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        姜黃素對糖尿病腎病大鼠腎功能及腫瘤壞死因子-α及單核細胞趨化蛋白-1的作用

        2011-02-08 07:59:14潘國偉馬擁軍陳英剛
        中國中醫(yī)急癥 2011年1期
        關鍵詞:單核細胞姜黃造模

        潘國偉 陳 琨 馬擁軍 陳英剛

        浙江省金華市中心醫(yī)院(浙江金華321000)

        糖尿病腎病是糖尿病微血管的慢性并發(fā)癥之一,嚴重危害著糖尿病患者的身心健康及生活質量。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中可能起十分重要的作用[1-2]。姜黃素是從中藥姜黃中提取的一種酚性色素,具有廣泛的藥理作用、如抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗缺血、降血脂等作用。本研究擬應用鏈脲佐菌素復制糖尿病模型大鼠,觀察姜黃素對其腎功能以及血清TNF-α、MCP-1的影響。

        1 實驗材料

        1.1 試劑 姜黃素(上海試劑三廠),鏈脲佐菌素(STZ,美國Sigma公司產品),ELISA試劑盒(北京邦定公司),其他試劑為進口或國產分析純。

        1.2 儀器 血糖儀及血糖試紙(德國羅氏公司),自動生化分析儀 (美國Technicon公司),酶標儀 (芬蘭Wells can MK-3型),放射免疫γ計數器(中國科學院上海原子核研究所產品)。

        1.3 動物 3月齡雄性SD大鼠,體質量在180~200g(湘雅醫(yī)學院動物實驗中心提供)。大鼠飼養(yǎng)于動物室,室溫21~25℃。

        2 實驗方法

        2.1 分組及模型建立 適應性飼養(yǎng)大鼠1周。造模前將所有大鼠隨機分為正常對照組(8只)和造模組。STZ臨用前用0.1mol/LpH4.0的枸櫞酸緩沖液配成1%的濃度,以60mg/kg一次性腹腔注射。72h后檢測空腹血糖和尿糖水平,以血糖16.7mmol/L且尿糖在(+++)~(++++)以上作為模型入選。 正常對照組僅予等量的枸櫞酸緩沖液腹腔注射。造模后選取符合成模標準的大鼠,隨機分為糖尿病腎病組(8只)和姜黃素治療組(8只)。確定造模大鼠達到標準第2天開始,姜黃素治療組以姜黃素每天200mg/kg灌胃。其他兩組自由飲水及攝食。

        2.2 標本收集與處理 用藥第6周時用代謝籠收集24h尿液,離心,計總量,保存于-30℃冰箱中。造模前及用藥第6周末稱量大鼠的體質量,腹主動脈取血約6mL,用于指標檢測。2.5%戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉大鼠,取腎臟組織,在液氮中速凍后-85℃冰箱保存。

        2.3 指標檢測 生化指標采用Technicon自動生化分析儀檢測;mALB用放射免疫法檢測,按照試劑盒說明書操作;肌酐(Ccr)檢測采用堿性苦味酸法。采用雙抗體夾心ELISA法測定,操作嚴格按說明進行,應用酶標儀測TNF-α及MCP-1OD值,根據不同濃度標準血清的OD值作標準曲線,計算待測標本血清TNF-α及尿液MCP-1質量濃度。

        2.4 統計學處理 應用SPSS11.0統計軟件。計量資料以表示,采用方差分析、F檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

        3 結 果

        3.1 各組大鼠一般情況比較 與正常對照組比較,造模后造模組大鼠明顯消瘦;造模前后自身對照比較,大鼠造模后體質量顯著減輕。藥物干預后,糖尿病腎病組大鼠小便量明顯增多,每天需換墊料2次,進食量及飲水量明顯增加。而姜黃素治療組飲水量、進食量、小便量較糖尿病腎病組大鼠少,每天只換1次墊料即可。

        3.2 各組大鼠生化指標與尿微量白蛋白比較 見表1。選模后,糖尿病腎病組血糖、尿微量白蛋白排泄率(UAER)及Ccr與正常對照組比較差異有統計學意義(P<0.05);給藥后,姜黃治療組上述指標較糖尿病腎病組顯著降低(P<0.05)。

        表1 各組大鼠生化指標和UAER比較

        表1 各組大鼠生化指標和UAER比較

        與正常對照組比較,*P<0.05;與糖尿病腎病組比較,△P<0.05。下同。

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        3.3 各組TNF-α及MCP-1水平比較 見表2。糖尿病腎病組血清TNF-α較正常對照組TNF-α顯著上升且差異有統計學意義(P<0.05),姜黃素治療組血清TNF-α較糖尿病腎病組明顯降低(P<0.05)。糖尿病腎病組MCP-1分泌量較對照組明顯增加(P<0.05)。姜黃素治療后,可見MCP-1分泌量較糖尿病腎病組顯著降低(P<0.05)。

        表2 各組血清TNF-α及尿液MCP-1水平比較 (pg/mL

        表2 各組血清TNF-α及尿液MCP-1水平比較 (pg/mL

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        4 討 論

        MCP-1是一種對單核細胞有強烈趨化作用的細胞因子,研究報導腎小球中單核細胞的浸潤與ECM的聚積及腎小球硬化癥的發(fā)展相關聯,這種現象也見于糖尿病腎病患者中。Rovin等[3]觀察結果顯示:患者血清中MCP-1的含量無明顯變化,而尿中MCP-1較對照組明顯增高,血及尿中MCP-1的含量沒有相關性,且尿中MCP-1與尿蛋白成正比,這是由于MCP-1參與腎小球的損傷,而蛋白尿正是這種損傷的標志。Saitoh等[4]證明,在患者尿中MCP-1水平不僅升高,且與腎病的嚴重程度成正比。這些結果表明在患者中,尿中升高的MCP-1由局部產生,但其機制尚不清楚。本實驗研究在糖尿病腎病模型大鼠中進行,測得糖尿病腎病大鼠尿液MCP-1的改變與上述報道一致,同時測得24h尿蛋白定量,在糖尿病腎病組大鼠尿蛋白改變與MCP-1升高呈現一致性,再次證實MCP-1升高是腎功能損傷的可能機制之一。對于引起尿液MCP-1改變的可能因素本實驗進行了進一步探討,MCP-1作為一種趨化因子,在致炎因子TNF-α作用下可誘導其表達[5],因此本實驗發(fā)現糖尿病腎病大鼠血清TNF-α的改變,與尿液MCP-1改變呈正相關,推測尿液MCP-1增加可能與局部炎癥因素有關。已有實驗證實單核巨噬細胞浸潤導致的局部微炎癥狀態(tài)是糖尿病腎病發(fā)病機制中一個重要環(huán)節(jié)[6]。

        姜黃素是從姜黃中提取的一種植物多酚,也是姜黃發(fā)揮藥理作用最重要的活性成分。近年來的研究不僅證實了姜黃的傳統作用,而且還揭示出一些新的藥理作用,如抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人類免疫缺陷病毒、保護肝臟和腎臟、抗纖維化以及防癌抗癌等作用,而且無明顯的毒性和不良反應[7]。本試驗發(fā)現姜黃素應用與糖尿病腎病組大鼠可改善其腎功能,同時降低血清TNF-α和尿液MCP-1水平,推測姜黃素改善腎功能部分是通過抑制TNF-α分泌減少MCP-1分泌量,最終抑制局部炎癥反應而實現的。

        本研究提示,姜黃素可以有效地抑制糖尿病腎病模型大鼠TNF和MCP-1的分泌,從而達改善其腎功能作用。由于姜黃素具有價格便宜、不良反應少等特點,因此其對于延緩慢性腎臟疾病身終末期腎病的演進可能是一種很有前景的藥物,值得深入研究。

        [1]劉鏝利,王宗仁,張筠,等姜黃素對腫瘤壞死因子誘導單核細胞趨化蛋白 21 表達影響[J].第四軍醫(yī)大學學報,2008,29(9):819-821

        [2] Wenzel UO.Chemokines and renal disease [J].AmJKidney Dis,1995,26(4):982-995.

        [3] Rovin BH,Doe N,Tan LC.Monocyte chemoattract antprotein-1 levels in patientswithglomerular disesse[J] .AmJKidney Dis,1996,27(3):640-646.

        [4] Saitoh A,Sekizuka K,Hayashi T,et al.Detection of urinary MCP-1 in patientswith diabetic nephropathy[J].Nephron,1998,80(1):99.

        [5] Shi Q,Vandeberg JF,Jett C,et al.Arterial endothelial dysfunction in baboonsfed ahigh2cholesterol,high2fatdietl[J].Am JClin Nutr,2005,82(4):751-759.

        [6] UsuiHK,Shikata K ,Sasaki M,et al.Macrophage scavenger receptor-a-deficient mice areresist antagainst diabetic nephropathy through amelioration of micro inflammation[J].Diabetes,2007,562(3):363-372.

        [7]鮑華英,陳榮華.姜黃素的研究進展[J].國外醫(yī)學:兒科學分冊,203,30(5):254-256.

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