王 新，崔一吉吉，邵 紅，張秀英

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

中藥增效抗菌復(fù)方，是指在經(jīng)典驗(yàn)方“白頭翁湯”的基礎(chǔ)上進(jìn)行加減，以黃芩、秦皮、苦參和白頭翁為主藥，同時(shí)添加對(duì)中藥有抗菌增效作用的甲氧芐啶而組成。經(jīng)體外抗菌試驗(yàn)和小鼠體內(nèi)抗菌試驗(yàn)證實(shí)，中藥增效抗菌復(fù)方對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門氏菌均有較強(qiáng)的抗菌能力[1]。中藥的抗感染作用不僅是對(duì)病原菌的直接抑制作用，更重要的是中藥對(duì)機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)作用。因此，研究中藥增效抗菌復(fù)方對(duì)機(jī)體免疫功能的影響，可以進(jìn)一步揭示藥物在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮抗感染作用的機(jī)制。本研究通過(guò)分析中藥增效抗菌復(fù)方對(duì)小鼠免疫功能的影響，研究該藥物在動(dòng)物體內(nèi)抗感染作用的機(jī)制，為開發(fā)高效的中西藥復(fù)方抗菌制劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體質(zhì)量為20 g左右的昆明種小鼠300只。

1.2 主要試劑和儀器 甲氧芐啶購(gòu)自太原市康瑞寶獸藥制造有限公司；秦皮、苦參、白頭翁和黃芩均購(gòu)自大慶福瑞邦醫(yī)藥有限公司；溶菌酶試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；刀豆蛋白A和MTT試劑盒購(gòu)自江蘇碧云天生物技術(shù)有限公司；Coulter JT血細(xì)胞分析儀為美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司產(chǎn)品；DG5033A酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀為南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司產(chǎn)品。

1.3 藥物的配制 采用水提醇沉淀法將各中藥材分別制成生藥含量1 g/mL的藥液，將黃芩、秦皮、白頭翁和苦參藥液按照1∶4∶1∶2的比例混合，再按5 mg/g的劑量加入甲氧芐啶，制成中藥增效抗菌復(fù)方。100℃流通蒸汽滅菌20 min，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 將40只小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，雌雄各半，隔籠飼養(yǎng)。對(duì)照組每只小鼠腹腔注射生理鹽水0.5 mL；其他3組小鼠分別按照低劑量(1 g/kg)、中劑量(5 g/kg)、高劑量(10 g/kg)進(jìn)行腹腔注射中藥增效抗菌復(fù)方0.5 mL。均為每日1次，連續(xù)15 d。

1.5 指標(biāo)測(cè)定 給藥后，對(duì)小鼠血液學(xué)指標(biāo)和免疫器官指數(shù)進(jìn)行測(cè)定，分別按照文獻(xiàn)[2]中的半體內(nèi)法、乳酸脫氫酶釋放法和MTT法測(cè)定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、NK細(xì)胞活性和脾淋巴細(xì)胞增殖功能。按照文獻(xiàn)[3]的方法測(cè)定血清溶血素。

1.6 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件處理，數(shù)據(jù)以平均值()±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 中藥增效抗菌復(fù)方對(duì)小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響中藥增效抗菌復(fù)方的高劑量組和中劑量組的血液學(xué)指標(biāo)與對(duì)照組相比(淋巴細(xì)胞除外)，差異均顯著(p<0.05)，而低劑量組與對(duì)照組相比，差異不顯著(p>0.05)(表1)。結(jié)果表明，中藥增效抗菌復(fù)方可以對(duì)小鼠血液學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生明顯的影響。

表1 小鼠血液學(xué)指標(biāo)結(jié)果(±SD)Table 1 The results of hematological indices in mice(±SD)

表1 小鼠血液學(xué)指標(biāo)結(jié)果(±SD)Table 1 The results of hematological indices in mice(±SD)

注：同列進(jìn)行比較，含有相同字母者差異不顯著(p>0.05)，含有不同字母者差異顯著(p<0.05)，以下各表相同。Note:Comparison between the same column,with the same letter are not significantly different(p>0.05),with different letters were significantly different(p<0.05),the same as the following table.

2.2 對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響 胸腺和脾臟指數(shù)可以反映免疫器官的發(fā)育和免疫細(xì)胞的功能狀況，間接反映了機(jī)體的免疫水平[4]。中藥增效抗菌復(fù)方可以明顯提高胸腺和脾臟指數(shù)，與對(duì)照組比較差異顯著(p<0.05)(表 2)。

2.3 對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NK細(xì)胞活性的影響巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的指標(biāo)之一，而NK細(xì)胞屬于非特異性免疫細(xì)胞，在機(jī)體抗腫瘤和早期抗病毒和細(xì)胞內(nèi)寄生菌感染的免疫過(guò)程中起重要作用。中藥增效抗菌復(fù)方可以提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NK細(xì)胞活性，并且隨劑量增加而增強(qiáng)。與對(duì)照組相比差異顯著(p<0.05)(表3)。但當(dāng)劑量增加到一定程度后，其作用效果不再增強(qiáng)(中劑量組和高劑量組之間的差異不顯著，p>0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明中藥增效抗菌復(fù)方可增強(qiáng)小鼠非特異性免疫功能。

2.4 對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能和血清溶血素水平的影響 血清溶血素是反映體液免疫功能的重要指標(biāo)，淋巴細(xì)胞增殖能力可直接反映細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。中藥增效抗菌復(fù)方中劑量組、高劑量組與對(duì)照組比較，可顯著提高血清溶血素水平和小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能(p<0.05)；但低劑量組與對(duì)照組相比，差異不顯著(p>0.05)(表4)。試驗(yàn)結(jié)果表明中藥增效抗菌復(fù)方可明顯增強(qiáng)小鼠的特異性免疫功能。

表2 對(duì)小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響()Table 2 Effects of viscera index of immune organs in mice()

表2 對(duì)小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響()Table 2 Effects of viscera index of immune organs in mice()

組別 脾臟指數(shù) 胸腺指數(shù)GroupsSpleen index(mg/g)Thymus index(mg/g)低劑量組Low dose group4.87±0.82b3.86±0.51b中劑量組Middle dose group5.56±0.53c4.77±0.39c高劑量組High dose group6.44±0.37d4.98±0.37d對(duì)照組Control group4.00±0.69a3.47±0.42a

表3 對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NK細(xì)胞活性的影響()Table 3 Effects of macrophage phagocytosis and NK cells activity in mice()

表3 對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NK細(xì)胞活性的影響()Table 3 Effects of macrophage phagocytosis and NK cells activity in mice()

組別 吞噬率 吞噬指數(shù)NK細(xì)胞活性GroupsPhagocytic percentage(%)Phagocytic indexNK cell activity(%)低劑量組Low dose group30.10±3.38a39.20±3.16a28.41±5.45a中劑量組Middle dose group37.30±4.50b47.90±4.20b38.92±8.62b高劑量組High dose group36.20±4.80b50.10±3.93b40.76±7.91b對(duì)照組Control group31.90±4.33a40.90±6.64a26.57±6.87a

表4 對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能和血清溶血素水平的影響()Table 4 Effects of spleen lymphocyte proliferation and the level of serum hemolysin in mice()

表4 對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能和血清溶血素水平的影響()Table 4 Effects of spleen lymphocyte proliferation and the level of serum hemolysin in mice()

在確定中藥增效抗菌復(fù)方抗菌作用的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索其對(duì)機(jī)體免疫功能的影響，從而較全面的揭示其在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮抗感染作用的機(jī)制。中藥增效抗菌復(fù)方中含有黃芩苷、白頭翁糖蛋白和苦參堿等調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的成分[5-7]。因此，其對(duì)小鼠免疫功能的增強(qiáng)作用不是單一藥物的單獨(dú)作用，而是方中藥物綜合作用的結(jié)果，詳細(xì)機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

[1]王新，崔一吉吉，韓鐵鎖.中藥抗菌復(fù)方Ⅰ的篩選及甲氧芐啶對(duì)其抗菌增效的研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24(7)：969-972.

[2]付俊鶴，余宙，胡居吾，等.精制蜂膠對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].食品科學(xué)，2009，30(19)：286-290.

[3]張建華，姚素波，劉潔，等.綠原酸對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].華西藥學(xué)雜志，2009，24(4)：343-344.

[4]陳冬金，黃志堅(jiān)，陳強(qiáng).復(fù)方黃芩顆粒劑對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，29(5)：809-812.

[5]戴玲，王華，陳彥.白頭翁糖蛋白對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞免疫的增強(qiáng)作用[J].中國(guó)生化藥物雜志，2000，25，(5)：230-231.

[6]咼愛秀，黃興國(guó)，雷黎明.苦參堿對(duì)免疫功能低下小鼠免疫功能的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物雜志，2008，2(11)：7-9.

[7]雷芳.黃芩苷藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19(15)：87-88.