李國云 孟麗萍 傅茂英 金 鳳 甘建和

肝纖維化的發(fā)病機制尚未明確，也缺乏有效的防治手段。本文在四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化大鼠，研究了替米沙坦的抗肝纖維化作用。

資料與方法

一、研究對象 清潔級同系雄性SD大鼠40只，體重190±7g，蘇州大學(xué)動物中心提供。動物飼養(yǎng)條件：室溫26±3℃，相對濕度45%～55%。每日光照12小時，分籠飼養(yǎng)，自由飲水，全價配合飼料喂養(yǎng)。

二、動物模型的制備 隨機將40只大鼠按區(qū)組分配原則分成正常對照組12只、模型12只和替米沙坦干預(yù)組16只。將CCl4與橄欖油按體積4：6配成40%油劑，按0.4ml.100g-1給予模型大鼠腹腔注射，1次/周×3，以后調(diào)整為 0.3ml.100g-1腹腔注射，2 次/周，共5周；正常對照組動物以生理鹽水腹腔注射。根據(jù)人與動物用藥量換算方法[1]：即預(yù)將已知A種動物每kg體重用藥量，估算出B種動物每kg體重用藥劑量，先查表1，找出折算系數(shù)（W），再按下式計算：B種動物的用藥劑量（mg.kg-1）=W×A種動物的用藥劑量（mg.kg-1）。以替米沙坦一般人體給藥劑量40mg.60kg-1折算成大鼠的劑量為4.16mg.kg-1。將替米沙坦用生理鹽水配成1ml溶液，依劑量灌胃，1次/日，自造模第一日起給藥，共7周，其余兩組動物每日給予生理鹽水1ml灌胃。在實驗7周末，斷頸處死所有大鼠。立即整體切取肝、脾臟，稱重，計算肝/脾指數(shù)。取適量肝組織，置于10%中性福爾馬林液中固定，其余肝組織置液氮中保存。病理切片約4μm，HE染色。參照《肝纖維化診斷及療效評估共識》[2]進行肝組織炎癥活動度及纖維化程度分級、分期。隨機選擇10個視野，應(yīng)用炎癥活動度半定量計分系統(tǒng)和肝纖維化半定量計分系統(tǒng)（SSS）[3]進行組織病理學(xué)療效評估。

表1 動物與人每公斤體重用藥劑量折算系數(shù)表

結(jié)果

一、一般情況 模型組大鼠死亡4只，干預(yù)組大鼠死亡3只。三組大鼠平均體重變化見圖1，大鼠肝/脾指數(shù)見表2。

圖1 各組大鼠體重變化情況

表2 3組大鼠肝/脾指數(shù)（）的比較

表2 3組大鼠肝/脾指數(shù)（）的比較

只數(shù) 肝指數(shù) 脾指數(shù)對照組 122.92±0.41 0.23±0.04模型組 84.85±0.42 0.45±0.03干預(yù)組 133.09±0.36 0.32±0.02

三、肝組織病理學(xué)變化 見表3、4和圖2～4。

表3 大鼠肝臟炎癥活動度和纖維化半定量計分（）的比較

表3 大鼠肝臟炎癥活動度和纖維化半定量計分（）的比較

與正常組比，①t=28.966，P=0.000；與干預(yù)組比，②t=9.268，P=0.000

組 別 只數(shù) 纖維化計分 炎癥活動度計分對照組 12 0.3±0.4 0.0±0.0模型組 8 14.5±1.6① 18.6±2.1②干預(yù)組 13 7.7±1.7 8.6±1.8

表4 大鼠肝臟炎癥分期和分級的變化

圖2 正常組大鼠肝組織（HE，100×）

圖3 模型組大鼠肝組織（HE，200×）

圖4 干預(yù)組大鼠肝組織（HE，200×）

討論

肝纖維化是肝臟對反復(fù)損傷出現(xiàn)的創(chuàng)傷-愈合的反應(yīng)[3～5]，主要表現(xiàn)為肝臟細胞外基質(zhì)（ECM）代謝失衡，合成超過降解，最終導(dǎo)致局部組織膠原過度沉積。在損傷肝組織中，活化的肝星狀細胞（HSC）是最主要的產(chǎn)ECM細胞[6]，同時HSC合成及分泌基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）增加，使 ECM 降解減少[7，8]。因此，HSC的活化是肝纖維化形成的共同途徑和核心環(huán)節(jié)。在肝損傷過程中，HSC被多種細胞因子如TGF-β1、血管緊張素 П（AngП）、血小板源性生長因子（PDGF）等激活[9]，而PPAR-γ激動劑可抑制PDGF誘導(dǎo)的HSC增殖與趨化，可能在維持HSC作為靜止狀態(tài)的表型上具有重要作用[10，11]。

替米沙坦是一種新型的ATl受體阻制劑，兼有血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）和PPAR-γ激動的雙重作用[12，13]。一些研究已證實，ATl受體阻制劑可通過抑制肝星狀細胞活化和肝臟TGF-β1的表達明顯改善實驗性肝纖維化[14，15]。本研究顯示，模型大鼠平均體重與正常對照組和替米沙坦干預(yù)組比較均有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。目前，肝活組織病理學(xué)檢查仍是評估肝纖維化的金標準。本研究在大鼠肝纖維化模型制備成功后，觀察了替米沙坦的抗肝纖維化作用，推測替米沙坦因為ARB和PPAR-γ激動的雙重作用可能對肝纖維化的防治具有積極的意義，但其作用機制仍有待進一步研究。

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