譚延偉 宋俊榮 王毅 張亞平 賈桂叢

冰凍單采血小板具有良好的止血效果和升高血小板功效，不良反應(yīng)少，可以治療血小板減少或血小板功能障礙的各種疾病和外科手術(shù)等，但冰凍單采血小板的制備要求高、操作嚴(yán)格，同時(shí)復(fù)融時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀物而報(bào)廢，出現(xiàn)絮狀物的原因有纖維蛋白析出和血小板損傷，這兩個(gè)因素相互影響［1］。本文通過對(duì)冰凍單采血小板的復(fù)融情況進(jìn)行分析，總結(jié)可能出現(xiàn)絮狀物的原因及相應(yīng)的解決方法，從而減少冰凍單采血小板的報(bào)廢。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 河北省血液中心2002年5月至2011年5月的4238袋冰凍單采血小板。

1.2 儀器和試劑 血細(xì)胞分離機(jī)MCS+，－80℃低溫冰箱，血小板恒溫振蕩保存箱，電熱恒溫水浴箱，PH-IA型恒溫循環(huán)解凍箱，血小板保護(hù)劑二甲基亞砜(DMSO)。

1.3 方法

1.3.1 選擇符合《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》的獻(xiàn)血者，應(yīng)用MCS+血細(xì)胞分離機(jī)及配套的管道器材，采集制備成新鮮機(jī)采血小板。從血小板留樣管的接口處按0.5 ml/min的速度緩慢加入DMSO，使其最終濃度達(dá)到5%，然后－80℃低溫冰箱冰凍保存，保質(zhì)期為1年。

1.3.2 冰凍單采血小板的解凍 從－80℃低溫冰箱中取出冰凍單采血小板，檢查無誤后，迅速放入42℃的恒溫水浴箱中，并用雙手輕輕搖動(dòng)血袋，使冰凍單采血小板能迅速融化，4～7 min后取出。2010年12月改用恒溫循環(huán)解凍箱融化，設(shè)定溫度41℃、時(shí)間8 min，恒溫循環(huán)水浴自動(dòng)融化。融化后的血小板在日光燈下肉眼觀察無絮狀物、顏色為淡黃色、帶有云霧狀的、均勻一致的血小板混懸液為正常，可以發(fā)往臨床使用。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4238袋冰凍單采血小板情況 有4238袋冰凍單采血小板復(fù)融，有3887袋已用于臨床，351袋出現(xiàn)絮狀物報(bào)廢，復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物比例為8.28%。2002年有9袋輕脂的冰凍單采血小板復(fù)融后4袋出現(xiàn)絮狀物;3袋采集不順利的冰凍單采血小板復(fù)融后2袋出現(xiàn)絮狀物。

2.2 選擇采集24 h以內(nèi)和24 h以后的機(jī)采血小板冰凍，復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的比較 見表1。

表1 采集24 h前后絮狀物比較

2.3 用恒溫水浴箱手動(dòng)融化和恒溫循環(huán)解凍箱自動(dòng)融化出現(xiàn)絮狀物的比較 見表2。

表2 不同融化方法絮狀物比較

2.4 機(jī)采血小板的冰凍保存溫度 幾年間由于外界原因造成低溫冰箱幾次大的溫度變化，冰凍血小板復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的比較。見表3。

表3 不同水溫絮狀物比較

3 討論

根據(jù)冰凍單采血小板制備、保存、融化過程及冰凍單采血小板本身的特點(diǎn)，分析總結(jié)出現(xiàn)絮狀物的原因有。

3.1 血小板供者因素 脂肪血的機(jī)采血小板和靜脈穿刺不順利的機(jī)采血小板冰凍復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。這有可能是脂肪顆粒影響藥物對(duì)血小板的冰凍保護(hù)，同時(shí)也影響血小板的冰凍速度、激活血小板的凝集功能、損傷破壞了血小板。目前血液中心已在采集前的血標(biāo)本化驗(yàn)時(shí)選擇無脂血的合適供血者。

3.2 冰凍單采血小板加入DMSO的速度和濃度 DMSO是一種強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑，以原型通過腎臟或以硫化物的形式經(jīng)肝臟排出體外。有報(bào)道和實(shí)驗(yàn)證實(shí)，隨著DMSO濃度的增加，DMSO對(duì)血小板的聚集功能的抑制逐漸增加，當(dāng)DMSO的濃度達(dá)5%時(shí)，聚集功能抑制顯著，其聚集強(qiáng)度接近零［2］，從而在一定程度上減少了血小板的損傷和活化。DMSO加入過快可以使局部高熱，可導(dǎo)致血漿蛋白變性，使血小板聚集和激活;同時(shí)DMSO進(jìn)入血小板細(xì)胞內(nèi)過快，使血小板的膜內(nèi)外滲透壓急速變化，會(huì)對(duì)血小板膜造成化學(xué)性損傷，使冰凍血小板復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。因此在加入DMSO時(shí)，速度要慢，一邊加藥一邊充分搖動(dòng)血袋，避免局部過熱和血小板的損傷。

3.3 機(jī)采血小板采集后選擇冰凍時(shí)間 血小板在體外保存過程中，其數(shù)量、形態(tài)、生化和功能均會(huì)發(fā)生變化，這種變化稱為保存損傷。其原因是保存過程中血小板被激活及血小板發(fā)生能量代謝障礙所致。有實(shí)驗(yàn)表明，盡管保存5 d的血小板與0 d的血小板計(jì)數(shù)沒有明顯差異，但隨著保存時(shí)間的延長，血小板的活性在逐漸改變，保存期末血小板的PH值下降顯著，LDH水平逐漸增高，血小板凋亡數(shù)逐漸增加，CD62P的表達(dá)也逐漸增高［3］，因?yàn)檠“迨菬o核細(xì)胞，在儲(chǔ)存中是無氧代謝，以分解葡萄糖供能產(chǎn)生LDH和CO2，使pH值下降，不利于血小板的存活［4］。因此血小板冰凍前保存時(shí)間不宜太長，否則易造成血小板的代謝性損傷，若再冰凍保存，復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。

3.4 機(jī)采血小板的冰凍保存溫度 幾年來通過實(shí)踐觀察，冰凍單采血小板時(shí)一次不要冰凍太多，在低溫冰箱放置時(shí)，袋與袋之間要有間隙，要保持水平放置，否則會(huì)影響血小板的降溫速率，尤其是在血小板的袋內(nèi)溫度達(dá)到－15℃ ～－40℃時(shí)，不同的降溫速率對(duì)冰凍血小板的影響最大，其中－0.5℃/min～－4℃/min的降溫速率對(duì)血小板的損傷最?。?］。冰凍血小板時(shí)加入的DMSO能迅速進(jìn)入血小板的細(xì)胞內(nèi)，保護(hù)血小板使得血小板細(xì)胞內(nèi)冰晶形成溫度在－35±4℃，若保存溫度波動(dòng)較大，血小板胞內(nèi)冰晶反復(fù)形成對(duì)血小板造成機(jī)械性損傷，導(dǎo)致復(fù)融后易出現(xiàn)絮狀物。因此儲(chǔ)存冰凍血小板過程中，不能隨意改變保存溫度，只有恒定的溫度(－80±4℃)才是保證血小板質(zhì)量的關(guān)鍵［6］。

3.5 冰凍單采血小板的復(fù)融溫度 有資料顯示，冰凍單采血小板的融化溫度控制在37～42℃之間為宜［1］，用恒溫水浴箱融化冰凍血小板時(shí)，雙手拿著血袋兩端輕輕搖動(dòng)，水浴箱內(nèi)的水要足量多，以利于冰凍血小板盡快融化，在此期間切忌用手指捏搓血袋，以免損傷血小板。如果水浴箱溫度太低，則會(huì)延長融化時(shí)間，增加血小板的損傷和激活;溫度太高，則造成血漿蛋白變性和血小板的破壞。復(fù)融過程慢或溫度太低，都可能導(dǎo)致冰晶形成而影響血小板的質(zhì)量，造成絮狀物［7］。改用恒溫循環(huán)解凍箱自動(dòng)融化，可確保溫度的恒定，降低絮狀物的發(fā)生。

3.6 其他因素 在實(shí)踐工作中發(fā)現(xiàn)，冰凍單采血小板融化后需用保溫設(shè)備運(yùn)輸并盡快輸注，特別是在冬季，復(fù)融后的機(jī)采血小板不要和溫度低的金屬桌面、器皿等物品接觸，否則易出現(xiàn)絮狀物;制備冰凍血小板的血袋規(guī)格，用容量為600 ml和1000 ml的血袋制備的冰凍單采血小板，復(fù)融后出現(xiàn)絮狀物的比例分別為7/50和1/60。這可能是由于血袋的容量大，在冰凍過程中表面積大，降溫速率快，使血小板順利通過其敏感溫度區(qū)域，而在復(fù)融時(shí)接觸水浴面積亦大，融化時(shí)間短，對(duì)血小板的損傷小，因此復(fù)融后不易出現(xiàn)絮狀物;低溫冰箱存貯量大和冰箱周圍溫度高、空氣不流暢時(shí)，低溫冰箱降溫速率慢，出現(xiàn)絮狀物幾率亦會(huì)增加。

總之，制備高質(zhì)量的冰凍單采血小板，血源的篩選、血小板的采集是基礎(chǔ)，DMSO的加入技術(shù)、血小板冰凍時(shí)間的選擇、冰凍保存和融化血小板的溫度是關(guān)鍵，復(fù)融是否成功是結(jié)果。

1 丁國良，趙樹華，伍珍，等.冰凍血小板中出現(xiàn)絮狀物的原因分析.臨床輸血與檢驗(yàn)，2004，6:114-116.

2 賴東生，陳岑.二甲基亞砜(DMSO)對(duì)血小板體外聚集功能的影響.中國輸血雜志，2004，17:446.

3 聶詠梅，付涌水，江朝富，等.云南昆明血液中心常溫保存期血小板的數(shù)量及功能變化.中國輸血雜志，2005，18:209-210.

4 紀(jì)云鵬，唐榮才，蔡莉，等.冰凍機(jī)采血小板的質(zhì)量觀察.臨床輸血與檢驗(yàn)，2005，17:278-279.

5 劉小雯.溫度波動(dòng)對(duì)血小板冰凍質(zhì)量的影響.臨床輸血與檢驗(yàn)，2003，5:129.

6 劉景漢，歐陽錫林，等.低溫保存的血小板胞內(nèi)冰晶形成溫度測定.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2002，10:574.

7 張燕愛，王長今.冰凍單采血小板復(fù)融出現(xiàn)絮狀物凝塊情況分析.鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，6，25:160.