劉錦召 李鶴平 張冰 楊建勇 黃癸卯

肝癌是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤，經(jīng)肝動(dòng)脈插管栓塞化療(TACE)是不能手術(shù)切除肝癌的首選治療方法[1-2]。常規(guī)TACE主要依靠化療藥物及栓塞達(dá)到治療目的，但化療藥物的副作用較為明顯。沙培林是A族鏈球菌的滅活凍干制劑，主要通過(guò)激活宿主細(xì)胞免疫功能，提高T細(xì)胞及NK細(xì)胞活性來(lái)達(dá)到治療目的，是目前已知最強(qiáng)的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑之一[3]。本實(shí)驗(yàn)建立兔VX2肝腫瘤動(dòng)物模型，通過(guò)肝動(dòng)脈插管灌注沙培林進(jìn)行治療，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型及分組 新西蘭大白兔肝VX2腫瘤模型共27只，雌雄不限，體重2.5-3.5kg，其中雄性17只，雌性10只，購(gòu)自中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。數(shù)字法隨機(jī)分為三組：對(duì)照組9只，肝動(dòng)脈內(nèi)灌注生理鹽水5ml；常規(guī)化療栓塞組（下文簡(jiǎn)稱常規(guī)組）9只，肝動(dòng)脈內(nèi)灌注MMC（0.2mg/Kg）+適量超液化碘油；沙培林實(shí)驗(yàn)組（下文簡(jiǎn)稱實(shí)驗(yàn)組）9只，肝動(dòng)脈內(nèi)灌注沙培林（0.25mg/Kg）+適量超液化碘油。

1.2 介入治療方法 動(dòng)物麻醉后開(kāi)腹，分離暴露胃十二指腸動(dòng)脈，應(yīng)用1.5-3F微導(dǎo)管逆行插管至肝動(dòng)脈行造影，依造影所見(jiàn)腫瘤動(dòng)脈供血進(jìn)行超選擇性插管，行不同藥物灌注栓塞。術(shù)后關(guān)腹。

1.3 療效標(biāo)準(zhǔn) ①一般情況: 分別于介入治療前及介入治療后2周稱重1次，觀察各組兔的體重變化及兔的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、進(jìn)食量、飲水量等。②介入治療后4周記錄每組兔的死亡數(shù)目，并計(jì)算生存率=死亡兔個(gè)數(shù)/治療后每組兔總數(shù)x100%。③介入治療后3天抽取兔耳緣靜脈血測(cè)定:血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)。④介入治療后4周每組選擇3只兔處死，觀察:A、兔肝臟外觀形態(tài)，包括肝臟大小、色澤質(zhì)地、表面結(jié)節(jié)等，完整摘取肝臟并稱重，計(jì)算肝重與體重之比(各組兔處死前稱重)；B、兔肝臟HE染色的病理，于肝葉縱切面豐厚處取0.3～0.5cm厚度的肝組織，10%中性甲醛溶液固定24h，常規(guī)包埋、切片、染色及封片。光鏡下觀察，包括整個(gè)切片中細(xì)胞的異型性，核漿比例，細(xì)胞排列、變性、增生及壞死等情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)及其差異的顯著性進(jìn)行分析，P＜0.05被認(rèn)為差異具有顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 兔一般情況觀察比較 治療前后體重減輕0～0.5kg為輕度，0.5～1.0kg為中度，超過(guò)1.0kg為重度。三組治療前后體重變化及治療后生存率比較見(jiàn)表1。對(duì)照組兔體重下降明顯，并出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)少、食量、進(jìn)水量減少等情況，其余兩組進(jìn)食、飲水量及精神活動(dòng)尚好。

表1 各組兔治療后體重變化和生存率比較

2.2 各組兔治療后肝功能比較 見(jiàn)表2。

表2 各組兔治療后肝功能的比較

2.3 病理學(xué)改變 對(duì)照組兔肝臟明顯腫大，可見(jiàn)大小不一的灰色結(jié)節(jié)，色暗；光鏡下可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞體積增大，核仁明顯，胞漿少，核漿比失調(diào)，并可見(jiàn)病理性核分裂及瘤巨細(xì)胞，大量腫瘤細(xì)胞向肝組織浸潤(rùn)，并伴有。常規(guī)組、實(shí)驗(yàn)組兔肝臟外觀腫瘤結(jié)節(jié)相對(duì)較??；光鏡下均有不同程度的腫瘤細(xì)胞壞死；常規(guī)組、實(shí)驗(yàn)組正常肝組織內(nèi)均可見(jiàn)點(diǎn)灶狀出血及肝細(xì)胞變性、壞死，但常規(guī)組的肝細(xì)胞變性、壞死及出血均較實(shí)驗(yàn)組嚴(yán)重。

3 討論

經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞（TACE）已被公認(rèn)是不能手術(shù)切除肝癌的一種安全有效、可重復(fù)的首選治療方法，它能引起腫瘤細(xì)胞不同程度壞死和細(xì)胞凋亡。但TACE治療由于肝癌病灶的不同大小、數(shù)目、血管形態(tài)、肝功能狀態(tài)、動(dòng)靜脈瘺情況、門靜脈癌栓情況、病理類型、對(duì)治療的反應(yīng)等因素常常在治療效果上有一定的限度。如何進(jìn)一步提高TACE治療肝癌的療效，是目前肝癌介入治療中所面臨的最主要問(wèn)題[4]。

肝癌的動(dòng)物模型有許多種，無(wú)論是誘發(fā)性還是移植性的肝癌造模方法都己十分成熟。但在選用肝癌介入動(dòng)物模型方面，我們采用了兔肝VX2腫瘤模型作為研究基礎(chǔ)。在本實(shí)驗(yàn)中，共制備兔肝VX2腫瘤模型27只。

沙培林是一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，由溶血性鏈球菌Su株制備而來(lái)。鏈球菌制劑類抗癌劑(沙培林)是已知免疫調(diào)節(jié)劑中作用最強(qiáng)之一。鏈球菌制劑的抗腫瘤作用已被廣泛證實(shí)并應(yīng)用于各種惡性腫瘤的臨床治療。有研究證明沙培林與癌細(xì)胞接觸，能直接破壞癌細(xì)胞的RNA過(guò)程，使癌細(xì)胞出現(xiàn)膨脹，空泡化崩潰壞死[5]。此外沙培林能啟動(dòng)體內(nèi)的細(xì)胞免疫和體液免疫，能大量增加和激活淋巴細(xì)胞，使體內(nèi)腫瘤壞死因子、干擾素、白細(xì)胞介素等水平顯著提高，使腫瘤細(xì)胞變性壞死。同時(shí)又有效地改善了化療藥物造成的免疫功能低下?tīng)顟B(tài)。在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組兔體重下降明顯，并出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)少、食量、進(jìn)水量減少等情況，而實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用沙培林進(jìn)行治療，一般情況與常規(guī)化療栓塞組類似，兩組進(jìn)食、飲水量及精神活動(dòng)尚好，且均明顯優(yōu)于對(duì)照組；對(duì)照組、常規(guī)組和實(shí)驗(yàn)組介入治療后4周的生存率分別為55.6%、66.7%以及77.8%，雖然沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是實(shí)驗(yàn)組的生存率明顯高于對(duì)照組，也高于常規(guī)組。

碘化油是常用的造影劑、末梢栓塞劑和藥物的載體。由于正常肝組織和肝癌組織血供和微循環(huán)的差別，碘化油會(huì)選擇性地在肝癌組織內(nèi)沉積并長(zhǎng)時(shí)間停留。將沙培林同碘化油混合使用，可以達(dá)到中斷腫瘤血供，增加沙培林在腫瘤組織內(nèi)的停留和作用時(shí)間，促進(jìn)抗腫瘤效應(yīng)。其抗腫瘤作用機(jī)制除直接作用于腫瘤細(xì)胞外，還參與嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的激活[6]。在本研究中沙培林碘化油乳劑治療兔肝VX2腫瘤，兔的一般情況和生存率，實(shí)驗(yàn)組均優(yōu)于對(duì)照組。介入治療一般會(huì)對(duì)肝功能造成一定的損害，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，治療后常規(guī)組和實(shí)驗(yàn)組的肝功能幾項(xiàng)指標(biāo)明顯增高。但是實(shí)驗(yàn)組的以上各項(xiàng)指標(biāo)明顯優(yōu)于常規(guī)組，并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明沙培林作為免疫制劑，配合碘化油在治療肝癌的過(guò)程中，對(duì)于正常的肝臟細(xì)胞的損傷較小。并且，病理檢查表明，常規(guī)組、實(shí)驗(yàn)組兔肝臟外觀腫瘤結(jié)節(jié)相對(duì)較?。荤R下比較常規(guī)組、實(shí)驗(yàn)組正常肝組織內(nèi)均可見(jiàn)點(diǎn)灶狀出血及肝細(xì)胞變性、壞死，但常規(guī)組的肝細(xì)胞變性、壞死及出血均較實(shí)驗(yàn)組嚴(yán)重；這說(shuō)明沙培林的療效較好，但對(duì)肝臟正常組織結(jié)構(gòu)的破壞相對(duì)較小。

總之，本研究表明經(jīng)肝動(dòng)脈灌注沙培林配合碘化油在抑制兔肝VX2腫瘤的生長(zhǎng)方面具有明顯的效果，并且對(duì)于在改善兔的一般情況、提高兔的生存率及保護(hù)肝功能等方面則顯示了較好的療效。

[1]Achenbach T，Seifert JK，Pitton MB，et al.Chemoembolization for primary liver cancer[J].Eur J Surg Oncol 2002，28:37-41

[2]Alsowmely AM，Hodgson HJ.Non-surgical treatment of hepatocellular carcinoma[J].Aliment Pharmacol Ther，2002，16:1-15

[3]Huang GT，Yang PM，Sheu JC，et al.Intratumor injection of OK-432 for the treatment of small hepatocellular carcimoma [J].Hepatogastroenterology，1990，37(5):452-456

[4]葉強(qiáng)，張大海，顧偉中，等。經(jīng)肝動(dòng)脈沙培林碘化油乳劑治療原發(fā)性肝癌臨床觀察[J]，同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2001，10（5）33-36

[5]薛德文，劉素貞，宋金龍，等。沙培林聯(lián)合抗癌藥肝動(dòng)脈灌注治療中晚期肝癌的療效分析[J]，腫瘤研究與臨床，2004，16（5）：337-338

[6]董培德，侯明顯，孫曉風(fēng)。沙培林聯(lián)合化療藥物介入治療晚期肝癌臨床觀察[J]，中國(guó)腫瘤臨床，2001，28(2)：151-152