徐 鑫， 張學(xué)蘭， 唐 超

(山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南 250355)

菟絲子為旋花科植物菟絲子南方菟絲子Cuscuta australisR.Br.或菟絲子Cuscuta chinensisLam.的干燥成熟種子，具有滋補(bǔ)肝腎，固精縮尿，安胎，明目，止瀉等作用，臨床上常用于肝腎不足，腰膝酸軟，陽痿遺精，遺尿尿頻，腎虛胎漏等的治療［1］?，F(xiàn)代文獻(xiàn)研究表明，菟絲子的化學(xué)成分主要含有黃酮類、甾類化合物、多糖、微量元素及氨基酸等［2－4］。藥理實驗研究表明，菟絲子中黃酮類特征成分金絲桃苷是菟絲子的主要活性成分，具有保護(hù)肝組織和增強(qiáng)免疫等作用［5］。目前中國藥典收載的菟絲子規(guī)格為菟絲子和鹽菟絲子，炒菟絲子作為傳統(tǒng)的炮制規(guī)格，目前還缺乏深入而系統(tǒng)的研究，本實驗研究了清炒菟絲子的客觀工藝技術(shù)參數(shù)，為炒菟絲子飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和炮制機(jī)理研究提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

菟絲子藥材，產(chǎn)地山東，購自亳州成源中藥飲片有限公司(批號:20090501)，經(jīng)周鳳琴教授鑒定為旋花科植物菟絲子Cuscuta chinensisLam.的干燥成熟種子。

多星電炒鍋(淄博多星電器集團(tuán)有限責(zé)任公司);PM PLUS型紅外測溫儀(美國Raytek公司);KQ－250E型醫(yī)用超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);LDZ4－0.8型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);1100型高效液相色譜儀、工作站及紫外檢測器(美國Agilent公司)。

金絲桃苷對照品(批號:111521－200303)購自中國藥品生物制品檢定所;高效液相用乙腈為色譜純;濰坊娃哈哈飲料有限公司純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 清炒工藝的設(shè)計 炒制溫度和炒制時間對藥材質(zhì)量影響較大，采用正交實驗設(shè)計法，因素與水平見表1，正交試驗安排見表2，進(jìn)行工藝優(yōu)選。

表1 因素與水平

2.2 樣品的制備 藥材的投藥量為50 g，取9份，按正交設(shè)計表的組合，用紅外測溫儀測定鍋底溫度，進(jìn)行炒制，各樣品性狀及成品得率見表3。

2.3 含水量的測定 取2.2項下的各樣品(過2號篩)約2.5g，精密稱定，按《中國藥典》2010版一部附錄項下的烘干法測定，9份樣品的含水量為1.42% ～4.76%，樣品中各指標(biāo)成分的含量以干燥品計算。

2.4 HPLC法測定金絲桃苷含量［1］

2.4.1 色譜條件 KromasiL C18色譜柱;以乙腈－0.1%磷酸水(17∶83)為流動相，流速為1.0 mL/min;柱溫為30℃;檢測波長為360 nm;參比波長為400 nm;進(jìn)樣量為20 μL。

2.4.2 對照液的制備 取金絲桃苷對照品20.24 mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋至25 mL量瓶中，得到對照液貯備液，備用，并依次精密吸取金絲桃苷對照液貯備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL 置10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照液。

表2正交試驗結(jié)果

表3 菟絲子樣品性狀及成品得率

2.4.3 供試液的制備 取菟絲子各炒品過4號篩粉末約1 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加80%甲醇40 mL超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)60 min，放冷，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜濾過，作為供試液。

2.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 用2.4.2項中的對照品溶液，按2.4.1項下色譜條件進(jìn)行測定以峰面積Y對金絲桃苷濃度X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=23.652X－4.794 6(R=0.999 6)。實驗表明，金絲桃苷濃度在0.016 2～0.097 2 mg/mL范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5 精密度試驗 取4號供試品溶液，按2.4.1項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，金絲桃苷峰面積的RSD為0.49%。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗 取4號供試液，按2.4.1項下色譜條件分別于 0、2、4、6、8、12 h 時進(jìn)樣，金絲桃苷峰面積的 RSD為0.99%，可見在12 h內(nèi)供試液穩(wěn)定。

2.4.7 重復(fù)性試驗 取4號樣品，平行制備6份供試液，按2.4.1項下色譜條件進(jìn)樣，RSD為1.43%，可見方法重現(xiàn)性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗 取已知金絲桃苷含量的4號樣品約1 g，精密稱定，共稱取6份，分別置50 mL量瓶中，各加入金絲桃苷對照品溶液(0.809 6 mg/mL)6 mL，再按2.4.3項方法制備，按2.4.1項下色譜條件進(jìn)樣，依法測定，結(jié)果其平均回收率為96.38%，RSD為1.46%，見表4。

表4 回收率測定結(jié)果

2.4.9 供試品含量測定 取金絲桃苷對照液與供試液按2.4.1項下色譜條件進(jìn)樣，依法測定，色譜圖見圖1，含量測定結(jié)果見表2。

圖1金絲桃苷對照品(A)、2號樣品(B)HPLC圖

2.5 水溶性浸出物含量測定 取過2號篩的各樣品粉末約2 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，分別精密加水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，保持微沸回流1 h，放冷后，取下錐形瓶，密塞，稱定重量，補(bǔ)足失重，搖勻，離心(3 000 r/min，20 min)，精密量取續(xù)濾液25 mL至已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，結(jié)果見表2。

2.6 最佳炮制工藝條件的優(yōu)選 以炮制品中金絲桃苷(測定方法見2.4.9項，n=3)、水溶性浸出物含量(測定方法見2.5項，n=3)為指標(biāo)，利用綜合加權(quán)評分法確定最佳的炮制方法。具體權(quán)重為:金絲桃苷的含量占70%，水溶性浸出物含量占30%。各項試驗指標(biāo)得分相加求出綜合評價值，以綜合評價值對實驗結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析。評分標(biāo)準(zhǔn)見表5，結(jié)果見表2。由表2結(jié)果可以看出，170℃炒制5 min為菟絲子清炒的最佳工藝。因素C，D為空白項，所以，選擇C，D列合并為誤差列。由表6方差分析結(jié)果可以看出，炒制溫度是影響菟絲子飲片質(zhì)量的主要因素，炒制時間沒有顯著性。

表5 各指標(biāo)成分含量的評分標(biāo)準(zhǔn)

表6 方差分析

3 小結(jié)與討論

3.1 本實驗在對菟絲子炮制歷史沿革和現(xiàn)代文獻(xiàn)分析的基礎(chǔ)上，采用正交試驗設(shè)計法，選取金絲桃苷和水溶性浸物含量作指標(biāo)，以炒制溫度和炒制時間作考察因素，優(yōu)選出了炒菟絲子的炮制工藝，結(jié)果其最佳工藝為170℃炒制5 min。最佳工藝所炮制出的樣品，表面棕黃色，微有裂口，略有香氣。炒制溫度是影響菟絲子質(zhì)量的主要因素。

3.2 菟絲子為臨床常用的補(bǔ)腎類中藥，其質(zhì)地堅硬，傳統(tǒng)認(rèn)為，菟絲子炒后可提高煎出效果，便于粉碎，利于制劑［6］。按本實驗相關(guān)方法測定菟絲子生品和最佳工藝炒制品中水溶性浸出物和金絲桃苷含量，結(jié)果表明水溶性浸出物和金絲桃苷含量均有增加，說明菟絲子炒制后確實利于其藥效成分的溶出。但炒制溫度過高或時間過長，金絲桃苷含量明顯降低，提示炒制溫度要適中。

3.3 菟絲子含黏液質(zhì)較多，在按藥典附錄法測定樣品中水溶性浸出物含量時樣品難于過濾，所以本實驗采用離心法去除雜質(zhì)。

［1］中國藥典［S］. 一部.2010:290－291.

［2］郭 澄，王雅君，張劍萍，等.菟絲子的化學(xué)成分和藥理活性研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2005，16(10):1035－1036.

［3］葉 敏，閻玉凝，喬 梁，等.中藥菟絲子化學(xué)成分研究［J］.中國中藥雜志，2002，27(2):115－117.

［4］林慧彬，林建強(qiáng)，林建群，等.山東4種菟絲子微量元素的比較研究［J］.山東中醫(yī)雜志，2002，21(2):105－106.

［5］李敏芳，李 慧，王學(xué)美.金絲桃苷藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2008，15(4):102－104.

［6］龔千鋒.中藥炮制學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2003:226.