高淑磊 高愛武 劉俊紅 韓麗娟 李鳳玲

近年來隨著生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，較多的資料顯示高血壓(EH)的病情發(fā)展過程是機體的氧化和抗氧化水平失衡，以致過多的自由基引起血管內(nèi)皮損傷和收縮血管的過程，而這一過程又加重了EH病情。大量證據(jù)表明氧化應(yīng)激在EH病理生理過程中起重要作用，氧化應(yīng)激對EH的發(fā)生發(fā)展，其相應(yīng)的靶點是血管損害［1，2］。8-羥基脫氧鳥苷酸(8-OHdG)、硝基酪氨酸(NT)是重要的氧化DNA損傷及蛋白質(zhì)硝基化的生物標(biāo)志物，本研究通過檢測原發(fā)性EH患者血清8-OHdG及NT水平，探討氧化應(yīng)激在EH的病情進展中的作用及所造成的氧化損傷。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇原發(fā)性EH患者40例，男31例，女9例。隨機分為:輕度EH患者組20例，男15例，女5例;年齡53～79歲，平均年齡(66 ±9)歲;體重指數(shù)(BMI)19.81 ～25.01 kg/m2，平均BMI(23.2±1.3)kg/m2。中度EH患者組20例，男16例，女4例;年齡53～78歲，平均年齡(65±7)歲;BMI 20.54～25.82 kg/m2，平均 BMI(23.2 ±1.5)kg/m2;符合達到 EH 診斷標(biāo)準［3］，并排除腎源性、內(nèi)分泌性等繼發(fā)性EH。正常對照組:20例，男14例，女6例;年齡52～78歲，平均年齡(67±8)歲;BMI 21.09 ～24.82 kg/m2，平均 BMI(23.5 ± 1.0)kg/m2;無高血壓病史，且無慢性腎病、內(nèi)分泌性疾病等可導(dǎo)致繼發(fā)性高血壓因素的疾病。所有患者均除外繼發(fā)性高血壓、2個月內(nèi)發(fā)生心腦血管意外、外周血管疾病、心瓣膜病、心功能不全、心律失常、糖尿病、肥胖、高脂血癥、肝腎功能異常的患者。3組性別比、年齡、BMI等一般特征差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 一般資料的采集:包括受試者的年齡、性別、身高、體重、高壓病史、吸煙飲酒史以及既往史等。所有病例均由專人測量身高、體重、血壓。血壓測定采取坐位至少休息5 min以上后，應(yīng)用臺式水銀柱血壓計測量右肱動脈血壓，收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)取3次血壓讀數(shù)的平均值。

1.2.2 方法與儀器:所有研究對象均于晨醒5 min內(nèi)抽取肘靜脈血 3 ml，混勻，4℃，3000 r/pm 離心 15 min，分離血清 －70℃保存待測血清8-OHdG和NT。所有標(biāo)本一批次由同一人、同一時間檢測。8-OHdG及NT應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定，試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SAS 8.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，組間比較采用t檢驗，多組間計量資料的比較采用方差分析并進一步應(yīng)用SNK-q檢驗行樣本均數(shù)間的多重比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

輕度EH患者血清8-OHdG及NT水平與對照組比較(P＜0.01)，中度EH與輕度EH患者組比較血清8-OHdG及NT濃度升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 3組一般特征及血清NT和8-OHdG水平比較n=20，

表1 3組一般特征及血清NT和8-OHdG水平比較n=20，

注:與對照組比較，*P ＜0.01;與輕度組比較，#P ＜0.01

組別 年齡(歲) BMI(kg/m2) NT(ng/ml) 8-OHdG(ng/ml)對照組輕度組中度組67±866±965±723.5 ± 1.023.2 ± 1.323.2 ± 1.52.4 ±1.66.4 ±3.6*9.6 ± 3.5*#2.2 ±1.96.6 ±3.1*8.3 ± 3.0*#

3 討論

正常機體在生理狀態(tài)下的有氧代謝過程中，會產(chǎn)生一些氧自由基，如超氧陰離子等，同時機體內(nèi)存在抗氧化系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶(SOD)等，氧化與抗氧化之間處于平衡狀態(tài)。在病理狀態(tài)下，機體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和抗氧化系統(tǒng)防御之間嚴重失衡，自由基產(chǎn)生增多或抗氧化能力減弱都將會發(fā)生氧化應(yīng)激，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞功能失調(diào)、血管平滑肌細胞增殖和炎癥等，引發(fā)多種疾病。研究表明高血壓患者存在嚴重的氧化反應(yīng)病理亢進及抗氧化能力銳減現(xiàn)象，氧化應(yīng)激與高血壓病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2－4］。氧自由基能與細胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸分子發(fā)生多種形式的氧化還原反應(yīng)，構(gòu)成不同層次的多種損害，最終造成血管內(nèi)皮的損傷、通透性增加，平滑肌細胞增生、增殖，細胞外基質(zhì)沉積和降解，血管壁重構(gòu)。NT的形成的一個重要來源是由過氧亞硝酸鹽(ONOO-)與酪氨酸的快速反應(yīng)而形成的內(nèi)源性物質(zhì)，被認為是體內(nèi)蛋白質(zhì)硝基化的生物標(biāo)志［5］。而在氧化應(yīng)激過程中，可以被SOD催化生成H2O2，此外，血管壁產(chǎn)生的可以迅速與一氧化氮(NO)反應(yīng)生成ONOO-［6］，ONOO-具有細胞毒性，能夠修飾DNA堿基、造成DNA單鏈斷裂。8-OHdG作為體內(nèi)DNA氧化損傷生物標(biāo)志物，可反映體內(nèi)DNA氧化損傷，在氧化應(yīng)激存在條件下，明顯升高，并且隨著病情的加重而升高［7］。8-OHdG的生成量以及DNA鏈斷裂程度與ONOO-濃度有依賴關(guān)系［8］。ONOO-引起酪氨酸的硝基化使NT增加，直接引起細胞內(nèi)蛋白質(zhì)及酶變性、DNA損害，最后導(dǎo)致細胞死亡或凋亡。且氧化應(yīng)激與內(nèi)皮功能障礙程度密切相關(guān)［1］，研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮功能異常障礙時一氧化氮合酶表達和超氧化物產(chǎn)生同時增加，且與硝基酪氨酸生成增加密切相關(guān)［9］。表明ONOO-在高血壓的病理生理過程中起著重要作用。因此NO和之間保持平衡狀態(tài)，在高血壓的病理生理機制中具有重要意義。

本研究研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清8-OHdG及NT水平在輕度高血壓患者組比正常對照組明顯升高，中度高血壓患者組進一步升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。表明輕度高血壓患者有著較高水平的氧化DNA、蛋白質(zhì)硝基化損傷標(biāo)志物產(chǎn)生，提示輕度高血壓患者存在氧化應(yīng)激。中度EH患者比輕度EH患者有著更高水平8-OHdG及NT，表明EH患者無論輕度還是中度升高機體內(nèi)均存在氧化應(yīng)激改變，有氧化損傷產(chǎn)物形成，中度EH患者存在更強的氧化應(yīng)激，EH患者血壓越高，氧化應(yīng)激現(xiàn)象越顯著，其氧化損傷現(xiàn)象可能越嚴重。Lee等［10］選擇了性別、年齡相匹配的輕中度EH患者和對照組，并檢測血漿8-OHdG。給予卡維地絡(luò)治療兩個月后，發(fā)現(xiàn)高血壓組存在有活性氧引起的DNA損傷，而卡維地絡(luò)可降低高血壓組的DNA氧化損傷，認為EH患者體內(nèi)8-OHdG含量升高是因為在機體氧化應(yīng)激狀態(tài)下可引起組織內(nèi)ROS大量增加，大量的ROS導(dǎo)致組織細胞損傷及功能異常。當(dāng)線粒體中缺乏DNA修復(fù)體系時，DNA受到活性氧的攻擊后產(chǎn)生氧DNA損傷的標(biāo)志物8-OHdG。

總之，EH患者體內(nèi)氧化抗氧化功能失衡，抗氧化物質(zhì)可能不能有效地清除過多的超氧化物，而導(dǎo)致血管細胞的氧化或氧化應(yīng)激損傷。本研究結(jié)果表明，輕、中度EH病患者血清8-OHdG及NT水平均升高，且與高血壓的病情嚴重程度相關(guān)。說明在輕中度EH病患者可能存在氧化應(yīng)激、氧化損傷現(xiàn)象，在中度EH患者中可能更為明顯。

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