王 方 張 靜 周新人 云升浩 王可敬 寇俊峰 蔡國(guó)芳 孫厚坦

近年來(lái)，有關(guān)干細(xì)胞的研究為多種疾病的治療提供了嶄新的思路。研究證實(shí)自體骨髓干細(xì)胞移植可用于修復(fù)患者受損的肝臟[1～6]。本研究采用經(jīng)門靜脈進(jìn)行自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化，以評(píng)價(jià)其療效和安全性。

資料與方法

一、病例選擇 2010年1月至2010年10月在我科住院的失代償期肝硬化患者38例，男21例，女17例，年齡31～73歲，平均年齡48歲。診斷均符合《病毒性肝炎防治方案》。其中乙型肝炎肝硬化29例，丙型肝炎肝硬化3例，酒精性肝硬化6例。肝功能分級(jí)屬于Child-Pugh B～C級(jí)。其中并發(fā)肝性腦病9例，無(wú)感染和原發(fā)性肝癌等并發(fā)癥。將患者隨機(jī)分為觀察組18例和對(duì)照組20例。

二、治療方法 對(duì)照組患者給予肝水解肽（湖南五洲通制藥廠）100mg加入5%葡萄糖注射液250mL中靜脈滴注，1次/日。還原性谷胱甘肽（古拉定，意大利斯德大藥廠）1.2g加入5%葡萄糖注射液100mL中靜脈滴注，1次/日。門冬氨酸鉀鎂注射液30mL、維生素C 3.0g加入10%葡萄糖注射液250mL中靜脈滴注，1次/日。同時(shí)限鈉限水，未給予輸注白蛋白；觀察組在前述基礎(chǔ)治療的同時(shí)，給予經(jīng)門靜脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療。

三、干細(xì)胞移植 術(shù)前予以流質(zhì)飲食，填寫(xiě)知情同意書(shū)。選擇兩側(cè)髂后上棘為穿刺點(diǎn)，常規(guī)消毒、麻醉，用18號(hào)骨髓穿刺針穿刺，抽取骨髓100～160mL，肝素抗凝。應(yīng)用細(xì)胞分離試劑盒（寧夏中聯(lián)達(dá)生物有限公司）將骨髓液轉(zhuǎn)移至A液瓶?jī)?nèi)。加入B液，充分混勻，室內(nèi)靜置約20～30分鐘，觀察A液瓶?jī)?nèi)有明顯的紅細(xì)胞沉降后，將上清液移至50mL離心管內(nèi)，2500rpm（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司，RCF 1200g）離心5分鐘，棄上清液后每管加注生理鹽水，最后收集在一個(gè)50mL離心管中。取50mL離心管2支，各加入C液25mL，將收集到的細(xì)胞懸液加至離心管中，1800rpm（RCF 850g）離心30分鐘。小心吸取中間云霧狀的細(xì)胞層。加生理鹽水至50mL，2500rpm（RCF 1200g）離心5分鐘，棄上清液，加入生理鹽水，混勻后1800rpm離心5分鐘，共3次，洗滌完畢后將離心管底部的細(xì)胞，適量稀釋，保存于5mL試管中，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。在超聲引導(dǎo)下經(jīng)門靜脈注入骨髓干細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為109左右。穿刺點(diǎn)加壓包扎，術(shù)后靜臥6小時(shí)，3天內(nèi)避免劇烈運(yùn)動(dòng)。預(yù)防性應(yīng)用頭孢唑林2g/12h，靜脈滴注，連用 3d。

四、檢測(cè)指標(biāo) 常規(guī)速率法檢測(cè)凝血酶原活動(dòng)度（PTA，上海標(biāo)佳公司）；采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)肝功能指標(biāo)（雅培公司）。

結(jié)果

一、癥狀和體征改善情況 在細(xì)胞治療后第3天，治療組15例（83.3%）患者乏力、納差癥狀有明顯改善，而對(duì)照組癥狀明顯改善的僅2例（10.0%，P<0.05）；治療后 8周，治療組腹水消退 10例（55，5%），腹脹減輕16例（88.9%），對(duì)照組分別為2例（10.0%）和6例（30.0%，P<0.05）。

二、肝功能指標(biāo)改善情況 治療后8周，兩組肝功能改變情況見(jiàn)表1。

表1 兩組患者肝功能指標(biāo)變化情況（）

表1 兩組患者肝功能指標(biāo)變化情況（）

與治療前比，①P<0.05

例數(shù) ALB(g/L) PTA（%） ALT（IU/L）TBIL(μmol/L)治療組 治療前 18 25.8±6.4 38.4±13.8 54.3±14.5 40.6±13.5治療后 34.4±8.7① 45.6±10.3① 52.4±14.6 39.1±14.1對(duì)照組 治療前 20 25.2±7.2 37.1±14.2 57.6±15.1 39.6±14.7治療后 26.3±7.537.4±9.3 55.1±13.7 36.6±13.9

三、不良反應(yīng) 所有患者均未觀察到明顯的不良反應(yīng)。

討論

目前，進(jìn)行骨髓干細(xì)胞移植治療肝病的途徑主要有經(jīng)肝動(dòng)脈、門靜脈和外周靜脈等。姚鵬等[1]采用經(jīng)肝動(dòng)脈注入自體骨髓干細(xì)胞治療慢性肝衰竭，證實(shí)其在改善癥狀和降低病死率方面效果明顯。Pai等[2]將CD34（+）骨髓干細(xì)胞經(jīng)肝動(dòng)脈輸入到酒精性肝硬化患者肝內(nèi)，患者膽紅素水平明顯下降，Child-Pugh評(píng)分改善。Levicar等[3]分別通過(guò)肝動(dòng)脈和門靜脈將骨髓干細(xì)胞注入慢性肝病患者肝內(nèi)，患者6月內(nèi)膽紅素水平下降明顯。Terai等[4]將自體骨髓干細(xì)胞經(jīng)外周靜脈輸入失代償期肝硬化患者體內(nèi)，24周時(shí)血清白蛋白水平升高，膽紅素下降，Child-Pugh評(píng)分明顯改善。Mohamadnejad等[5]和Khan等[6]的研究結(jié)果也與之類似。目前部分學(xué)者認(rèn)為干細(xì)胞治療尚缺乏安全性[7]，這可能與治療用的細(xì)胞類型、數(shù)量、移植途徑、適應(yīng)癥的選擇和患者特點(diǎn)等因素有關(guān)[8]。

此前，我們?cè)趧?dòng)物試驗(yàn)中經(jīng)門靜脈移植自體骨髓干細(xì)胞治療肝損傷大鼠并取得了較好的療效[9]，后采用經(jīng)肝動(dòng)脈移植自體骨髓干細(xì)胞治療失代償期肝硬化患者效果也較滿意[10]。本研究我們采用經(jīng)門靜脈移植自體骨髓干細(xì)胞治療18例失代償期肝硬化患者，發(fā)現(xiàn)患者癥狀改善明顯，血漿白蛋白水平提升顯著，第8周時(shí)凝血酶原活動(dòng)度也明顯改善。

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