韓文雯，李天祥

(中國人民解放軍第二五四醫(yī)院，天津 300142)

望江南子為豆科植物望江南(cassiaoccidentalisL)的干燥種子，又名野扁豆、喉白草、羊角豆[1]，主治目赤腫痛、頭暈頭脹、消化不良、胃痛、腹痛、痢疾、便秘等[2]。望江南子蒽醌類成分功效主要表現(xiàn)在致瀉和通便的作用，而其苷元主要表現(xiàn)在清肝明目作用，其毒性成分主要為毒性蛋白。由于望江南子的中毒案例逐漸增多，應(yīng)加強對望江南子中毒原理的研究。在臨床上望江南子易與決明子混淆，這是導(dǎo)致中毒的關(guān)鍵原因。本實驗可為以后研究望江南子提供了生藥學(xué)上面依據(jù)，提高生理活性和藥理活性研究。

1 實驗材料與儀器

1.1藥材 望江南子來源于本院標(biāo)本館，經(jīng)李天祥老師鑒定。

1.2實驗儀器和試劑 顯微鏡(OLYMPUS BX51)、滑走切片機(MICROTOME)、Olympus CX41顯微攝像儀(奧林巴斯株式會社)、電熱恒溫干燥箱(天津市華北實驗儀器有限公司制造)、XMTB數(shù)顯調(diào)節(jié)恒溫水浴鍋 (北京長風(fēng)儀器儀表公司)、KQ-300DV型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、ZF-20D暗箱式紫外分析儀(上海顧村儀器廠)。石蠟、乙醇、二甲苯、1%番紅乙醇溶液、0.1%固綠乙醇溶液、乙醚、醋酸鎂、1﹪對亞硝基二甲苯胺吡啶。

2 實驗方法

2.1望江南子顯微鏡觀察的石蠟切片制做程序 軟化→取材→固定→沖洗→脫水→透明→透蠟→包埋→切片→貼片→脫蠟→染色→透明→封藏。

2.1.1軟化 用煮沸冷卻法使藥材(望江南子)細(xì)胞內(nèi)充滿水分，煮沸時間不宜過長否則會漲破種皮。再放入18%氨水中浸泡過夜。

2.1.2取材和樣品分割 選取飽滿、完整望江南子，手工切割。

2.1.3固定 用50%乙醇、冰醋酸、福爾馬林(9∶05∶05)，配成FAA和甘油乙醇(1∶1)兩種固定液，實驗證明望江南子更適用于甘油乙醇固定。為了更好地保存和處理材料，固定時間為24 h。

2.1.4沖洗 將材料從甘油乙醇固定液中取出后用濾紙吸干表面殘存的液體，置于10倍于材料的50%乙醇中浸泡12 h，中途更換乙醇一次，共沖洗兩次。

將已透入石蠟的材料置入蠟杯，并和另外4個盛有新鮮石蠟的蠟杯同時放入60～62 ℃恒溫箱。待石蠟熔化后，將材料依次在每個石蠟杯中放置3 h，即可常規(guī)包埋、切片和貼片。

2.2望江南子的性狀及其粉末顯微鑒別 本實驗對望江南子進行了性狀和粉末顯微鑒定。通過體視鏡觀察其性狀特征，并在顯微鏡下觀察其粉末顯微特征，其中包括水合氯醛制片和稀甘油制片。

2.3理化鑒別特征 據(jù)報道望江南子中含大黃素甲醚的勻二蒽酮、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素等多種蒽醌類化合物及多種脂肪酸、揮發(fā)油等[3]。本實驗對望江南子中的蒽醌類物質(zhì)進行了驗證。

3 結(jié)果

3.1性狀特征 望江南子呈扁平狀，一端略長，長3.5～4.5 mm，寬2.5～3.5 mm厚1.0～1.5 mm；表面灰綠色或灰棕色，兩平面中央有類橢圓型凹斑；質(zhì)堅硬，不易破碎，無臭，味淡。

3.2橫切顯微鏡下形態(tài) 望江南子種皮外層為一列表皮細(xì)胞，呈柵欄狀，壁不均勻加厚，長65～70 μm，寬3～5 μm，在柵狀細(xì)胞下方1/3處有一條光輝帶。柵狀細(xì)胞散開時光輝帶有時不顯現(xiàn)，柵狀細(xì)胞表面觀為多角形，種皮外披較厚的角質(zhì)層，平滑、透明。柵狀細(xì)胞下為一列支持細(xì)胞，略呈啞鈴狀，長25～28 μm，最寬處直徑為19～30 μm，表面觀呈類多角形，可見上下兩層同心圓。下層為4～6層營養(yǎng)層細(xì)胞，呈扁平狀，長9～12 μm，最寬處直徑為100～108 μm。最內(nèi)層為內(nèi)種皮，細(xì)胞略小，排列整齊。子葉為單面葉，上下表皮為排列較整齊的薄壁細(xì)胞，柵欄組織為兩層圓柱狀細(xì)胞(有時可見第三層)，較下層細(xì)胞略短，第一層?xùn)艩罴?xì)胞長35～40 μm，寬8～10 μm，第二層?xùn)艩罴?xì)胞長23～28 μm，寬8～10 μm，海綿組織細(xì)胞類圓形，子葉含油滴。 見圖1-3。

圖1 望江南子種皮橫切顯微鏡下觀察

圖2 望江南子子葉橫切顯微鏡下觀察

圖3 望江南子橫切顯微鏡下觀察

3.3粉末顯微觀察結(jié)果 望江南子粉末呈黃棕色或黃綠色。①種皮柵狀細(xì)胞：細(xì)胞排列多成片，無色或淡黃色，呈長方形，排列稍不整齊，胞腔明顯，位于細(xì)胞1/3處的光輝帶有的可見有的不可見，表面觀多成類多邊形，壁較厚，有時可見細(xì)胞被較厚的角質(zhì)層。②種皮支持細(xì)胞：無色或黃棕色，側(cè)面(斷面)觀多呈啞鈴狀，通常兩端較膨大，外壁和內(nèi)壁稍后，表面觀呈類圓形(可見兩個同心圓)。③角質(zhì)層碎片：厚10～19 μm，多透明，光亮。④內(nèi)胚乳細(xì)胞：細(xì)胞壁黏液質(zhì)化，胞腔內(nèi)含黃棕色物質(zhì)。⑤子葉碎片：柵欄組織長圓柱狀，海綿細(xì)胞類圓形。見圖4。

A1、A2 柵狀細(xì)胞表面觀 B1、B2 柵狀細(xì)胞頂面觀 C角質(zhì)層 D支持細(xì)胞 E支持細(xì)胞頂面觀 F1F2 子葉薄壁細(xì)胞 G內(nèi)胚乳細(xì)胞

3.4理化鑒別結(jié)果 稱取望江南子粉末1 g，放在錐形瓶中，加入70%乙醇100 ml，超聲提取30 min，過濾，以供顯色試驗。

3.4.1Feigl反應(yīng) 醌類衍生物在堿性條件下經(jīng)加熱能迅速與醛類及林二硝基苯反應(yīng)生成紫色化合物。取樣品溶液，加入25%碳酸鈉水溶液、4%甲醛及5%鄰二硝基苯的苯溶液1 d，水浴加熱1～4 min，顏色逐漸加深，最后呈紫色。驗證可能含有蒽醌類化合物。

3.4.2Borntrager反應(yīng) 羥基醌類在堿性溶液中發(fā)生顏色變化，多呈橙、紅、紫紅及藍色。取少量粉末，加10%硫酸水溶液5 ml，置水浴鍋上加熱2～10 min趁熱過濾，濾液冷卻后加乙醚2 ml振搖，靜置后分取乙醚層，加入5%氫氧化鈉水溶液1 ml振搖。加入堿后水層變?yōu)榧t色，醚層有黃色變?yōu)闊o色。驗證可能含有蒽醌類化合物。

3.4.3與金屬離子的反應(yīng) 在蒽醌類化合物中，如有ɑ-酚羥基或鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)時，則可以與Pb2+、Mg2+等金屬離子形成有顏色的絡(luò)合物。取樣品溶液2 ml，加入醋酸鎂后顏色變紅，驗證可能含有ɑ-酚羥基或鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)。

3.4.4三氯化鐵反應(yīng) 取樣品溶液1 ml于試管中。加入三氯化鐵溶液數(shù)滴，液變?yōu)樗{黑色。驗證種子中可能還有鞣質(zhì)。

1 中國科學(xué)院植物研究所主編. 中國高等植物圖鑒(第二冊).北京：科學(xué)出版社，1972：339

2 王強，楊竟雄. 望江南子中蒽醌類化合物的含量測定. 福建藥學(xué)雜志, 1990 ,2(3) :1

3 劉娟，鄒純才，孫佐富.決明子及其代替品望江南子的比較鑒定.黑龍江醫(yī)藥科學(xué).2006.29(2)：63