山東省淄博市周村區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(255300) 況紅星

嬰兒肝炎綜合征簡稱嬰肝(IHS)是指 1歲以內(nèi)的嬰兒(包括新生兒)因病毒、細(xì)菌、弓形體等感染和全身性感染引起的中毒性肝炎、先天性代謝異常以及肝內(nèi)或肝外膽道阻塞或畸形等原因引起的肝臟炎癥的臨床癥候群,常發(fā)生各種合并癥或并發(fā)癥,其預(yù)后各不相同,重者可致死亡或留有嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[1-2]。研究資料顯示,引起該綜合征的感染因子很多,包括乙型肝炎病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、單純皰疹病毒、風(fēng)疹病毒等。近年來,人們對ISH的研究主要集中在 CMV感染上,而對由 EBV感染導(dǎo)致的 ISH報道較少。

本研究對 80例 ISH患兒和 40例正常對照嬰兒進(jìn)行了 EBV VCA-IgM的檢測。對患兒外周血細(xì)胞EB基因進(jìn)行定量檢測,PCR-Southern檢測患兒咽分泌物 EBV DNA。探討 ISH與 EBV感染的關(guān)系,借以對該病進(jìn)行早期預(yù)防、治療干預(yù),延緩各種急慢性并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展,從而改善患兒的生活質(zhì)量。

1 主要儀器和試劑

1.1 主要儀器 1)DNA擴(kuò)增儀 480型(美國 PE公司)。2)PE Geneamp5700型實(shí)時熒光定量 PCR分析儀(美國 ABI公司)。

1.2 主要試劑 1)酶聯(lián) EBV VCA-Ig抗體測定試劑盒(德國 NOVATEC公司)。2)EBV PCR熒光檢測試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)。

2 資料來源及方法

2.1 患兒組 選擇 2006年 3月至 2009年 6月我院兒科病區(qū)收治的 80例 ISH患兒作為研究對象,其中男 41例,女 39例,年齡 1天至 11月,平均(3.2±2.6)個月。80例患兒均具有黃疸、肝脾腫大、肝功異常等癥狀及體征,符合 ISH的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

2.2 對照組 選擇 2006年 3月至 2008年 6月在我院健康查體的兒童 40例,其中男 20例,女 20例,年齡 1個月至 1歲,平均(3.3±2.8)個月。研究組和對照組嬰兒的性別、年齡間差異無顯著性。

2.3 方法 1)PCR-Southern檢測咽分泌物 EBVDNA。2)實(shí)時熒光定量 PCR技術(shù)檢測外周血 EBVDNA。3)酶聯(lián) EBV VCA-IgM測定。

2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用計數(shù)資料卡方檢驗(yàn)中的四格表資料的 X2檢驗(yàn)和四格表精確檢驗(yàn)法,SPSS11.6統(tǒng)計軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

3 結(jié) 果

3.1 EBV特異性 IgM抗體檢測結(jié)果 ISH患兒組與正常對照組血清病毒特異性 IgM抗體陽性率比較,ISH組 80例,EB-VCA-IgM為 11.25(9/80),正常對照組 40例,EB-VCA-IgM為 2.5(1/40)。與對照組比較,P＜0.01。

3.2 PCR檢測 EBV DNA結(jié)果 PCR-Southern檢測咽分泌物 EBV DNA的結(jié)果,及 EBV BamHⅠ-W片段擴(kuò)增產(chǎn)物長度為 129bp,部分標(biāo)本 Southern雜交結(jié)果 ,見圖 1。

圖1 PCR-Southern雜交檢測部分患兒咽分泌物EBV DNA結(jié)果 Lane 1：陽性對照 B95-8細(xì)胞;Lane 2：陰性對照 Ramos細(xì)胞;Lane 3,5,6,7,9,10,15,16：EBV陽性標(biāo)本;Lane 4,8,11,12,13,14：EBV陰性標(biāo)本。

3.3 實(shí)時熒光定量 PCR檢測血標(biāo)本 EBV DNA結(jié)果見表 1。

表1 嬰兒肝炎綜合征患兒組與對照組PCR檢測結(jié)果

4 討 論

ISH是一組由多種病因引起的病理及臨床表現(xiàn)基本相似的臨床癥候群,其臨床主要表現(xiàn)為黃疸、肝脾腫大及肝功能異常,多發(fā)生在 1歲以內(nèi)的嬰兒,是主要由病毒感染引起的一組綜合征[3]。EB病毒的原發(fā)感染在嬰幼兒往往呈隱形感染,臨床可表現(xiàn)出上呼吸道病毒感染癥狀,還因?yàn)?B細(xì)胞的大量激活而引起淋巴結(jié)以及肝脾腫大,并可引起肝損傷[4]。

EBV感染在小兒非常普遍,我國 3～5歲兒童VCA-IgG抗體陽性率達(dá) 90%以上[5]。幼兒期 EBV感染多呈隱性而無臨床癥狀,少數(shù)兒童 EBV感染后臨床上可以出現(xiàn)上呼吸道病毒感染癥狀以及心肌炎、嬰兒肝炎、過敏性紫癜、嗜血細(xì)胞綜合征等多種疾病[6]。嬰兒 EBV感染后導(dǎo)致嬰兒肝炎的主要臨床表現(xiàn)同巨細(xì)胞病毒性肝炎相似,主要表現(xiàn)為肝功能損害和肝脾腫大。

本研究中,25例患兒咽分泌物 EBV DNA陽性,16例患兒外周血 EBV DNA陽性,兩者檢出率明顯高于正常對照組,其中咽分泌物 EBVDNA的檢出率更高,表明咽上皮細(xì)胞和唾液腺是 EBV增殖的重要場所。

VCA-IgM是 EBV原發(fā)感染的標(biāo)志,有研究認(rèn)為VCA-IgM僅見于 EBV的原發(fā)感染。本研究中 80例患兒中 9例 VCA-IgM陽性,提示部分嬰兒肝炎是由EBV的原發(fā)感染所致?；純航M VCA-IgM陽性率與正常對照組相比差異無顯著性,可能與患兒免疫功能低下,產(chǎn)生 IgM能力弱以及 VCA-IgM檢測的靈敏度有關(guān)。

血清 VCA-IgM陽性率低于外周血和咽分泌物EBV DNA陽性率,可能由于研究對象均為 1歲以內(nèi)的患兒,其細(xì)胞和體液免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟,產(chǎn)生IgM能力相對成人來說較弱,部分患兒病毒感染后不能有效產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

EBV感染參與部分 ISH的發(fā)生發(fā)展,臨床對年齡較小伴肝功能損害的患兒,在排除宮內(nèi)感染,尤其巨細(xì)胞病毒、乙肝病毒等感染后,應(yīng)考慮到 EBV感染的可能。

[1] 姚楨.嬰幼兒肝炎綜合征的研究進(jìn)展[J].臨床肝膽病雜志,1994,10(1)：12

[2] 朱啟镕,王曉紅,王建設(shè).嬰兒肝病綜合征診治修訂方案[J].中華傳染病雜志,2004,22(5)：357

[3] 魏克倫.兒科疾病診治指南[M].沈陽：東北大學(xué)出版社,1996：215

[4] Shibyya A,TsuchihashiT,WatanabeM,etal.Severe chronic active epstein-barr infection associated with multiple necrotic Icsions in the liver[J].Hepatol Res,2003,25：447

[5] 吳葆菁,李文益,張玉蘭,等.小兒 EB病毒感染相關(guān)疾病臨床研究[J].臨床兒科雜志,2003,21(8)：455

[6] Okan M.Overview and problematic standpoints of severe chronic active Epstein-Barr virus infection syndrome[J].Oncol Hematol,2002,(44)：273