王會恩 張霄鵬 王志康 劉會寧 周韶輝 段國辰

食管癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年增高的趨勢。隨著人們對腫瘤研究的深入，目前認為凋亡相關(guān)基因Survivin與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，本研究采用免疫組化方法研究食管癌中Survivin的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2003至2004年食管鱗狀細胞癌蠟塊標本58例為試驗組，其中男35例，女23例;年齡39～79歲，平均年齡56.61歲;高分化28例，中分化21例，低分化9例。所有患者均為術(shù)前未經(jīng)放療及化療的初發(fā)病例。正常食管黏膜組織32例為對照組，其中男22例，女10例;年齡20～68歲，平均年齡31.30歲。為囊腫等良性腫瘤旁的正常黏膜組織。以上每例標本均進行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗的病理醫(yī)師閱片后確診。

1.2 主要試劑 羊抗人Survivin多克隆抗體，為SantaCruz公司產(chǎn)品。SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑，多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 采用免疫組織化學(xué)SP法(過氧化物酶標記的鏈酶卵白素法)。將每個蠟塊切為4～5 μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張作為陰性對照，另1張Survivin染色。免疫組化步驟均嚴格按照試劑盒要求操作。常規(guī)設(shè)立陽性對照和陰性對照。

1.4 實驗結(jié)果判定 細胞漿呈棕黃色者為Survivin陽性細胞。首先按染色強度記分:0為陰性，1為弱陽性，2為陽性，3為強陽性。再按照陽性細胞所占百分比記分:陽性細胞＜5%為0分，5% ～25%為1分，25% ～50%為2分，50% ～75%為3分，＞75%為4分。兩者之和≥2分可判為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin蛋白在正常食管黏膜組織和食管癌組織中的表達 Survivin蛋白在食管鱗狀細胞癌組織中的表達，陽性表達55.17%(32/58)，陰性 44.83%(26/58);在正常食管組織中陽性表達9.38%(3/32)，陰性 90.62%(29/32)。2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.24，P＜0.01)。見表1、圖1。

表1 Survivin在正常食管組織和食管癌組織中的表達 例

圖1 食管鱗癌組織中Survivin的表達(SP×200)

2.2 Survivin蛋白表達與患者的臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 Survivin蛋白的表達與患者的性別、年齡及腫瘤的部位無明顯的相關(guān)性(P ＞0.05)，而與腫瘤的分化程度相關(guān)(P＜0.05)。見表2。

表2 Survivin的表達與臨床病理學(xué)指標的關(guān)系 例

3 討論

我國是食管癌的高發(fā)國，且病死率居高不下。食管癌的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多階段、多基因參與的復(fù)雜過程，因此從細胞水平深入到基因分子水平探討食管癌病變的發(fā)生、發(fā)展機制具有重要的臨床意義。

Survivin又名生存素，是一種分子量為6.5 kDa的胞內(nèi)蛋白，編碼基因定位于染色體17q25。生存素只表達于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，除胸腺、生殖腺外不見于其他終末分化的正常成人組織。相反在大多數(shù)腫瘤組織如肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌中均可檢測到生存素的表達。生存素能抑制各種凋亡誘導(dǎo)因子所誘導(dǎo)的細胞凋亡。

Satoh等［1］發(fā)現(xiàn)胰腺癌 Survivin蛋白的表達陽性率為76.9%，認為在腫瘤發(fā)生早期階段即有Survivin蛋白表達上調(diào)，并與凋亡指數(shù)明顯相關(guān)。Kishi等［2］研究了82例前列腺癌標本和80例正常對照前列腺組織，結(jié)果表明Survivin表達在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和血管侵犯的癌中表達增高，而且與癌細胞增殖活性成正相關(guān)，提示Survivin表達的程度與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。Li等［3］報道了 Survivin mRNA在肝癌中的表達情況，Survivin mRNA表達陰性腫瘤的癌細胞凋亡率明顯高于陽性者(P=0.0019)，Survivin mRNA表達陽性患者5年生存率明顯低于陰性者(P=0.0148)，提示Survivin mRNA表達情況可作為預(yù)測肝癌切除術(shù)后預(yù)后的獨立指標。另外，研究發(fā)現(xiàn)34.5%的胃癌，70.7%的乳腺癌，77.8%的膀胱癌，85.5%的非小細胞性肺癌中都有不同程度的Survivin mRNA表達，Survivin蛋白通過級聯(lián)式激活并溶解蛋白質(zhì)，主要抑制Caspase-3和Caspase-7的活性，阻斷細胞的凋亡，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子［4］。Survivin蛋白表達與患者的性別、年齡及腫瘤部位無明顯關(guān)系，但與腫瘤組織的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系各家報道不一。多數(shù)研究表明Survivin蛋白的表達與多種腫瘤的生物學(xué)特性、分期密切相關(guān)［5］。Lu等［4］的資料顯示，Survivin蛋白表達與胃癌的組織學(xué)類型及淋巴管浸潤有關(guān)。Lo等［6］研究顯示，Survivin蛋白在口腔及皮膚鱗癌組織中的表達與腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。少數(shù)研究認為Survivin蛋白的表達與上述臨床病理因素無關(guān)。本研究結(jié)果顯示 Survivin蛋白的表達隨食管鱗狀細胞癌的浸潤深度加深而增強，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，而在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌組織顯著高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組織，結(jié)合長期生存組表達明顯低于短期生存組，提示Survivin蛋白是一個有研究價值的腫瘤標志物及判斷食管鱗狀細胞癌預(yù)后的參考指標，并有可能成為基因治療的新靶點。

本研究結(jié)果顯示:在58例食管鱗癌組織中Survivin有32例陽性表達，為胞漿染色。而在32例正常黏膜中，Survivin僅有3例陽性表達，也為漿染色，這與多數(shù)實驗結(jié)果基本一致，少數(shù)研究發(fā)現(xiàn)Survivin也可出現(xiàn)核表達，出現(xiàn)不一致的原因可能與所取樣本數(shù)目多少有極大關(guān)系，還可能與腫瘤的組織分型、免疫組化技術(shù)等多種因素有關(guān)。

本試驗陽性率與年齡、性別及部位無關(guān)，只與分化程度相關(guān)，隨分化程度的降低，Survivin的表達有升高趨勢，我們的結(jié)果顯示，低分化和中分化均與高分化差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但低分化和中分化差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

綜上所述，Survivin與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，它作為一種新的凋亡抑制蛋白在腫瘤發(fā)病機制中的作用以及治療靶點的應(yīng)用已經(jīng)引起了廣泛關(guān)注，但是仍有很多問題亟待闡明，如Survivin基因表達的調(diào)控、與癌基因、抑癌基因和其他凋亡相關(guān)基因的關(guān)系，以及在腫瘤診治中的具體的應(yīng)用價值等。

1 Satoh K，Kaneko K，Hirota M，et al.Expression of Survivin is correlated with cancer cell apoptosis and is involved in the development of human pancreatic duct cell tumors.Cancer，2001，92:271-278.

2 Kishi H，Igawa M，Kikuno N，et al.Expression of the Survivin gene inprostate cancer:correlation with clinicopathological characteristics，proliferative activity and apopt.J Urol，2004，171:1855.

3 Li F，Ambrosini G，Chu EY，et al.Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by Survivin.Nature，1998，396:580-584.

4 Lu CD，Altieri DC，Tanigawa N，et al.Expression of a novelantiapoptosis gene，Survivin，correlated with tumor cellapoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas.Cancer Res，1998，58:1808-1812.

5 Altieri DC，Marchisio C.Survivin apoptosis:an interloper between cell death an cell proliferation in cance.Lab Invest，1999，79:1327.

6 Lo Muzio L，Staibano S，Pannone G，et al.Expression of theapoptosis inhibitor Survivin in aggressive squamou cell carcinoma cell careinoma.Exp Mol pathol，2001，70:249.