文焰林，鄧顯忠，崔 曙，姜 果，鮮述彥，廖 波

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，四川南充 637000)

目前，大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型仍被廣泛運用于精索扭轉(zhuǎn)及睪丸移植缺血再灌注損傷的實驗研究。但以往該模型的建立往往利用縫線縫合睪丸白膜固定扭轉(zhuǎn)模型，或用線結(jié)扎精索血管。由于縫線縫合導(dǎo)致血睪屏障的破壞及睪丸炎癥性反應(yīng)，使得精索扭轉(zhuǎn)模型的建立相對后續(xù)研究有很大干擾，而用線結(jié)扎容易導(dǎo)致結(jié)扎處水腫，要求恢復(fù)血供時不易解除結(jié)扎線。本文就利用睪丸肉膜囊固定術(shù)來建立一種對睪丸無損傷、簡便易行的大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型，為臨床病理生理、形態(tài)學(xué)、缺血再灌注損傷及對健側(cè)睪丸功能影響的進一步研究打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

選用SD雄性大鼠42只，購自川北醫(yī)學(xué)院動物實驗中心［scxn(川)2008－18］，體重(65－219)g，平均120g。手術(shù)在川北醫(yī)學(xué)院動物實驗中心動物手術(shù)室進行。

1.2 方 法

將大鼠稱重，利用隨機數(shù)字表分組編號。用2%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉后，固定與鼠板上，消毒。用手將左側(cè)睪丸由腹腔推送至左側(cè)陰囊內(nèi)，剪開陰囊皮膚，用齒躡提起左側(cè)陰囊皮膚，擴大陰囊皮膚切口，暴露肉膜層，用止血鉗充分分離、擴張左側(cè)陰囊皮膚與肉膜層之間的間隙，提起并打開肉膜層，通過肉膜層拉出睪丸、附睪(圖1 A)，分離睪丸引帶，按要求將精索順時針扭轉(zhuǎn)720°后維持精索位置不變(圖1B)，縫合縮小肉膜層切口，使僅容精索通過，將睪丸、附睪置于陰囊皮膚與肉膜層之間分離的肉膜囊內(nèi)，拉攏縫合陰囊切口。96小時后(按后續(xù)試驗要求所選擇的時間)打開原切口進入陰囊，見睪丸、附睪缺血壞死(圖1C)，以上所有手術(shù)操作均嚴格按照無菌原則進行。

2 結(jié)果

手術(shù)時間為(3－5)分鐘，麻醉后死亡3只，都為體重相對輕的大鼠，其余39只大鼠于手術(shù)96小時后打開切口見睪丸、附睪缺血壞死提示建模成功。

3 討論

精索扭轉(zhuǎn)又稱睪丸扭轉(zhuǎn)，好發(fā)于青少年，每年25歲以下的青少年發(fā)病率為1/4000［1］，成人發(fā)病率相對較低，Witherington等［2］統(tǒng)計睪丸扭轉(zhuǎn)患者中成人患者所占比例為39%。目前研究證明一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)可致同側(cè)睪丸的組織學(xué)損傷，對側(cè)睪丸是否受損在解剖和生理方面都有爭議，雖然Turner等［3］、Tarhan等［4］認為一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)對對側(cè)睪丸沒有影響。但絕大多數(shù)學(xué)者認為會導(dǎo)致對側(cè)睪丸功能受損，關(guān)于對側(cè)睪丸損傷的發(fā)生也存在不同的學(xué)說:①交感神經(jīng)反射學(xué)說:部分學(xué)者認為雙側(cè)睪丸之間的神經(jīng)反射導(dǎo)致對側(cè)損傷。Shiraishi等［5］通過實驗發(fā)現(xiàn)一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)1小時后復(fù)位，對側(cè)睪丸組織的NO合成酶(NOS)表達增加，睪丸組織萎縮，生精細胞凋亡增加，認為可能存在神經(jīng)血管舒縮反射導(dǎo)致對側(cè)的睪丸發(fā)生改變。Otcu等［6］觀察到一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致健側(cè)生殖股神經(jīng)交感神經(jīng)沖動釋放增加，推測存在一種自主反射機制，由傷害性刺激激活導(dǎo)致對側(cè)睪丸損傷。②自身免疫學(xué)說:由于血生精小管屏?障的破壞，導(dǎo)致激活了例如抗精子抗體、抗間質(zhì)細胞抗體等免疫反應(yīng)，引起對側(cè)和患側(cè)睪丸功能受損。Rodriguez等［7］通過實驗發(fā)現(xiàn)一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后復(fù)位導(dǎo)致對側(cè)睪丸曲精小管和生殖細胞凋亡，認為由于體液和細胞免疫激活巨噬淋巴細胞系統(tǒng)和肥大細胞等引起腫瘤壞死因子、炎癥反應(yīng)作用導(dǎo)致對側(cè)睪丸生殖細胞凋亡。③缺血再灌注損傷:對側(cè)睪丸的缺血再灌注損傷導(dǎo)致ROS增加和氧自由基等致細胞線粒體等的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)引起對側(cè)睪丸受損。

關(guān)于精索扭轉(zhuǎn)動物模型的研究歷史較長，但到目前為止尚無公認的方案。Turner等［8］報道取下腹正中切口，拖出睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍筋膜至附睪頭，按要求旋轉(zhuǎn)睪丸制作扭轉(zhuǎn)模型后用6－0單絲線縫合睪丸和陰囊，Abasiyanik等［9］取左側(cè)腹股溝切口，拖出睪丸，按要求扭轉(zhuǎn)睪丸，用11－0無損傷縫合線縫合睪丸白膜和陰囊。Merimsky等［10］取腹部切口，拖出精索睪丸，將精索結(jié)扎，保證靜脈回流受阻，引起充血性壞死，但又不能完全阻斷睪丸血供，按要求保留結(jié)扎線到規(guī)定時間后去掉結(jié)扎線。以上三種是常見的建立精索扭轉(zhuǎn)模型的方法，但關(guān)于結(jié)扎精索后缺血致對側(cè)睪丸功能受損的報道不盡相同，Savas等［11］也認為結(jié)扎引起的缺血導(dǎo)致對側(cè)睪丸功能受損，但Nagler等［12］認為結(jié)扎后不會導(dǎo)致對側(cè)睪丸功能受損。關(guān)于利用縫線固定睪丸建立模型有很多弊端，Lotan等［13］利用流式細胞術(shù)分析利用縫線縫合睪丸固定的方法導(dǎo)致生精細胞萎縮的比例超過肉膜囊固定的方法，并且縫線穿過睪丸實質(zhì)易導(dǎo)致睪丸炎癥性損害，會明顯干擾精索扭轉(zhuǎn)的實驗相關(guān)數(shù)據(jù)資料。雖然利用線結(jié)扎精索的方法沒有破壞血睪屏障，不會導(dǎo)致由于縫線破壞睪丸曲細精管引致精子等抗原溢出引起的免疫性反應(yīng)，但由于大鼠精索細小，結(jié)扎后組織水腫，不易拆除結(jié)扎線，結(jié)扎程度也不易掌握。鑒于一側(cè)精索扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致健側(cè)睪丸生精功能受損的機制未明，現(xiàn)三種學(xué)說中明確提出了自身免疫學(xué)說，所以建立精索扭轉(zhuǎn)模型時必須避免人為的引起睪丸自身免疫反應(yīng)。Ritchey［14］等介紹利用睪丸肉膜囊固定術(shù)是無損傷的睪丸固定術(shù)，筆者采用睪丸肉膜囊固定術(shù)用于大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型的建立，最大程度的模擬了該病的自然發(fā)病過程，該建模方法國內(nèi)外未見報道，此種方法建立大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型成功，手術(shù)操作簡單、出血少，沒有損傷睪丸實質(zhì)，對缺血再灌注損傷、免疫學(xué)研究等沒有干擾，是建立精索扭轉(zhuǎn)模型的良好方法，值得推廣。

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