李 毅， 王 飛， 吳 民

(新疆克拉瑪依市中心醫(yī)院，新疆克拉瑪依市834000)

藥用苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根，具有清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲、利尿等功效。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)和臨床觀察證明，其中主要含生物堿成分，同時(shí)還含黃酮、醌類等成分。其中苦參堿(matrine)為其有主要有效成分之一，具有抗腫瘤，平喘和抑菌作用;氧化苦參堿具有抗腫瘤，平喘等作用。黃酮類成分具有抗心律失常及抗真菌作用。本試驗(yàn)采用HPLC法對(duì)中藥苦參進(jìn)行了高效液相色譜法的測定研究。

1 藥材與設(shè)備

1.1 藥材及材料 苦參藥材由沈陽藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根。苦參堿對(duì)照品(供含量測定用)購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110805－200306。氧化苦參堿對(duì)照品(供含量測定用)購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)0780－200004。

1.2 色譜條件 色譜柱:Waters XTerraTMRP18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.02 mol/mL 乙酸-乙腈 (60 ∶40);檢測波長:220 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20 μL。

1.3 儀器 島津-2010CHT高效液相色譜儀(日本島津公司);Lc-solution工作站(日本島津公司提供);Mettle AE 163電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.4 檢測波長的選擇 參考2005版中國藥典中藥材“苦參”含量測定項(xiàng)下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):檢測波長為220 nm，故選擇檢測波長為220 nm。

2 樣品的制備

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加0.02 mol/mL乙酸-乙腈 (60∶40)溶解，制成每1 mL含0.1 mg的苦參堿溶液，氧化苦參堿1 mg的溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取苦參藥材，研細(xì)，精密稱取，置于100 mL量瓶中，加濃氨水2 mL浸潤，加二氯甲烷60 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?.5 mL使溶解，作為供試品溶液。

3 方法學(xué)考察

3.1 線性范圍的考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密量取苦參堿溶液0.25、1.25、2.50、5.00、7.50 mL 至 10 mL 量瓶加0.02 mol/mL 乙酸-乙腈 (60:40)定容至 10 mL，得濃度 0.002 5、0.012 5、0.025、0.050、0.075 mg/mL濃度的對(duì)照品溶液。

精密量取氧化苦參堿溶液0.50、1.25、2.50、5.00 mL至10 mL量瓶加0.02 mol/mL乙酸-乙腈 (60∶40)定容至10 mL，得濃度0.050、0.125、0.250、0.500 mg/mL 濃度的對(duì)照品溶液。

結(jié)果表明苦參堿在2.5～75 μg/mL范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系 y=1.35e－7x+1.84e－4，r=0.999 9。氧化苦參堿在50～1 000 μg/mL范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，y=1.43e－7x+1.64e－3，r=0.999 9。

3.2 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品9份，分別精密加入適量氧化苦參堿對(duì)照品，按供試品溶液制備方法處理，依次測定，計(jì)算回收率，苦參堿平均回收率99.1%，RSD為4.7%，氧化苦參堿平均回收率99.9%，RSD為2.1%。

3.3 精密度試驗(yàn) 取粉末適量，按供試品溶液的制備方法制得供試溶液1份，在同樣色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5針，進(jìn)樣量為20 μL，依次測定，記錄峰面積，得苦參堿 RSD為0.65%;氧化苦參堿RSD為0.70%。顯示精密度良好。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取粉末，按供試品溶液的制備方法制得供試溶液6份，在同樣色譜條件下進(jìn)樣，進(jìn)樣量為20 μL，依次測定，得苦參堿平均含量為1.455 6 mg/g，RSD為2.80%;氧化苦參堿平均含量為12.235 5 mg/g，RSD為1.33%。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取適量，按供試品溶液的制備方法制得供試溶液 1 份，室溫下放置，每隔 0、1、2、4、8、16 h;分別進(jìn)樣20 μL，依次測定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，苦參堿與氧化苦參堿含量總和RSD為1.03%。

4 薄層色譜

苦參藥材粉碎，取1 g粉末，加濃氨水2 mL浸潤，加二氯甲烷60 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?.5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取槐定堿、苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品，分別加乙醇制成每1 mL各含1 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述制備溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(7∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

5 結(jié)論

該方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可適用苦參藥材的質(zhì)量控制。

［1］中國藥典［S］.一部.2005.

［2］苗明山，李振國.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000.

［3］孟憲紆.中成藥分析［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1998.

［4］李建業(yè).中成藥薄層色譜分析［M］.天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社，1991.

［5］董方言.現(xiàn)代實(shí)用中藥新劑型新技術(shù)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001.