胡華 鞠云飛 徐勇 孟凡敏 遲晶宇 楊燕 李學(xué)政

(山東省胸科醫(yī)院 濟南 250013)

肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A與D在肺結(jié)核診斷中的研究

胡華 鞠云飛 徐勇 孟凡敏 遲晶宇 楊燕 李學(xué)政

(山東省胸科醫(yī)院 濟南 250013)

目的研究肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A、D(pulmonary surfactant associated protein A、D,SP-A、SP-D)在肺結(jié)核患者中的表達,探討2者的相關(guān)性>。方法采用ELISA方法檢測涂陽肺結(jié)核50例,涂陰肺結(jié)核51例,慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者30例及健康人85名血清及痰液中SPA、SP-D的表達情況>。結(jié)果涂陽肺結(jié)核組痰液中SP-A、SP-D的表達與痰液中結(jié)核分枝桿菌的含菌量有相關(guān)性;血清SP-A、SP-D在肺結(jié)核組高表達(P＜0.05),痰SP-D在肺結(jié)核組低表達(P＜0.01)>。結(jié)論SP-A、SP-D的表達與肺結(jié)核之間可能有相關(guān)性,或可成為協(xié)助肺結(jié)核診斷的輔助指標(biāo)。

結(jié)核,肺/診斷;肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A;肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D

肺結(jié)核主要通過飛沫傳播,肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白是飛沫的主要組成成分。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A、D(pulmonary surfactant associated protein A、D,SP-A、SP-D)在肺臟的天然免疫方面有著重要意義[1]。而肺結(jié)核的發(fā)病機制中免疫機制起到了重要作用,本研究探討SP-A和SP-D在肺結(jié)核中的表達情況。

1 資料和方法

1.1 病例選擇

1.1.1 涂陽肺結(jié)核組 病例來源于我院2007年10月—2008年10月的肺結(jié)核患者,無吸煙史,且均經(jīng)痰涂片確診為排菌的肺結(jié)核患者50例：采用熒光染色法查痰抗酸桿菌[2],痰結(jié)核分枝桿菌1+者15例,2+者11例,3+者14例,4+者10例。50例患者平均年齡(41.18±18.78)歲,男性32例,女性18例;男性平均年齡(45.41±19.10)歲,女性平均年齡(33.67±16.06)歲。病變占據(jù)1～2肺野6例,3～4肺野30例,5～6肺野14例。有空洞25例,無空洞25例。

1.1.2 涂陰肺結(jié)核組 同期住院的涂陰肺結(jié)核患者51例,無吸煙史,均符合涂陰肺結(jié)核的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。51例患者平均年齡(41.80±19.99)歲,男 31例,女20例;男性平均年齡(43.87±21.28)歲,女性平均年齡(38.60±17.84)歲。病變占據(jù)1～2肺野18例,3～4肺野27例,5～6肺野6例。有空洞12例,無空洞39例。

1.1.3 慢性阻塞性肺疾病(COPD)組 同期門診的非吸煙COPD緩解期患者30例,其中男17例,女13例;平均年齡(39.35±16.95)歲;均符合COPD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3],嚴(yán)重程度分級為GOLDⅡ級。

1.1.4 健康對照組 來源于我院同期健康體檢者85名,無吸煙史。所有入選者均需滿足下述條件：血常規(guī)中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞比例均在正常范圍;ESR均在正常范圍;胸透檢查示雙肺內(nèi)無病變;排除PPD試驗強陽性患者。85名健康體檢者平均年齡(38.42±15.94)歲,男性 47例,女性 38例;男性平均年齡(35.91±15.63)歲,女性平均年齡(41.52±15.98)歲。

1.2 檢測方法 清晨空腹抽取靜脈血3 ml。1 000 g,離心10 min收集上清保存于-20℃冰箱中備測;痰標(biāo)本合格者在光學(xué)顯微鏡下觀察：上皮細(xì)胞數(shù)＜10個/低倍視野,白細(xì)胞數(shù)＞25個/低倍視野,用4倍體積的0.1%DT T消化痰液,37℃靜置 10 min,1 000 g離心10 min收集上清液,保存于-20℃冰箱中備測;SP-A、SP-D的檢測：采用 ELISA(固相夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗)法檢測備測樣本中SP-A、SP-D的含量,ELISA試劑盒購于美國GBD公司,微孔酶標(biāo)儀型號為BIO-RAD model 680,操作步驟嚴(yán)格按照說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析,計數(shù)資料呈非正態(tài)分布采用完全隨機設(shè)計的Kruskal-Wallis法進行統(tǒng)計;類別資料或者等級資料,使用Spearman秩相關(guān),計數(shù)資料使用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 涂陽肺結(jié)核組、涂陰肺結(jié)核組、COPD組、健康對照組中痰及血清SP-A、SP-D的表達及比較 見表1。

結(jié)果顯示,4組中痰SP-D、血清SP-A、血清SP-D值不全相等,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。痰SP-A在各組間分別差異無統(tǒng)計學(xué)意義;血清SP-D、血清SP-A值在涂陽肺結(jié)核、涂陰肺結(jié)核中表達明顯高于COPD組及健康對照組;而痰SP-D在COPD組及健康對照組中表達明顯高于涂陽肺結(jié)核、涂陰肺結(jié)核組。

2.2 涂陽肺結(jié)核組血清、痰SP-A、SP-D與痰排菌量比較 本研究顯示涂陽肺結(jié)核痰SP-A的表達與痰排菌量存在相關(guān)性(P＜0.05);痰SP-D的表達與PPD試驗結(jié)果、痰排菌量存在相關(guān)性(P＜0.05)(表2)。

3 討論

肺表面活性物質(zhì)(Pulmonary surfactant,PS)分布于肺泡氣液界面,是由Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞合成和分泌的脂質(zhì)和蛋白復(fù)合物,其中90%為磷脂,8%～10%是與脂質(zhì)特異性結(jié)合的蛋白質(zhì),稱之為肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白(pulmonary surfactant associated proteins,SPs)。目前已發(fā)現(xiàn)的SPs包括SP-A、SP-B 、SP-C 、SP-D,其中SP-A 含量最豐富,約占SPs總量的50%。SP-A和SP-D為親水性,能有效降低肺泡表面張力[4]。肺表面活性物質(zhì)在肺部感染及局部炎癥反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)中具有重要意義。而原發(fā)介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)功能的物質(zhì)是肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A及肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D[5-6]。

表1 痰、血清SP-A、SP-D在 4組中的表達

表2 涂陽肺結(jié)核組血清、痰SP-A、SP-D與痰排菌量的相關(guān)性比較

本研究結(jié)果顯示,涂陽、涂陰肺結(jié)核組患者血清中SP-A、SP-D的表達均分別明顯高于健康對照組、COPD組,提示血清中SP-A、SP-D表達與肺結(jié)核存在密切的相關(guān)性。SP-A、SP-D出現(xiàn)在血液循環(huán)的原因可能是因為肺泡Ⅱ型細(xì)胞合成分泌肺泡表面相關(guān)蛋白,肺泡和肺血管血液循環(huán)之間存在一定的濃度差,當(dāng)肺部發(fā)生病變時,肺血管通透性增加,氣-血屏障受損,同時在血管內(nèi)肺泡表面蛋白的代謝下降[7],SP-A能明顯增高吞噬細(xì)胞內(nèi)的超氧自由基和NO濃度,促進殺菌。但對細(xì)胞內(nèi)寄生菌則不盡然,如SP-A可促進肺泡巨噬細(xì)胞對結(jié)核分枝桿菌的攝取,但卻抑制其殺滅[8]。結(jié)核分枝桿菌刺激外周血單核細(xì)胞后,可檢測到SP-A抗體表達升高[9]。SP-D可導(dǎo)致細(xì)菌的凝集反應(yīng),并抑制巨噬細(xì)胞攝取細(xì)菌[1]。然而,減少攝取細(xì)菌不是依靠于細(xì)菌凝集原理。SP-D通過它的CRD區(qū)與結(jié)核分枝桿菌表面的受體結(jié)合,降低肺泡巨噬細(xì)胞對結(jié)核分枝桿菌的吞噬[10],SP-D也抑制了巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的生長[1]。以上研究進一步證明涂陽、涂陰肺結(jié)核患者血清中SP-D、SP-A高表達的原因及意義。

而為什么肺結(jié)核患者SP-A、SP-D在血液中高表達,而痰中低表達?需要理論依據(jù),或許下面的研究可以給我們一些提示：Gold等[11]研究,在局麻下行纖維支氣管鏡檢查獲取肺泡灌洗液,同時抗結(jié)核治療1周及1月后復(fù)查肺泡灌洗液;肺泡灌洗液樣本來源于通過X線確診的病變肺段及未有病變受累的肺段。結(jié)果顯示肺結(jié)核病變受累肺段肺泡灌洗液中SP-A的水平是降低的,抗結(jié)核治療后相應(yīng)肺段的SP-A水平是升高的,而未受累肺結(jié)核的肺段的SP-A水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。綜上所述,我們初步分析導(dǎo)致肺結(jié)核患者痰液中SP-A、SP-D的表達降低的原因,可能為：(1)因結(jié)核分枝桿菌感染導(dǎo)致相關(guān)細(xì)胞分泌減少;(2)結(jié)核分枝桿菌感染肺段的分泌物受到其他正常肺段分泌物的稀釋,從而導(dǎo)致監(jiān)測的痰液中指標(biāo)降低。該原因有待于進一步研究探討。

眾所周知,PPD試驗對肺結(jié)核的診斷有協(xié)助意義,且痰液中檢測到抗酸桿菌是確診涂陽肺結(jié)核的證據(jù)。本研究結(jié)果還提示,涂陽肺結(jié)核痰SP-A、SPD的表達與痰排菌量存在相關(guān)性,因樣本量較少,他們之間存在正相關(guān)或負(fù)相關(guān)值得我們進一步探討;痰SP-D的表達與PPD試驗結(jié)果存在相關(guān)性。從而證明SP-A、SP-D與肺結(jié)核之間可能有相關(guān)性,或可成為協(xié)助肺結(jié)核診斷的輔助指標(biāo)。

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A study of pulmonary surfactant associated protein A、D for diagnosis in pulmonary tuberculosis

Hu Hua,Ju Y unfei,Xu Y ong,Meng Fanmin,Chi Jingyu,Y ang Y an,Li Xuezheng
(Shandong Provincial Chest Hospital,Ji'nan250013,China)

ObjectiveTo study the expression of pulmonary surfactant associated protein A、D(SP-A、SP-D)and their correlation in patients with pulmonary tuberculosisMethods The expression of SP-A、SP-D of sputum and serum in 50 patients with smear positive pulmonary tuberculosis,51 patients with smear negtive pulmonary tuberculosis,30 patients with COPD and 85 healthy volunteers were detected by ELISA.ResultsThe expression of SP-A、SP-D of sputum in patients with smear positive pulmonary tuberculosis were correlated with the amount ofmycobacterium tuberculosisin sputum from these patients.The expression of SP-A、SP-D of serum in patients with pulmonary tuberculosis were significant higher than that of others(P＜0.05).But the expression of SPD of sputum in patients with pulmonary tuberculosis were significant lower than that of others(P＜0.01).ConclusionsThe expression of SP-A、SP-D in patients are correlated with pulmonary tuberculosis.They may be an adjuvant marker to diagnose pulmonary tuberculosis.

tuberculosis/diagnosis;pulmonary surfactant-associated protein A;pulmonary surfactant-associated protein D,SP-A,SP-D

Hu hua(huhua2751@126.com)

胡華(huhua2751@126.com)

2011-03-21)

(本文編輯：范永德)