史喜菊，馬貴平，劉全國，李炎鑫，李冰玲

（北京出入境檢驗檢疫局，北京 100026）

1 前言

國際動物衛(wèi)生組織（OIE）制定的動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是WTO中SPS協(xié)定唯一認(rèn)可的動物衛(wèi)生規(guī)則，作為技術(shù)法規(guī)和仲裁國際貿(mào)易糾紛的技術(shù)依據(jù)，得到了世界各國獸醫(yī)工作者的一致認(rèn)可。OIE的診斷標(biāo)準(zhǔn)體系完善、內(nèi)容科學(xué)，有分布于全球的OIE參考實驗室作為技術(shù)后盾，這些診斷技術(shù)代表了全世界獸醫(yī)工作的最高水平，科學(xué)性、實用性和先進(jìn)性都很強，是世界各國在獸醫(yī)技術(shù)能力建設(shè)上所參照的國際標(biāo)準(zhǔn)。隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化進(jìn)程的加快，動物和動物產(chǎn)品的國際貿(mào)易也進(jìn)入了國際競爭時代，各國對動物的健康狀況和衛(wèi)生水平以及動物產(chǎn)品的安全性提出了更加苛刻的要求，一些國家借此設(shè)置各種貿(mào)易技術(shù)壁壘，限制別國的產(chǎn)品出口，以此實現(xiàn)貿(mào)易保護(hù)。近年來我國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作取得了一定的成績，但還沒有建立起與國際接軌的動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系，用國際標(biāo)準(zhǔn)衡量時，我們所制定的標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)水平和內(nèi)容的涵蓋范圍還有諸多不足，動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化工作還遠(yuǎn)不能適應(yīng)入世后的貿(mào)易和社會發(fā)展需要。為了應(yīng)對國際貿(mào)易的需要，促進(jìn)國家標(biāo)準(zhǔn)、國家法規(guī)的協(xié)調(diào)性特別是與國際標(biāo)準(zhǔn)的接軌，現(xiàn)以O(shè)IE規(guī)定的豬傳染性疾病（11種）為例進(jìn)行國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較及適用性評估，為動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作提供參考。

2 豬傳染性疾病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較及適用性評估

2.1 非洲豬瘟（African swine fever）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

非洲豬瘟的OIE診斷標(biāo)準(zhǔn)包括紅細(xì)胞吸附試驗、熒光抗體試驗、病毒基因組檢測、動物接種試驗及ELISA、間接熒光抗體試驗、免疫印跡試驗和逆向免疫電泳試驗，共計8個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中紅細(xì)胞吸附試驗可以檢測組織和外周血中的病毒，對非洲豬瘟的診斷是確定的；熒光抗體試驗檢測病毒抗原進(jìn)行假定診斷，鑒定非紅細(xì)胞吸附型毒株，鑒別ASFV和其他病毒引起的細(xì)胞病變，在亞急性和慢性病例中敏感性降低；病毒基因檢測可以檢測和鑒別所有已知的病毒基因型，對不適合病毒分離或抗原檢測的組織特別有用；動物接種試驗過去用于區(qū)別古典豬瘟和非洲豬瘟，周期長、昂貴，操作困難，引起動物福利問題，不再推薦使用；ELISA直接檢測低毒力或中等毒力感染豬的ASFV抗體，用于大規(guī)模血清樣品的篩選，廣泛用作根除計劃，特異性和敏感性都很高，有商品化試劑盒供應(yīng)，是國際貿(mào)易指定使用的試驗；間接熒光抗體試驗用作無ASF疫區(qū)ELISA陽性血清以及ELISA結(jié)果不確定地區(qū)的確診試驗；免疫印跡試驗用作間接熒光抗體試驗的替代試驗對有爭議的血清進(jìn)行確診，特異性強，結(jié)果的解釋更加容易、更加客觀，能夠較好地鑒別弱陽性樣品；逆向免疫電泳檢測用于豬群的檢疫篩選，不建議用作個體豬的檢疫，快速，敏感性低。非洲豬瘟診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)包括PCR和ELISA，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括紅血球吸附試驗、直接免疫熒光試驗和間接免疫熒光試驗，分別相應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)中的基因檢測、ELISA、紅細(xì)胞吸附試驗、熒光抗體試驗和間接熒光抗體試驗，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的動物接種、免疫印跡和逆向免疫電泳試驗，建議加強這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂。

2.2 豬萎縮性鼻炎（Atrophic rhinitis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

豬萎縮性鼻炎的OIE診斷標(biāo)準(zhǔn)包括病原培養(yǎng)、生化鑒定（莢膜分型、菌體抗原分型、毒素檢測）、核酸檢測及ELISA和凝集試驗，共計7個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病原培養(yǎng)可以從病料中直接分離病原菌，莢膜分型試驗使用間接血凝進(jìn)行血清分型，用于流行病學(xué)調(diào)查，只有少數(shù)實驗室可以做；菌體抗原分型可以區(qū)別16個抗原型，很多參考實驗室和一些診斷實驗室都可以做；產(chǎn)毒性鑒定是診斷的依據(jù)，是鑒別帶菌豬和控制萎縮性鼻炎的首選方法，特異性強；核酸檢測用于檢測病原菌和莢膜分型，限制性內(nèi)切酶是流行病學(xué)調(diào)查的首選方法，快速、特異和敏感；還沒有滿意的血清學(xué)試驗可用于檢測感染動物，產(chǎn)毒菌株和非產(chǎn)毒菌株有交叉反應(yīng)，抗體檢測無意義，有商品化的檢測多殺性巴氏桿菌毒素抗體的ELISA試劑供應(yīng)；凝集試驗可以檢測支氣管敗血波氏桿菌，但病原在明顯健康豬群中持續(xù)存在，只能用于監(jiān)控陰性畜群的健康地位。豬萎縮性鼻炎診斷的農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病原分離培養(yǎng)、莢膜分型、菌體抗原分型、毒素鑒定以及試管凝集、平板凝集，與OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病原培養(yǎng)、生化特征鑒定以及血清凝集試驗相對應(yīng)，缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的核酸檢測和ELISA試驗；目前還沒有相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)和檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，建議加強這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂。

2.3 豬瘟（Classical swine fever）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

豬瘟診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括熒光抗體試驗、過氧化物酶免疫染色、抗原捕獲ELISA、病毒分離鑒定和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)5種病原鑒定方法以及過氧化物酶中和試驗、熒光抗體病毒中和試驗與單抗ELISA三種血清學(xué)方法，共計8個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中熒光抗體試驗是檢測冷凍切片上的病毒抗原，陰性結(jié)果并不能完全排除CSFV感染，建議專業(yè)實驗室使用；過氧化物酶染色可以區(qū)分田間分離株和疫苗免疫株，區(qū)別CSFV和其他瘟病毒；抗原捕獲ELISA篩選最近可疑感染的畜群以便能夠快速診斷，操作簡單，不需要組織培養(yǎng)設(shè)備，適合于自動化，敏感性不如病毒分離，特異性差，不適于個體診斷；病毒分離比免疫熒光試驗更加敏感，周期長；RT-PCR可以成功地控制疾病暴發(fā)，快速，比抗原捕獲ELISA或病毒分離更加敏感，特別適合于臨床前診斷，是歐盟和許多國家認(rèn)可的快速篩選方法，初次陽性結(jié)果要通過其他方法確診；過氧化物酶中和試驗用于國際貿(mào)易目的和國家監(jiān)測計劃，是最常用的抗體檢測技術(shù)之一，結(jié)果容易判讀，是國際貿(mào)易指定使用的試驗；熒光抗體病毒中和試驗是常用的抗體檢測技術(shù)之一，是國際貿(mào)易指定使用的方法，稀釋度低時偶爾會產(chǎn)生交叉反應(yīng)；單抗ELISA主要用于豬瘟抗體的鑒別診斷，可區(qū)別自然感染豬、免疫豬、強、弱毒抗體陽性豬和抗體陰性豬，敏感性非常高，是國際貿(mào)易指定使用的試驗。豬瘟診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)包括兔體交互免疫試驗、免疫酶染色試驗、病毒分離與鑒定、直接免疫熒光抗體試驗、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)以及熒光抗體病毒中和試驗與豬瘟單抗ELISA，其中的兔體交互免疫試驗是對國際標(biāo)準(zhǔn)的補充；檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括免疫熒光技術(shù)、中和免疫熒光試驗以及單抗ELISA，分別對應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)中的熒光抗體試驗、過氧化物酶免疫試驗、病毒分離、RT-PCR、熒光抗體病毒中和試驗及單抗ELISA，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的過氧化物酶中和試驗及抗原捕獲ELISA。

2.4 豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

豬繁殖與呼吸綜合征診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、核酸檢測、免疫組化、免疫過氧化物酶單層試驗、間接免疫熒光試驗和間接ELISA，共計6個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病毒分離可以鑒定病毒，但比較困難；核酸檢測用于不適合做病毒分離的樣品，可以區(qū)分不同分離株，區(qū)別田間株和疫苗株，進(jìn)行分子流行病學(xué)研究，快速、不需要細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備；免疫組化檢測組織中的病毒抗原，免疫過氧化物酶試驗檢測血清中的病毒抗體，間接免疫熒光試驗用于滴定血清抗體滴度，還沒有可以被廣泛接受的標(biāo)準(zhǔn)，主要用于北美洲國家；間接ELISA可以區(qū)分不同分離株，確定豬群的感染地位，操作簡單，在群體水平上特異敏感，可以快速處理大量樣品，有商品化試劑盒供應(yīng)。檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、免疫過氧化物酶單層試驗、間接免疫熒光試驗和間接ELISA，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括免疫酶試驗和免疫酶組織化學(xué)法，只是缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的核酸檢測，其余方法都與OIE標(biāo)準(zhǔn)相對應(yīng)，國家標(biāo)準(zhǔn)目前還是空白，建議將相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)上升為國家標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 豬水泡?。⊿wine vesicular disease）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

豬水泡病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離與鑒定、ELISA檢測抗原、核酸檢測、病毒中和試驗以及ELISA檢測抗體，共計5個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病毒分離與鑒定是鑒定病毒的參考方法，不足以用ELISA和RT-PCR檢測的樣品需要進(jìn)行病毒分離；間接夾心ELISA檢測病毒抗原已經(jīng)取代補體結(jié)合實驗成為首選方法，適合于快速篩選，具有與病毒分離同樣的診斷價值；核酸檢測從臨床和亞臨床病例中檢測病毒基因組，適合于快速篩選，具有與病毒分離同樣的診斷價值；病毒中和試驗用于實驗室確診、血清學(xué)監(jiān)測和豬的出口認(rèn)證，常用的血清學(xué)檢測技術(shù)之一，得到認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)方法，耗時長，是國際貿(mào)易指定使用的方法；ELISA抗體檢測用于實驗室確診、血清學(xué)監(jiān)測和豬的出口認(rèn)證，常用的血清學(xué)檢測技術(shù)之一，快速，容易標(biāo)準(zhǔn)化，單抗競爭ELISA是檢測病毒抗體的可靠技術(shù)。相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離鑒定、反向間接血凝試驗、瓊擴、病毒中和試驗以及熒光RT-PCR，其中反向間接血凝試驗和瓊擴試驗是對OIE標(biāo)準(zhǔn)的補充，都適用于大批樣品的篩選，適用于檢疫、監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查和無本病豬群的建立，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的ELISA抗原、抗體檢測技術(shù)；檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)只有一個病毒中和試驗，建議申請反向間接血凝和瓊擴試驗的國際認(rèn)證，加強和完善其他缺失方法的標(biāo)準(zhǔn)制修訂。

2.6 豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

豬傳染性胃腸炎診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、熒光抗體檢測、雙抗體夾心ELISA、核酸檢測、病毒中和試驗、阻斷或間接ELISA，共計6個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病毒分離是除活豬接種之外最確定的診斷方法，費時費力，不適合于常規(guī)檢測；熒光抗體檢測鑒定病毒抗原，快速、敏感、特異性強；雙抗體夾心ELISA可以檢測糞便中的病毒抗原，核酸檢測可以直接檢測臨床樣品中的病毒；病毒中和試驗很多年來得到非常廣泛的使用，通常作為評價其他新方法的標(biāo)準(zhǔn)；阻斷或間接ELISA可以與豬呼吸道冠狀病毒進(jìn)行鑒別診斷，是出口檢疫的首選方法，有商品化試劑盒供應(yīng)。檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括阻斷ELISA、血清中和試驗，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離鑒定、直接免疫熒光法、雙抗體夾心ELISA、中和試驗、間接ELISA，這幾個方法都與OIE標(biāo)準(zhǔn)相對應(yīng)，只是缺失OIE標(biāo)準(zhǔn)中的核酸檢測，核酸檢測具有快速、靈敏等優(yōu)點，建議加強這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂任務(wù)，同時加快行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)向國家標(biāo)準(zhǔn)的升級轉(zhuǎn)化。

2.7 診斷標(biāo)準(zhǔn)與OIE標(biāo)準(zhǔn)差距很大的幾種豬傳染性疾病

OIE所列豬傳染性疾病共有11種，除上述6種之外，其他5種我國都沒有相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，與OIE標(biāo)準(zhǔn)差距很大。這5種疾病包括尼帕病毒性腦炎（Nipah virus encephalitis）、豬布氏桿菌?。≒orcine Brucellosis）、豬 囊 蟲 ?。≒orcine cysticercosis）、豬 流感（Swine infl uenza）、豬腸道病毒醒腦脊髓炎 /捷申 ?。╡nterovirus encephalomyelitis/ Teschen/Talfan disease），這5種疾病的OIE標(biāo)準(zhǔn)都比較完善，但我國卻沒有這方面的標(biāo)準(zhǔn)，特別是尼帕病毒性腦炎是新發(fā)外來傳染病，傳染性很強，我們必須做好技術(shù)儲備防治外來并入侵。豬流感病毒是人畜共患傳染病，特別是今年甲型H1N1流感病毒在世界范圍內(nèi)的流行更加劇了本病的嚴(yán)重危害性，建議加強這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂任務(wù)。

2.8 超出OIE標(biāo)準(zhǔn)范圍的幾種豬傳染性疾病

根據(jù)我國動物疫病發(fā)病的實際特征，結(jié)合我國具體情況，研究人員還制定了沒有列入OIE標(biāo)準(zhǔn)但是在我國比較嚴(yán)重的幾種豬傳染性疾病，包括豬細(xì)小病毒病、豬流行性腹瀉和豬傳染性胸膜肺炎等。有關(guān)豬細(xì)小病毒的標(biāo)準(zhǔn)有豬細(xì)小病毒紅細(xì)胞凝集抑制試驗與聚合酶鏈反應(yīng)；有關(guān)豬流行性腹瀉的標(biāo)準(zhǔn)有病毒分離鑒定、直接免疫熒光試驗、雙抗體夾心ELISA、血清中和試驗、間接ELISA以及間接Dot-ELISA，內(nèi)容比較豐富完善；有關(guān)豬傳染性胸膜肺炎的標(biāo)準(zhǔn)包括聚合酶鏈反應(yīng)和阻斷ELISA。這些技術(shù)如果成熟，建議申請國際標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)可。

3 比較、評估結(jié)論與建議

通過比較發(fā)現(xiàn)，我國豬傳染性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)存在的差異比較大。具體表現(xiàn)在：（1）有一些標(biāo)準(zhǔn)是OIE手冊中沒有提及的，如豬細(xì)小病毒的紅細(xì)胞凝集抑制試驗與聚合酶鏈反應(yīng)，豬流行性腹瀉的病毒分離鑒定、直接免疫熒光試驗、雙抗體夾心ELISA、血清中和試驗、間接ELISA以及間接Dot-ELISA等，以及豬傳染性胸膜肺炎的聚合酶鏈反應(yīng)和阻斷ELISA等。這些標(biāo)準(zhǔn)都是我國相關(guān)科研單位根據(jù)國家疫病發(fā)生的實際情況制定的。這樣做提升了標(biāo)準(zhǔn)的適用性，更加符合疫病防控的迫切需要，是對國際標(biāo)準(zhǔn)的補充，如果技術(shù)成熟，建議可以申請成為國際標(biāo)準(zhǔn)。（2）有一些標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容比較全面，技術(shù)含量高，科學(xué)性強，具有一定的先進(jìn)性，與國際標(biāo)準(zhǔn)比較接近，可以滿足國際貿(mào)易的需要。（3）有一些標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容不全面，只包括了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的部分內(nèi)容，落后于國際標(biāo)準(zhǔn)，特別是OIE推薦的國際貿(mào)易規(guī)定要使用的方法在我國缺失，這類標(biāo)準(zhǔn)要加快修訂和更新，以便能適應(yīng)國際貿(mào)易的需要。（4）有一些標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)差距很大，比較成熟的國際標(biāo)準(zhǔn)在我國還是空白，如，尼帕病毒性腦炎、豬布氏桿菌病、豬囊蟲病、豬流感及豬腸道病毒醒腦脊髓炎/捷申病。一旦遇到國際貿(mào)易要求對這些疾病進(jìn)行檢疫，我們將無法應(yīng)對，陷入被動，建議必須加快這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂任務(wù)。（5）有一些行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國家標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容相互交叉、重復(fù)甚或矛盾，這種情況需要進(jìn)行清理整合。

鑒于上述豬傳染性疾病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)存在的差距，建議（1）從OIE參考實驗室引進(jìn)重大動物疫病的診斷試劑和方法，選取國內(nèi)資質(zhì)條件好的實驗室對目前我國已經(jīng)制定的動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗證和復(fù)核。驗證合格者，推薦使用，并推薦申請OIE的國際認(rèn)可；驗證有小幅差距者，暫停使用，待完善達(dá)標(biāo)后再推薦使用；不合格者，停止使用，撤消標(biāo)準(zhǔn)。這樣做有利于提高我國口岸動物檢疫實驗室的水平，有利于我國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)同等地位的確立，可以推動我國動物及動物產(chǎn)品的出口貿(mào)易，同時更好地防范外來動物疫病入侵，更好地把好國門。（2）遵照OIE標(biāo)準(zhǔn)的要求，制定一個系統(tǒng)、完整的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定體系或框架，在該體系或框架的指導(dǎo)下，對現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行清理整合、特別是對于那些內(nèi)容交叉重復(fù)甚或矛盾的部分進(jìn)行徹底清理，內(nèi)容陳舊的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行更新修訂，過期或不適用的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行作廢處理，缺失的標(biāo)準(zhǔn)加緊制修訂，使我國的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作逐步進(jìn)入一個有序狀態(tài)，按計劃進(jìn)行。

[1] 馬貴平，史喜菊，李冰玲，等.多種動物共患傳染病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較及適用性評估[J].中國動物檢疫，2010，27（10）：66-69.

[2] 史喜菊，馬貴平，李冰玲，等.牛傳染病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較及適用性評估[J].中國動物檢疫，2010，27（11）：64-67.

[3] World Organization for Animal Health（OIE）.Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals，2011[M/OL].http：//www.oie.int/international-standard-setting/terrestrialmanual/access-online/.