魏莉本,黃 瑋

固經(jīng)丸是經(jīng)批準(zhǔn)的醫(yī)院中藥制劑,由白芍等 15味中藥制成的丸劑,其中白芍具有清熱涼血活血,散瘀止痛等功效。為有效控制該品種的質(zhì)量,對(duì)白芍的含量測定方法進(jìn)行了試驗(yàn)研究。結(jié)果表明,該法重現(xiàn)性好,操作簡便,可作為該品種的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 2695高效液相色譜儀,Waters 2996PDA檢測器,Empower系統(tǒng)工作站,AE-240S電子天平, TL-360型超聲波器。

1.2 試藥 芍藥苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測定用,批號(hào)為 110736-200732),乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。固經(jīng)丸：徐州市中醫(yī)院生產(chǎn)(批號(hào) 070421、070423、070424)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 ZORBAXSBC18色譜柱(4.6mm×150mm,5 m),乙腈-水(14：86)為流動(dòng)相,流速1.0ml/m in,柱溫 32℃,檢測波長 230 nm,進(jìn)樣量 10μl。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算,小于 3000。

2.2 溶液的制備 (1)對(duì)照品溶液的制備：精密稱取芍藥苷對(duì)照品約 10mg置 100ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。(2)供試品溶液的制備：取本品研碎,取細(xì)粉 1.0 g,精密稱定,精密加甲醇 25ml,稱定重量,超聲處理30m in(功率250W,頻率 33 Hz),放冷,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得[1]。(3)陰性對(duì)照溶液的制備：取不含白芍藥材的陰性對(duì)照制劑。取 1.0 g,精密稱定,按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作,制得陰性對(duì)照溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱定以五氧化二磷為干燥劑并減壓干燥15 h的芍藥苷適量,加甲醇制成每1m l含 0.0950 mg的溶液,作為貯備液。分別精密吸取貯備液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml置10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度。再精密吸取上述溶液各 10μl,分別注入液相色譜儀,測定,測得峰面積。用峰面積(Y)與進(jìn)樣濃度(X)進(jìn)行線性回歸處理,得回歸方程Y=2.28×104+6.51×106X;相關(guān)系數(shù)r=0.9998。表明芍藥苷濃度在0.00950～0.07600mg/ml之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密稱定芍藥苷對(duì)照品9.47mg,置100 m l量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取 5ml,置 10 m l量瓶中,用甲醇稀釋至刻度作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液 10μl,連續(xù)進(jìn)樣 6次,測定峰面積,結(jié)果 RSD為0.58%,表明精密度較好。結(jié)果見表 1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品(產(chǎn)品批號(hào)：070424),按供試品溶液制備方法制得供試品溶液。精密吸取 10μl,分別在 0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣測定峰面積,結(jié)果RSD為 0.94%,表明供試品溶液在 12h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表 2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)樣品(070423)1.0 g共6份,按供試品溶液制備方法制備,進(jìn)樣,測定,計(jì)算含量,RSD為0.60%(n=6),表明該方法的重現(xiàn)性良好。結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同批號(hào)樣品(批號(hào)為 070424)6份,分別置具塞錐形瓶中,分別精密量取芍藥苷貯備液(濃度為0.0950mg/ml)5m l,精密加甲醇20ml,按供試品溶液制備方法制備,依法測定,計(jì)算回收率。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.8 樣品測定 分別按“2.2”供試品溶液的制備項(xiàng)目項(xiàng)下操作制備不同批號(hào)(070421、070423、070424)的供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)行測定。測定結(jié)果見表 5和圖 1。

表5 供試品含量測定結(jié)果

圖1 HPLC色譜圖

3 討論

提取溶劑的用量分別以 20、25、30ml的甲醇超聲提取,結(jié)果表明25ml即可提取完全。

提取時(shí)間的選擇分別考察超聲 30、40min不同時(shí)間芍藥苷的提取率,結(jié)果30min提取率與40min相同,因此確定提取時(shí)間為 30min。本文建立的方法簡便、快捷、準(zhǔn)確率好、靈敏度高,可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：428.