張 囡，陳雙璐，錢宇坤

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

清肺丸為本院常用醫(yī)院制劑，由黃芩、橘紅、枳實、桔梗、前胡等15味中藥制成，具有宣肺解表，化痰止咳的功效，主要用于急性氣管炎，風(fēng)熱感冒，咳嗽帶有白痰或黃稠痰。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無含量測定項，文獻(xiàn)中也無相關(guān)報道，為提高其標(biāo)準(zhǔn)，有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法(HPLC)同時測定本品中黃芩苷和柚皮苷的含量，以此作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與材料

儀器：LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津)；LC solution色譜工作站。材料：黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110715-200815)，柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110722-200610)，清肺丸(天津市兒童醫(yī)院，批號20100301、20100401、20100402、20100501)。甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，冰醋酸(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，水為去離子水(自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動相：2%冰醋酸-乙腈(79∶21)；檢測波長283 nm；柱溫30 ℃；流速1 ml/min；進(jìn)樣量10 μl。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于5 000，按柚皮苷計算不低于4 000。色譜見圖1。

2.2溶液制備

2.2．1對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品5.2 mg、柚皮苷對照品4.0 mg，分別置50 ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，得濃度0.104 mg/ml的黃芩苷對照品溶液和濃度0.08 mg/ml 的柚皮苷對照品溶液。

2.2．2供試品溶液的制備 取清肺丸樣品1丸，剪碎，混勻，精密稱定約1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理(功率240 W，頻率45 kHz)45 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2．3陰性對照溶液的制備 按處方配比，分別制備不含黃芩及不含橘紅和枳實的陰性對照，按“2.2.2”項下方法，制得陰性對照溶液。

1.柚皮苷 2.黃芩苷

2.3線性關(guān)系考查 分別精密量取濃度0.104 mg/ml的黃芩苷對照品溶液和濃度0.08 mg/ml 的柚皮苷對照品溶液1.0、3.0、5.0、7.0、10.0和15.0 m1置25 ml量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。黃芩苷和柚皮苷的回歸方程分別為：A=32 089.1C+79.17(r=0.999 9，n=6)和A=28 004.5C+184.00(r=0.999 8，n=6)。結(jié)果表明，黃芩苷在20.8～156 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系；柚皮苷在8.0～120 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

2.4精密度試驗 取濃度0.051 mg/ml黃芩苷和濃度0.040 mg/ml柚皮苷的混合對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測得黃芩苷和柚皮苷峰面積的RSD分別為0.85%和0.76%，表明儀器精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12和24 h，按“2.1”項下色譜條件測定，測得黃芩苷峰平均含量為3.786 mg/g，RSD為0.68%；柚皮苷平均含量為2.561 mg/g，RSD為0.79%，表明樣品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6重現(xiàn)性試驗 取同一批次(批號20100301)樣品6份，分別按“2.2.2”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積。測得樣品中黃芩苷平均含量為3.729 mg/g，RSD為1.37%；柚皮苷的平均含量為2.529 mg/g，RSD為1.55%，結(jié)果表明測定方法重現(xiàn)性良好。

表1 加樣回收試驗

2.7回收率試驗 采用加樣回收法，取已知含量的同一批次(批號20100401)樣品約1 g，9份，精密稱定，按樣品含量的80%、100%、120%加入適量黃芩苷和柚皮苷對照品，按 “2.2.2” 項下制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果黃芩苷平均回收率為99.85%，RSD為0.97%；柚皮苷平均回收率為100.1%，RSD為1.29%。結(jié)果見表1。2.8樣品測定 取清肺丸樣品3批(批號 20100401、20100402、20100501)，按 “2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，測定樣品中黃芩苷和柚皮苷的含量。測得樣品中黃芩苷的含量分別為3.748、3.826和3.795 mg/g；柚皮苷的含量分別為2.568、2.657和2.549 mg/g。

3 討論

3.1黃芩苷為方中黃芩中主要成分[1]，具有抗菌抗炎、清熱解毒的作用，柚皮苷為方中橘紅[2]、枳殼[3]有效成分之一，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤、改善局部微循環(huán)等作用。因此選擇對黃芩苷和柚皮苷進(jìn)行含量測定，可以有效控制黃芩、橘紅與枳殼的質(zhì)量，進(jìn)而控制清肺丸的質(zhì)量。

3.2黃芩苷與柚皮苷在《中國藥典》測定方法中檢測波長分別為280 nm及283 nm[4]，由于樣品中柚皮苷的含量較少，為提高柚皮苷的檢測靈敏度，故選用283 nm作為檢測波長。

3.3本實驗對提取溶劑與提取方法進(jìn)行了篩選，比較了不同比例甲醇、乙醇進(jìn)行回流、超聲的提取效果。最終確定用70%甲醇超聲提取45 min，提取成分含量較高，且操作簡便。

1 李玉萍，熊向源，劉建濤，等.黃芩活性成分的制備工藝和檢測方法研究進(jìn)展.時珍國醫(yī)國藥，2010，12(4)：972

2 周建紅，汪霞，李小曲.HPLC法測定橘紅痰咳顆粒中柚皮苷的含量.中國藥師，2009，12(2)：214

3 梁遠(yuǎn)園，馮彪，祝晨蔯，等.HPLC法測定枳實藥材中橙皮苷與柚皮苷的含量.中國新藥與臨床藥理，2006，17(5)：359

4 中國藥典.一部. 2005：51，211