林 靜，侯巧燕，農林琳，樂江華*

(1桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院，廣西 桂林 541001;2桂林醫(yī)學院)

宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生和發(fā)展是一個復雜的病理過程，經歷從正常上皮→子宮頸上皮內瘤變→子宮頸癌幾個階段。2008年1月～2009年10月，我們采用免疫組化法檢測了宮頸鱗狀細胞癌組織中線粒體促凋亡蛋白(Smac)、存活蛋白(Livin)的表達，旨在進一步了解宮頸鱗狀細癌的發(fā)生、發(fā)展機制。

1 材料與方法

1.1 材料 選取桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院手術切除的宮頸鱗狀細胞癌組織標本12份(宮頸癌組)，均為女性，年齡5～57歲。所有病例均經病理確診，且術前均未行放、化療。另選32份宮頸上皮內瘤變組織(內瘤變組)和9份正常宮頸組織(正常組)作對照。三組一般資料無統(tǒng)計學差異。主要試劑:組織芯片(桂林泛普生物技術有限公司協(xié)助制作)，免疫組化染色多克隆抗體Smac(美國Santa Cruz Biotechnology公司)，免疫組化染色多克隆抗體Livin(武漢博士德公司)，二抗試劑盒(福建邁新公司)。

1.2 Smac、Livin表達檢測 所有標本均經10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋。用特制的組織芯片制作器，將以上組織蠟塊制作成組織芯片，共53個組織芯粒，星形細胞瘤Ⅲ級1例，備用。每芯直徑1.5 mm，厚度4 μm。采用成人胃標本組織切片作為陽性對照。免疫組化染色操作嚴格按試劑盒說明書進行，DAB顯色，蘇木精復染，抗原修復。用已知陽性胃組織標本作陽性對照;以PBS代替一抗作陰性對照。一張組織芯片染一種抗體，用1張芯片做常規(guī)HE染色對照。結果判斷標準:Smac及Livin陽性細胞均為胞質著色，均呈棕黃色。參照Bachtiary等［1］方法，高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)200個細胞，共1000個，染色弱者、清晰者、強者分別記為1、2、3 分;陽性細胞數(shù) ＜1.0%為 0 分，1.0%～10.0%為 1 分，11.0% ～50.0%為 2 分，51.0% ～80.0%為3分，＞80.0%為4分，綜合兩項評分總分。總分≥3分為Smac、Livin陽性表達，總分＜3分為陰性表達。免疫組化結果由兩位病理學專家獨立閱片確定，不一致之處協(xié)商后統(tǒng)一意見。分析Smac、Livin表達的相關性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)采用Fisher確切概率法或χ2檢驗、R×C表資料的相關分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Smac、Livin表達 宮頸癌組、內瘤變組、正常組Smac的陽性表達率分別為91.67%、62.50%、0，宮頸癌組、內瘤變組陽性率均高于對照組，宮頸癌組陽性率高于內瘤變組(P均＜0.01);Livin的陽性表達率分別為 91.67%、90.63%、22.22%，宮頸癌組、內瘤變組陽性率均明顯高于對照組(P均＜0.01)。

2.2 相關性分析 宮頸鱗狀細胞癌中Smac、Livin表達呈正相關(χ2=5.3242，P ＜0.05)。

3 討論

Smac是一種凋亡因子，可以與多種凋亡蛋白抑制劑(IAPs)分子結合，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一存在于哺乳動物細胞中直接抑制IAPs的蛋白。Smac在細胞受到各種凋亡刺激時與細胞色素c一起從線粒體釋放出來與IAPs結合，解除IAPs對半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)的抑制作用，進而促進細胞凋亡［2］。Yoo等［3］用免疫組化分析 Smac的表達，結果顯示癌中表達率為62%，在肉瘤中表達率為22%，表明其在不同腫瘤組織中的表達不同。但包仕廷［4］等研究表明，Smac在肝細胞癌中低表達，而在癌旁組織和正常肝組織中高表達。本研究宮頸癌組、內瘤變組Smac陽性率均高于對照組，此與Krepela［5］等在非小細胞肺癌中的報道相符。

IAPs是一類內源性細胞凋亡抑制因子，在很多物種中起著抑制凋亡的作用，其過度的表達引起細胞凋亡不足與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。Livin作為人類IAPs家族的新成員，有明顯的抗細胞凋亡作用，主要通過與介導細胞凋亡的下游效應分子，即激活形式的Caspase-3和Caspase-7結合，并抑制其活性而發(fā)揮作用。文獻報道，Livin在大多正常成人組織中低表達或不表達，而在多數(shù)惡性腫瘤中高表達。本研究宮頸癌組、內瘤變組Livin陽性率均高于對照組，此與Hariu等［6］在肺癌中的報道一致，表明Livin有可能促進了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。本研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸鱗狀細胞癌中Smac、Livin表達呈正相關，提示兩者可能共同參與細胞凋亡通路的調節(jié)，而促進宮頸鱗狀上皮病變的發(fā)生發(fā)展。

總之，Smac和Livin表達與宮頸鱗狀細癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，兩者表達相關性提示可能共同參與細胞凋亡通路的調節(jié)。

［1］Bachtiary B，Schindl M，Potter R，et al.Overexpression of HIF-1α indicates diminished response to radiotherapy and unfavorable prognosis in patients receiving radical radiotherapy for cervical cancer［J］.Clin Cancer Res，2003，9(6):2234-2240.

［2］Shivapurkar N，Reddy J，Chaudhary PM，et al.Apoptosis and lung cancer:a review［J］.J Cell Biochem，2003，88(5):885-898.

［3］Yoo NJ，Kim HS，Kim SY，et al.Immunohistochemical analysis of Smac/DIABLO expression in human carcinomas and sarcomas［J］.APMIS，2003，111(3):382-388.

［4］包仕廷，桂水清，林木生，等.Smac和Survivin基因在肝癌中的表達及與細胞凋亡的關系［J］.中華實驗外科雜志，2005，22(9):1062-1063.

［5］Krepela E，Prochazka J，F(xiàn)iala P，et al.Expression of apoptosome pathway-related transcripts in non-small cell lung cancer［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2006，132(1):57-68.

［6］Hariu H，Hirohashi Y，Torigoe T，et al.Aberrant expression and potency as a cancer immunotherapy target of inhibitor of apoptosis protein family.Livin/ML-IAP in lung cancer［J］.Clin Cancer Res，2005，11(3):1000-1009.