(湖北省宜昌市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，湖北 宜昌 443005)

小兒吐瀉寧是由廣藿香、姜半夏、陳皮、白術(shù)(炒)、茯苓、厚樸(姜制)、甘草7味藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有理氣和中、健脾化濕的功效，用于小兒脾胃不和引起的吐瀉、腹脹、不思飲食等。本品原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]無(wú)陳皮檢驗(yàn)項(xiàng)目，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)也未見報(bào)道。為了進(jìn)一步控制藥品質(zhì)量，確保制劑療效，筆者采用高效液相色譜法對(duì)小兒吐瀉寧主要成分陳皮中橙皮苷含量進(jìn)行了測(cè)定，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀;Metter－AE240型電子分析天平。橙皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110721－200512);小兒吐瀉寧(沈陽(yáng)綠洲制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)為20081101，20091101;三精集團(tuán)中藥三廠，批號(hào)為090322);甲醇為色譜純，水為去離子雙蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－冰醋酸 －水(35∶4∶61);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:5μL。理論板數(shù)以橙皮苷計(jì)算不低于2000。在此條件下，橙皮苷色譜與相鄰干擾峰完全分離，分離度大于1.5(見圖1)。

2.2 溶液制備

精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的橙皮苷對(duì)照品71.60 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.716 g/L的對(duì)照品溶液。精密稱取樣品1 g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇溶液100 mL，精密稱重，置水浴上加熱回流30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取除陳皮外按處方量配制的陰性樣品適量，精密稱定，按供試品溶液制備方法操作即得陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取陰性對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖(圖C)。結(jié)果色譜圖中，在與橙皮苷相應(yīng)的保留時(shí)間附近無(wú)干擾峰檢出。

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液 0.5，1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 mL，分別置100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，按擬訂的色譜條件測(cè)定，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=16.521 X+19.981，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣質(zhì)量濃度在3.58～143.2 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積平均值為636，RSD為0.1%(n=5)，表明儀器進(jìn)樣精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號(hào)為20081101)溶液，于配制后0，2，4，6，8，10 h 時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積平均值為 902，RSD為1.0%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為20081101)，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果橙皮苷平均含量為5.49 mg，RSD為1.0%(n=5)。

回收率試驗(yàn):精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的橙皮苷對(duì)照品26.00 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備溶液。稱取6份已知含量樣品(批號(hào)為090322)粉末，每份約0.5 g，精密穩(wěn)定，分別加入上述對(duì)照品貯備溶液10 mL，置100 mL容量瓶中，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取樣品1 g，依法制成供試品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20081101，090322，20091101的樣品中橙皮苷平均含量分別為 5.49，5.30，5.43 mg/g(n=3)。

3 討論

取橙皮苷對(duì)照品溶液，進(jìn)行紫外掃描(200～400 nm)，結(jié)果在283.0 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇283 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。橙皮是小兒吐瀉寧的主藥之一，橙皮苷是其主要成分，具有多種藥理作用，建立測(cè)定橙皮苷含量的高效液相色譜法，有利于控制該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。橙皮苷的提取方法有索氏提取法、超聲提取法、加熱回流提取法，考慮到索氏提取法較煩瑣，曾對(duì)超聲提取法(超聲提取時(shí)間分別為10，30，60 min)、加熱回流提取法(加熱回流時(shí)間分別為10，30，60 min)進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)加熱回流提取法比超聲提取法效果好、回收率高，且回流30 min已能將制劑中橙皮苷提取完全，故將提取方法定為加熱回流30 min。

表1 橙皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

樣品含量測(cè)定結(jié)果顯示，不同廠家樣品中橙皮苷的含量差異不大，但目前沒有一個(gè)傳統(tǒng)的限度標(biāo)準(zhǔn)。筆者建議，今后在修改標(biāo)準(zhǔn)時(shí)可考慮增加小兒吐瀉寧中橙皮苷的含量測(cè)定，以確保藥品質(zhì)量，保證人民用藥安全有效。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，所建立的測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，空白無(wú)干擾，可作為小兒吐瀉寧中質(zhì)量控制方法。

[1]WS3－B－0685－91，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊(cè))[S].