孫華云，張明晶，姜成忠

(哈藥集團(tuán)制藥六廠，哈爾濱150056)

鹽酸氨基葡萄糖硫酸軟骨素片由鹽酸氨基葡萄糖和硫酸軟骨素組成，用于關(guān)節(jié)炎的治療［1－3］.本文采用HPLC建立了鹽酸氨基葡萄糖硫酸軟骨素片中含鹽酸氨基葡萄糖量測(cè)定的方法［4－5］.

1 儀器與試藥

Waters 515高效液相色譜儀、UV2487檢測(cè)器;鹽酸氨基葡萄糖(中國(guó)藥品生物制品檢定所，140649－200702);鹽酸氨基葡萄糖硫酸軟骨素片(自制);甲醇色譜純;其余試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(Hypersil C18，4.6 mm×150 mm);以醋酸鈉(6.8 g醋酸鈉溶解于700 mL水中，用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.9加水定容至1 000 mL)－甲醇(80∶20)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm;流速為1.0 mL/ min;β－異構(gòu)體的相對(duì)保留時(shí)間為1.0，α－異構(gòu)體的相對(duì)保留時(shí)間1.5.

2.2 測(cè)定法

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸氨基葡萄糖25 mg)，置25 mL量瓶中，加水適量超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，離心過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另取鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品適量，用水制成每1 mL中含1 mg的對(duì)照品溶液.移取100 μL的衍生劑(稱取50 mg鄰苯二甲醛溶解在1.25 mL無(wú)水甲醇中，加入3－巰基丙酸50 μL和0.1mol/L的硼酸緩沖液11.2 mL，混勻，密封放置30 min后使用.

每?jī)商旆湃?0 μL的3－巰基丙酸，密封避光處貯存，在室溫條件下兩周內(nèi)可以使用.)和100 μL的標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液，置于含有400 μL 0.1 mol/L的硼酸緩沖液(取四硼酸鈉3.815 g溶解于80 mL水中，調(diào)節(jié)pH值至9.5，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，加水定容至刻度，搖勻.)的試管中，混勻，衍生1 min后注入色譜儀10 μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算.

2.3 線性關(guān)系考察

取鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，以水逐步稀釋，制成一系列供試品溶液，按含量測(cè)定方法進(jìn)行衍生后，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 鹽酸氨基葡萄糖線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明:鹽酸氨基葡萄糖在100～2 000 μg/ mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系.線性方程為:y=ax+b(a=1.005 898E－003，b=－9.179 708E－003，r=0.999 9))式中y為峰面積，x為樣品質(zhì)量濃度(μg/mL)，r為相關(guān)系數(shù).

2.4 回收率試驗(yàn)

分別稱取鹽酸氨基葡萄糖陰性樣品、鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品9份(相當(dāng)于分別含兩主成分80%、100%、120%3個(gè)質(zhì)量濃度水平各3份)，置100 mL量瓶中，加水超聲使溶解加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液進(jìn)行衍生后，進(jìn)樣10 μL，結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 鹽酸氨基葡萄糖測(cè)定回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明:本品回收率偏高，是由于硫酸軟骨素原料中含有少量鹽酸氨基葡萄糖所引起的.

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取樣品適量，按測(cè)定前處理方法制備供試液，室溫放置，分別于0、0.5、1、3、4、6 h，進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 鹽酸氨基葡萄糖穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明:供試品溶液室溫放置6 h，鹽酸氨基葡萄糖峰面積無(wú)明顯變化，證明樣品溶液穩(wěn)定性良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品適量，按測(cè)定前處理方法平行配制6份.依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算其標(biāo)示質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見(jiàn)表4.結(jié)果表明:本法的重復(fù)性良好.

表4 鹽酸氨基葡萄糖重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

對(duì)于硫酸軟骨素片中含鹽酸氨基葡萄糖量測(cè)定，文獻(xiàn)多采用比色法及咔唑法，上述方法專屬性不強(qiáng)，且操作繁瑣費(fèi)時(shí).本文建立的衍生化反相高效液相法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、可作為硫酸軟骨素片中含鹽酸氨基葡萄糖量測(cè)定方法.

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