左劍斌 艾衛(wèi)敏 彭 剛 楊旭麗

（湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102）

近年來發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)在哺乳動物的腦神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)細胞對IFN-γ有一定的吸收以及對進行適應(yīng)性變化，為了探究IFN-γ其在神經(jīng)細胞中的作用機制。我科室利用IFN-γ這一炎性因子對大鼠神經(jīng)細胞的影響研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

本組實驗所選用的均為成年大鼠，將其麻醉后取取其大腦半球，并將其置于L15培養(yǎng)液中進行吹打成為細胞懸浮液，并對細胞懸液通過過濾過，離心后將其置于無血清的設(shè)計細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，并按照1×105/mL的密度對其進行種瓶。并同時將其加入表皮生長因子以及堿性成纖維生長因子，而后將其置于37℃，含有5%的CO2的細胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

1.2 實驗方法

將培養(yǎng)的細胞隨機分為2組，對實驗組細胞培養(yǎng)液中加入200U/mL的IFN-γ，對照組的細胞也中加入等量的雙蒸水。并待接種6天后對其進行免疫組織化學(xué)染色，進行觀察

1.3 免疫組織化學(xué)染色

對本組實驗研究的細胞按照標(biāo)準(zhǔn)免疫組織化學(xué)染色方法進行免疫組織化學(xué)染色，其中對神經(jīng)干細胞采用小鼠抗大鼠nestin單抗，對神經(jīng)元細胞采用兔抗βⅢ-tubulin多抗，對星形膠質(zhì)細胞采用兔抗GFAP多抗，對于少突膠質(zhì)細胞采用小鼠抗RIP單抗進行。而后將其運用hoechst33324的Gel/Mountaqueous進行封片后運用熒光顯微鏡觀察。并對該組研究的細胞采用流式細胞儀對MHC的表達情況進行計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

對本站實驗研究的數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進行數(shù)據(jù)分析，對計數(shù)資料采用卡方檢驗，對計量資料采用t檢驗，檢驗水準(zhǔn)設(shè)定為α=0.05，當(dāng)P＜0.05時，說明兩組有明顯的差異性。

2 結(jié) 果

2.1 相關(guān)神經(jīng)細胞的鑒定

本組實驗研究的神經(jīng)細胞均取至與wistar大鼠，并采用無血清的神經(jīng)細胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)，同時加入了表皮生長因子以及堿性成纖維生長因子，故可加速神經(jīng)細胞的增長，從而形成較大的神經(jīng)細胞球，表明大鼠腦組織中存在大量的神經(jīng)干細胞，從而使細胞大量的增殖。對本組細胞的免疫染色結(jié)果顯示，存在大量的神經(jīng)元細胞、少突膠質(zhì)細胞以及星形膠質(zhì)細胞。

2.2 IFN -γ對神經(jīng)細胞的生長狀態(tài)的影響

本組實驗研究中，對實驗組細胞采用了20U/mL、200U/mL 以及2000U/mL IFN -γ進行刺激，在進行刺激10d后，各組細胞均表現(xiàn)出不同的生長狀態(tài)，可以明顯的看出，當(dāng)其濃度越高時，其失去原有的生長特點，而進行貼壁生長，而且細胞形態(tài)發(fā)生改變，出現(xiàn)大量的細胞突起，而且對神經(jīng)細胞的中干細胞的研究發(fā)現(xiàn)，隨著IFN-γ的增加，其細胞的增殖速度明顯降低，而且突起明顯增多。在顯微鏡下觀察，經(jīng)過3d培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)2000U/mL的培養(yǎng)液中的細胞出現(xiàn)毒性反應(yīng)，而導(dǎo)致細胞大量死亡，而其他兩組細胞未見其死亡等不良反應(yīng)。發(fā)現(xiàn)，對神經(jīng)干細胞進行刺激。在對細胞上清液采用LDH毒性測試，結(jié)果顯示，當(dāng)IFN -γ過大時，會導(dǎo)致細胞產(chǎn)生毒性反應(yīng)，從而造成細胞的死亡。

2.3 IFN -γ對神經(jīng)細胞MHC的表達的比較

對本組研究的細胞采用流式細胞儀對MHCⅠ類和 Ⅱ類的相應(yīng)的抗體進行檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)神經(jīng)細胞在體外培養(yǎng)時其MHC的表達很低，但是對于實驗組細胞而言，其表達情況均有不同程度的上調(diào)（P＜0.05），表明IFN -γ可提高神經(jīng)細胞對MHC的表達。

3 討 論

神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育在生命的整個過程均有不同程度的表現(xiàn)，尤其是對于胎兒時期的發(fā)育[1]。有學(xué)者[2]指出對于胎兒時期的發(fā)育，神經(jīng)肝細胞發(fā)揮著重要作用，其可分化成為多種神經(jīng)細胞。在本組實驗研究中，對成年大鼠中樞神經(jīng)細胞的培養(yǎng)中，我們也發(fā)現(xiàn)了少量的神經(jīng)干細胞，表明神經(jīng)干細胞在成年腦組織中也有一定量的存在。IFN-γ作為一種重要的炎性介質(zhì)，當(dāng)機體受到細菌以及病毒感染的情況下，其可大量分泌[3]，那么IFN-γ對神經(jīng)細胞刺激將會怎樣的變化。

本組研究中，對大鼠神經(jīng)細胞的離體培養(yǎng)的模型的建立，并在該基礎(chǔ)上對IFN-γ在神經(jīng)細胞中的影響進行研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的IFN-γ可導(dǎo)致神經(jīng)細胞嚴重的毒害作用，從而導(dǎo)致大量細胞的死亡，而適量的IFN-γ可使神經(jīng)細胞的MHC進行表達，并使其表達上調(diào)。Slavin[4]指出，由于MHC作為組織相容性抗原，其在移植中發(fā)揮重要作用。在本組研究中我們認為其在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮中有重要的作用。由于大劑量的IFN-γ可導(dǎo)致細胞的大量死亡，故我們指出，IFN-γ細胞毒性作用與IFN-γ的量存在明顯的正相關(guān)。故其提示對于嚴重感染的患者中其IFN -γ高度表達，可導(dǎo)致其神經(jīng)細胞受到一定的損害。Kirou[5]指出，大鼠神經(jīng)細胞在胚胎期有少量的MHC表達，而在中晚期其表達降低，而在子宮有有大量的表達，在本組研究中，對照組神經(jīng)細胞的MHC表達低，而實驗組的神經(jīng)細胞的MHC的表達有統(tǒng)計學(xué)意義，故我們認為IFN -γ可明顯提高MHC的表達。而MHC最為一主要的移植抗原，其表達上升可導(dǎo)致移植等排斥風(fēng)險上升[6]。故我們認為在手術(shù)等過程中應(yīng)當(dāng)注意對IFN -γ的控制，以減少排斥效應(yīng)。

總之，通過本組實驗研究，IFN -γ可提高神經(jīng)細胞MHC的表達以及對神經(jīng)細胞的毒害作用與其量有明顯的相關(guān)性。

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