王海寧 楊青松

1.貴州省藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550002;2.貴陽新天藥業(yè)有限責(zé)任公司，貴州 貴陽 550005

夏枯草口服液具有清火，明目，散結(jié)，消腫。用于頭痛眩暈，瘰疬，癭瘤，乳癰腫痛，乳腺增生，甲狀腺腫大，淋巴結(jié)結(jié)核，高血壓癥。本品收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3－224(Z－224) －2003(Z)。原標(biāo)準(zhǔn)中含量測定為測金絲桃苷的含量，由于測定時(shí)對(duì)柱子選擇性較高且分離效果不是很好，根據(jù)廠方要求及2010年版藥典擬新增新藥品種要求，修訂本品含量測定，改為測迷迭香酸的含量。我們從生產(chǎn)工藝到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，相繼進(jìn)行了一系列相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)摸索，根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定的原則，因?yàn)槊缘闼釣橄目莶莸闹饕煞荩栽诖藢?duì)原標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，改為HPLC測定迷迭香酸的含量。結(jié)果表明，經(jīng)過對(duì)該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂后，進(jìn)一步提高了該品種的可控性。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀:島津2010液相色譜儀;夏枯草口服液由貴陽新天藥業(yè)有限責(zé)任公司提供;迷迭香酸對(duì)照品由天津一方科技有限公司提供;試劑:甲酸為分析純、甲醇為色譜純、純凈水為UPW－50N型超凈水器和CS－2型廚下式逆滲透直飲機(jī)二次制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇－0.5%甲酸(40∶60)為流動(dòng)相;流速:1 ml/min;進(jìn)樣量:10 μl;柱溫:25℃。檢測波長為330nm;理論塔板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000。

2.2 供試品溶液的制備

精密取本品1ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

空白試驗(yàn):由于本品為單方制劑，無陰性樣品，取對(duì)照品溶液及樣品溶液進(jìn)樣，結(jié)果色譜圖如下 (圖1)。

線性關(guān)系考察:按上述色譜條件，精密取迷迭香酸對(duì)照品 (0.286944mg/ml)1ml、1ml、2ml、3ml、2ml，分別置25ml、10ml、10ml、10ml、5ml量瓶中，加 50% 甲醇至刻度，分別取10μl注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。計(jì)算回歸方程:Y=28937.68X+3133.08，r=0.9998(n=5)，結(jié)果表明，在0.114776～1.14776μg范圍內(nèi)迷迭香酸對(duì)照品的進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜，計(jì)算，結(jié)果迷迭香酸峰面積積分值RSD=0.52%，說明有良好的精密度。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取樣品 (批號(hào)為080309)5份，依法制得5份供試品溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜，計(jì)算，RSD為0.81%，說明有良好的重現(xiàn)性。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣，測定。結(jié)果迷迭香酸峰面積值的RSD=0.29%，表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率試驗(yàn):采用加樣回收，精密吸取已測定含量的夏枯草口服液 (080309)6份，每份1ml，置50ml量瓶中，分別精密加入迷迭香酸對(duì)照品溶液 (0.286944mg/ml)5ml，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，并按上述色譜條件測定迷迭香酸的含量計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。迷迭香酸的回收率為100.6%，RSD為0.54%，說明本法有良好的回收率。

表1 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù) (n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀測定。結(jié)果批號(hào)為080101，080102，080103，080105， 080106， 080309， 080310， 081204， 081205，081208的樣品中迷迭香酸的含量分別為10.3，11.6，8.50，10.3，10.4，14.0，9.50，13.2，14.9，12.0mg/支。

3 討論

3.1 經(jīng)參閱資料報(bào)道及實(shí)驗(yàn)后，330 nm處無雜質(zhì)干擾且靈敏度也較好，所以采用此波長。流動(dòng)相曾采用甲醇－水(40∶60)，但迷迭香酸峰拖尾因子為0.87，經(jīng)加入少量的甲酸，使迷迭香酸峰成對(duì)稱峰，所以流動(dòng)相采用甲醇－0.5%甲酸 (40∶60)。

3.2 在樣品溶液制備時(shí)，由于本品為液體制劑，曾采用直接進(jìn)樣，但迷迭香酸含量較高且雜質(zhì)較多，后經(jīng)加不同濃度的甲醇、乙醇稀釋至25ml，濾過，進(jìn)樣，結(jié)果采用50%甲醇稀釋后進(jìn)樣，分離好，雜質(zhì)較少，所以在此選擇采用50%甲醇稀釋后進(jìn)樣。

［1］苗明三，李振國，陳隋清.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:817.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版式社，2005:197.