(7)：823-826.

[10]Liu CJ,Wei SX,Li MY,et a1.Studies on inhibition effect of Astragalus injection on human nasopharyngeal carcinoma CNE-2 cell line[J].China Pharm,2005,16(18)：1376-1378.

[11]Ko LJ,Prives C.P53：puzzle and paradigm[J].Genes Dev,1996,10(9)：1054-1072.