李會勤

清喉咽合劑為《中國藥典》2005年版一部收載品種,主要由地黃，麥冬，玄參，連翹，黃芩等組成，其中連翹為君藥，其主要成份為連翹苷，經(jīng)多年臨床應(yīng)用證明,該方具有養(yǎng)陰清肺，利咽解毒。用于陰虛燥熱、火毒內(nèi)蘊(yùn)所致的咽部腫痛、咽干少津、咽部白腐有苔膜、喉核腫大；局限性的咽白喉、輕度中毒型白喉、急性扁桃體炎、咽峽炎等[1]。清喉咽合劑在現(xiàn)行藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用高效液相色譜法對黃岑苷的含量測定，為了提高該產(chǎn)品的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全有效，本文采用高效液相色譜法對清喉咽合劑中連翹苷的含量進(jìn)行了測定，結(jié)果比較滿意，現(xiàn)報告如下：

1 儀器與試劑

島津LC-10ATvp高效液相色譜儀,SPD-10Avp紫外檢測器（日本島津）；萬分之一分析天平（FA2004A）；連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號12311-0507）；清喉咽合劑（批號：20090812；20091203；20090904，北京龍?zhí)┗帢I(yè)有限責(zé)任公司），甲醇、乙腈均為色譜純,水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ODS C18柱（250mm×4.6mm 5μm），流動相：乙睛：水（21：78）；檢測波長為230nm，流速1.0ml/min，柱溫25℃，進(jìn)樣量：25μL，理論塔板數(shù)按連翹苷峰計算不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品的制備工藝 五味藥品粉碎成粗粉，用57％乙醇浸漬24小時后，過濾得濾液6000ml，減壓回收乙醇并濃縮至約1400ml，加水800mL，煮沸30分鐘，靜置48小時，濾過，濾渣用少量水洗滌，洗液并入濾液中，減壓濃縮至約1000ml，加苯甲酸鈉3g，攪勻，靜置24小時，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至1000mL錐形瓶中，水補(bǔ)充至相應(yīng)的刻度，搖勻。

2.2.2 供試品溶液的配置 精密取同一批清喉咽合劑（批號：20090812）100mL，離心過濾，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖萃取3次，合并乙酸乙酯液，濃縮，過中性氧化鋁柱，75％乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，洗脫液濃縮，冷凍干燥，殘渣甲醇溶解，濾過，過0.45μm微孔濾膜,并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，甲醇補(bǔ)充至相應(yīng)刻度，即得，搖勻，供試品溶液即得。

2.2.3 對照品溶液的配置 精密稱取連翹苷對照品1.0mg，加入甲醇適量，超聲波催溶，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液，備用。

2.2.4 陰性對照溶液 按照清喉咽合劑的制備工藝制備不含連翹的樣品,按樣品的制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取連翹苷對照品溶液1mL、2mL、4mL、6mL、10mL于10mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度,搖勻，按照上述方法進(jìn)樣20μL，按上述色譜條件進(jìn)行含量測定,以峰面積（S）對濃度（C）作二元一次線性回歸,得回歸方程S=87956X+36571（r=0.9998）。結(jié)果表明連翹苷在0.01mg/ml～0.1mg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 專屬性考察 取供試品、對照品、及陰性對照溶液各25μL按上述色譜條件進(jìn)行測定,連翹苷和供試品中其他組分色譜峰可達(dá)到基線分離,陰性對照溶液對連翹苷的測定無干擾,本法專屬性較好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密取同一供試品溶液，分別在2、5、10、20、24h進(jìn)樣250μL,按照上述色譜條件測定連翹苷的含量，計算得平均RSD值為1.07％，表明連翹苷在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液25μl連續(xù)注入5次,按照色譜條件測定連翹苷的含量,計算得平均RSD值為1.21％，精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密取同一批清喉咽合劑,按供試品溶液制備方法平行制備5份供試品溶液,按照色譜條件測定連翹苷含量,計算連翹苷含量為0.1917mg/mL,平均RSD值1.21％，表明重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已測含量的樣品（批號：20090812）5mL于20mL量瓶中，加入連翹苷適量，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液,甲醇補(bǔ)至相應(yīng)的刻度，照上述色譜條件進(jìn)行測定,計算回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品測定 取不同批號（批號：20090812；20091203；20090904）的樣品，按照供試品溶液制備方法制備供試液,按外標(biāo)法測定含量,每個樣品平行測定3次，計算出樣品中連翹苷的含量，結(jié)果所測定含量分別為（0.1919、0.1935、0.1923）mg/mL。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 應(yīng)用二極管陣列檢測器在190～400nm對連翹苷對照品溶液進(jìn)行掃描,在波長230nm有最大吸收,且樣品中其它成分在此波長處對測定無干擾，故測定波長選定為230nm。

3.2 流動相的選擇 在該實(shí)驗(yàn)中,曾選用不同的流動相，包括乙腈-水（28∶72）作為流動相[2],乙睛-水（23∶77）[3],通過調(diào)節(jié)不同比例的流動相實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,以乙腈-水（21∶78）為流動相分離效果明顯,沒有拖尾而且保留時間適宜。

本文建立的清喉咽合劑中連翹苷的含量測定方法。簡便可靠、精密度高、快速、分離度好，可用于對清喉咽合劑的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（1部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：622.

[2]宋世才,周亞球.高效液相色譜法測定抗病毒膠囊中連翹苷的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2007；（18）：94-95.

[3]余積飛,馬麗芬,何琴.維C銀翹片中連翹苷的質(zhì)量控制方法研究[J].大理學(xué)院,2008,7（10）：5-7.