李希政，夏宏志，李 濛，張松玲，周紅昕

（吉林省生物研究所，吉林 長(zhǎng)春 130012）

松杉靈芝是靈芝的一種，有效藥物成份是普通靈芝的幾十倍。因此，在生產(chǎn)松杉靈芝時(shí)更要嚴(yán)格控制雜菌污染以確保松杉靈芝的產(chǎn)量和質(zhì)量。在正常情況下，制作原種、栽培種或栽培袋的污染率在10%以下，各個(gè)環(huán)節(jié)和操作規(guī)范者，污染率只有1%～5%。如果超出這一范圍，則要及時(shí)查明原因、采取控制措施[1]。

1 菌種污染

松杉靈芝生產(chǎn)中會(huì)用少量的母種生產(chǎn)大量的二級(jí)菌種，再用二級(jí)菌種生產(chǎn)大批三級(jí)菌種進(jìn)行栽培，一環(huán)扣一環(huán)，如果出理大批量的污染，原因之一是原始菌種就是受污染的菌種，用它繼續(xù)生產(chǎn)，就會(huì)造成大批量的二級(jí)菌種或到三級(jí)菌種時(shí)期出現(xiàn)大批量的污染。這樣的雜菌先從接種塊周圍出現(xiàn)，且雜菌種類單一，出現(xiàn)早，一般在接種后3 d～5 d出現(xiàn)。這類污染的防治要靠生產(chǎn)者嚴(yán)格檢查菌種質(zhì)量來解決，在使用前要認(rèn)真做好檢查，而且在培養(yǎng)過程中也要密切觀察，確保菌種長(zhǎng)勢(shì)一致，將生長(zhǎng)緩慢者單獨(dú)培養(yǎng)，將污染的及時(shí)從培養(yǎng)室中清除。

2 滅菌不徹底產(chǎn)生的污染

松杉靈芝菌種制作用的瓊脂培養(yǎng)基和二級(jí)菌種用的木屑培養(yǎng)基，三級(jí)菌種用的木段都要經(jīng)徹底滅菌才能保證松杉靈芝菌絲的正常生長(zhǎng)發(fā)育。這3種物質(zhì)中的微生物不一樣，滅菌時(shí)間也不一樣。三者用高壓滅菌鍋滅菌時(shí)間 （表1）不足，就會(huì)發(fā)生污染率高、發(fā)生早、出現(xiàn)雜菌部位不規(guī)則等特點(diǎn)的雜菌污染。

3種基質(zhì)滅菌時(shí)間不同，瓊脂培養(yǎng)基滅菌時(shí)間最短，木段滅菌時(shí)間最長(zhǎng)。在滅菌時(shí)，要盡量采用高壓蒸汽滅菌，在高溫條件下，蛋白質(zhì)迅速變性，這樣一來，所有微生物很快就會(huì)死亡。如果條件不充許，采用常壓滅菌時(shí)，也要加長(zhǎng)滅菌時(shí)間，要始終保持水溫100℃，保持時(shí)間8 h以上，最好再燜一晚。湖南省懷化職業(yè)技術(shù)學(xué)院的戴水蓮曾對(duì)常用的滅菌灶進(jìn)行過科學(xué)改造，改造后的滅菌灶密封嚴(yán)實(shí)，保溫效果好，成本低。雖然存在一定的缺點(diǎn)，但實(shí)用性很強(qiáng)[2]。蒸汽通入式罩膜滅菌因上氣快、滅菌量大，節(jié)能等諸多優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用，杜順剛等又針對(duì)蒸汽爐滅菌中存在的問題進(jìn)行了改造，使蒸汽爐滅菌在經(jīng)濟(jì)條件不充分的農(nóng)村更加實(shí)用[3]。

表1 高壓滅菌鍋對(duì)松杉靈芝3種培養(yǎng)基滅菌的壓力、溫度、時(shí)間

3 密封不嚴(yán)造成的污染

松杉靈芝在菌種培養(yǎng)時(shí)要用到罐頭瓶和塑料袋作容器，在裝料、搬運(yùn)或滅菌堆放時(shí)，不小心就會(huì)使罐頭瓶出現(xiàn)裂痕，塑料袋出現(xiàn)漏點(diǎn)而看不見，即使經(jīng)過高壓滅菌，待接入菌種幾天后，在破損處就會(huì)出現(xiàn)雜菌。因此，裝料的場(chǎng)地要鋪墊1層塑料布[4]，采用專門廠家生產(chǎn)的聚乙烯塑料袋，罐頭瓶要輕拿輕放，瓶口、袋口要處理干凈，塑料袋裝料時(shí)要小心，將大點(diǎn)的木屑剃除，以免劃破塑料袋。

4 接種操作帶來的污染

對(duì)松杉靈芝菌種進(jìn)行轉(zhuǎn)接的時(shí)候，通常情況下是在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，有的是在接種箱里進(jìn)行。看似無菌操作，稍有不慎，就會(huì)給雜菌以滋生的機(jī)會(huì)。這類污染發(fā)生的時(shí)間較晚，多為7 d左右出現(xiàn)，污染的產(chǎn)生有以下幾方面原因：接種前，接種人員未對(duì)手部進(jìn)行清洗處理，違反接種操作規(guī)程；超凈工作臺(tái)老化起不到凈化作用或者接種箱內(nèi)消毒不徹底[5]；菌種袋或菌種瓶表面附著的雜菌在接種時(shí)被帶入培養(yǎng)料表面；接種室環(huán)境空氣不良；接種器具消毒不嚴(yán)格；消毒藥品已受污染等。

針對(duì)以上產(chǎn)生雜菌的原因，在進(jìn)行松杉靈芝菌種轉(zhuǎn)接的時(shí)候可以參照以下操作：

（1）接種室內(nèi)提前打開超凈工作臺(tái)，將工作臺(tái)的四周用75%酒精棉擦干凈并將接種用的藥品、器具和菌種等先用75%酒精擦干凈放在工作臺(tái)上，地面用75%酒精拖好，人員離開后打開紫外燈30 min；如果是接種箱，接種箱要確保密封性能好，接種箱內(nèi)點(diǎn)燃質(zhì)量合格的煙霧消毒劑，打開紫外燈30 min。

（2）等待接種的菌袋用消過毒的塑料罩住，等待時(shí)同時(shí)打開紫外燈30 min。

（3）確保消毒藥品未受污染。

（4）接種工具準(zhǔn)備2套以備用，可與菌袋一同滅菌處理。

（5）接種前將手指甲剪好、手清洗干凈，操作前穿好殺過菌的大褂，再用75%酒精仔細(xì)擦試手部、腕部及指甲縫、指間縫，用75%酒精棉將接種器具進(jìn)行表面消毒并在酒精燈火焰上燒好滅菌。

（6）接種時(shí)，將菌種前端老化的菌皮去除，菌種口不要離開酒精燈火焰，菌袋、菌瓶等也要盡量靠近酒精燈火焰處以降低污染率。

（7）接種操作要做到 “輕、快、準(zhǔn)、連、小”。 “輕”是指接種時(shí)手及臂部動(dòng)作不要太大，減少空氣流通；“快”指的是接種動(dòng)作要迅速，不要讓菌種和培養(yǎng)料在空氣中暴露太長(zhǎng)時(shí)間； “準(zhǔn)”是指要把菌塊準(zhǔn)確接到位；“連”是指接種操作要一氣呵成，不間斷； “小”是指酒精燈火焰處無菌區(qū)小，盡量在這個(gè)小區(qū)域內(nèi)完成接種操作，且接種過程中要少說話、少走動(dòng)，以減少污染機(jī)率。

（8）菌袋或菌瓶溫度必須降到30℃以下才能進(jìn)行接種操作，以免溫度過高，菌種死亡。

（9）條件允許的情況引進(jìn)新型超凈工作臺(tái)或采用專用的食用菌接種凈化機(jī)、臭氧消毒機(jī)等先進(jìn)設(shè)備。

5 培養(yǎng)過程雜菌污染

接種后的松杉靈芝要運(yùn)到培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)10 d后，菌絲已經(jīng)長(zhǎng)滿菌料表面，此時(shí)出現(xiàn)污染且污染加重，則是培養(yǎng)室環(huán)境不合格而造成的?？赡苁桥囵B(yǎng)室內(nèi)溫度過高，同時(shí)濕度過大，也可能是培養(yǎng)室內(nèi)消毒不徹底，雜菌孢子充斥在培養(yǎng)室空氣中。針對(duì)這種情況，要降溫、降濕，定時(shí)通風(fēng)[6]，并在培養(yǎng)前1 d用75%的酒精拖地并用氣霧消毒劑進(jìn)行煙霧消毒，而且在室內(nèi)用紫外燈消毒4 h。

6 周圍環(huán)境的影響

在對(duì)松杉靈芝菌種及菌袋培養(yǎng)時(shí)，不僅培養(yǎng)室內(nèi)要清潔，培養(yǎng)室外的周圍環(huán)境也不容忽視。經(jīng)常用來蘇爾兒及殺蟲劑噴霧，以減少周圍環(huán)境對(duì)培養(yǎng)室內(nèi)菌袋的影響。

7 脫袋覆土后產(chǎn)生的雜菌

松杉靈芝木段培養(yǎng)好菌絲后，要將其脫袋埋入土中才能長(zhǎng)出漂亮的靈芝。恰恰是脫袋操作會(huì)破壞原來已經(jīng)長(zhǎng)好的菌絲，使菌絲產(chǎn)生間隙，與泥土混合，或多或少的會(huì)產(chǎn)生雜菌，生長(zhǎng)力旺盛的菌絲很快就會(huì)彌補(bǔ)上這個(gè)空隙，但也有小部分的菌絲來不及彌補(bǔ)就被雜菌所侵占，但這種污染慢延性差，及早發(fā)現(xiàn)，及早處理，并不會(huì)對(duì)其它的松杉靈芝木段的產(chǎn)量造成影響，而且長(zhǎng)雜菌的木段也能正常長(zhǎng)出靈芝。

覆土幾天后，就會(huì)看到有小部分的木段表面長(zhǎng)有雜菌，此時(shí)，可將這些木段取出在另一處埋入[7]，并用滅過菌的刀具進(jìn)行稍大面積的切割處理，再進(jìn)行覆土。

為了避免在覆土后出現(xiàn)雜菌污染，可在覆土?xí)r施用一些去除雜菌的藥物，可以使菌床在整個(gè)出菇期間減少雜菌侵害。

8 綜合控制措施

在松杉靈芝生產(chǎn)栽培的整個(gè)流程工藝，即制種、滅菌、接種、培養(yǎng)、出芝每個(gè)環(huán)節(jié)都有出現(xiàn)雜菌污染的可能，因此，在這個(gè)過程中，必須嚴(yán)格操作，不能掉以輕心，讓雜菌有機(jī)可乘，使污染率控制在5%以下。

（1）從有信譽(yù)的科研單位、專業(yè)食用菌機(jī)構(gòu)引進(jìn)優(yōu)良的菌種，先做出菇試驗(yàn)，對(duì)于性狀有些退化的菌種要盡量分離復(fù)壯以保證其優(yōu)質(zhì)。

（2）在生產(chǎn)栽培的各個(gè)環(huán)節(jié)要嚴(yán)格要求，科學(xué)合理地安排每個(gè)生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)，按照流程一絲不茍地進(jìn)行生產(chǎn)。

（3）用于生產(chǎn)的松杉靈芝菌種要嚴(yán)格挑選，任何不理想的菌種均不可姑息，以確保接種物的純度。

（4）提高從業(yè)人員技術(shù)水平，規(guī)范操作，生產(chǎn)環(huán)境要干凈整潔。

（5）建立生產(chǎn)線流水作業(yè)，每個(gè)環(huán)節(jié)的人員都要按技術(shù)管理規(guī)章制度工作以保證生產(chǎn)。

松杉靈芝生產(chǎn)栽培常見的雜菌污染可能是單因素引起的，也可能是多因素共同作用的結(jié)果?？傊獜目傮w上加強(qiáng)技術(shù)操作和科學(xué)的管理才會(huì)收到良好的效果。

[1]王世東，周學(xué)政.菌種生產(chǎn)雜菌污染的原因分析及綜合控制[J].中國(guó)食用菌，2006，25(2)：28-30.

[2]戴水蓮.常用滅菌灶的主要類型及改造方案[J].中國(guó)食用菌，2007，26(2)：57.

[3]杜順剛，戴浩，趙小強(qiáng)，等.蒸汽爐滅菌中存在的問題及改進(jìn)措施[J].中國(guó)食用菌，2007，26(5)：67.

[4]覃培升，黎金鋒，黃福常.雙孢蘑菇生產(chǎn)種常見問題及生產(chǎn)改進(jìn)[J].中國(guó)食用菌，2007，26(3)：27-28.

[5]胡四新.接種箱污染及其防治[J].中國(guó)食用菌，2007，26(2)：59.

[6]高云虹，雷亮，高仲山.原生態(tài)食用菌生產(chǎn)中原種制作失敗的原因及對(duì)策[J].中國(guó)食用菌，2008，27(4)：57-58.

[7]張義奇，張瑞青，狄繼革，等.平菇栽培中的污染防控理論與實(shí)踐[J].食用菌，2006(5)：61-62.