肖霞 曹俊凱

中藥止痛膠囊中芍藥苷的HPLC含量測定

肖霞 曹俊凱

目的 建立止痛膠囊中芍藥苷的含量測定。方法 用HPLC法，CLC-ODS柱(15 cm×6 mm)，以甲醇-乙腈-醋酸-水 =(15∶7.5∶2∶75.5)為流動相;檢測波長:245 nm;超聲波提取，對中藥止痛膠囊中主藥白芍中芍藥苷含量進行測定。結(jié)果 其平均回收率為100.72%，相對標準偏差為1.23%。結(jié)論 用本法測定該止痛膠囊中芍藥苷含量，結(jié)果準確、靈敏、方法簡便，且有適用性。

HPLC;中藥止痛膠囊;芍藥苷

白芍系Paeonia lactiflora Pall.多年生草木植物，有平肝止痛、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功，可用于頭痛眩暈、脅痛、腹痛、四肢攣痛等，芍藥中芍藥苷顯示了較強的生理活性。新研制的中藥止痛膠囊是以白芍為主要藥味及其他中草藥經(jīng)精制而成。芍藥苷在止痛膠囊中含量多少對藥效至關(guān)重要。中藥止痛膠囊中芍藥苷含量的測定方法尚未見報道。本文采用HPLC法，用超聲波萃取，對該止痛膠囊中芍藥苷含量進行測定［1，2］，其平均回收率為100.72%;相對標準偏差為 1.23%。表明本法測定該止痛膠囊中芍藥苷含量，結(jié)果準確、靈敏、方法簡便易行。實驗部分

1 儀器、試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀，超聲波發(fā)生器，電子分析天平。

1.2 試藥 甲醇、乙腈，醋酸，超純水;對照品:芍藥苷;中藥止痛膠囊樣品。

2 含量測定

2.1 色譜條件［3］色譜柱:島津 Shimpack CLC-ODS柱(15 cm × 6 mm)，流動相:甲醇-乙腈-醋酸-水 =(15∶7.5∶2∶75.5);檢測波長:245 nm;流速:1.4 ml/min;紙速:1 mm/min。

實驗表明，在上述選擇的色譜條件下，中藥止痛膠囊中，其他組分對芍藥苷組分的主峰無干擾，分離好，能夠滿足該止痛膠囊中芍藥苷含量測定的要求，結(jié)果見圖1(A，B，C)。

由色譜圖中可見，其他組分對芍藥苷主峰的保留時間與對照品(芍藥苷)的色譜峰保留時間一致(tR=8.4 min)。

2.2 對照品溶液的制備 精稱適量對照品(芍藥苷)，于10 ml量瓶中用70%甲醇溶解并稀至刻度，搖勻、備用。濃度為2 mg/m l。

2.3 樣品供試液的制備［4］取內(nèi)容物，混合均勻，精稱適量(相當一粒止痛膠囊1/2的量，約0.25 g)于50ml量瓶中，加入適量70%甲醇水，在超聲波發(fā)生器中提取1 h，取出待室溫后，稀釋至刻度搖勻，待用。

取上述樣品液1 ml置量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量于1.5 ml小離心管中，在高速離心機1 2000 r/min中離心2～3 min，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液。

圖1 樣品色譜圖A-芍藥苷 B-空白 C-止痛膠囊

2.4 系統(tǒng)適用性試驗分別精密吸取對照品溶液，止痛膠囊試液，芍藥苷的陰性樣品供試液各10μl，注入HPLC儀，按上述色譜條件測定。

2.5 線性關(guān)系考察［5］精密移取上述標液(2 mg/m l)1，0.5，0.25，0.125 ml，分別置入 10 ml量瓶中，用 70% 甲醇水溶液稀釋至刻度搖勻。分別在上述色譜條件下進樣20μl，以芍藥苷的濃度(c)為橫坐標，峰高(h)為縱坐標繪圖得一直線，其回歸方程為c=0.001 h-0.03，r=0.9999。

由上述實驗表明:芍藥苷濃度在0.2～0.025 mg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 精取上述溶液1 ml，于10 m l量瓶中，用70%甲醇水稀料至刻度，搖勻，取1.5 ml于小離心管中，在高速離心機中1 2000 r/min離心2～3min，取出，吸取上清液進樣20μl，測得5次記錄峰面積，結(jié)果峰面積的 RSD為1.22%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗 精稱3份相同量的芍藥苷與適量的空白樣品，分別置入10 ml量瓶中，加入適量70%甲醇，超聲波提取1 h，取出放至室溫后，用70%甲醇水稀至刻度、搖勻，待用。分別精取上述液1 ml，于10 ml量瓶中用70%甲醇水稀至刻度、搖勻，取適量于1.5 ml小離心管中，在高速離心機1 2000 r/min下離心2～3 min，取出吸取上清液20μl進樣，測得重現(xiàn)性實驗結(jié)果RSD=0.89%。

試驗表明:芍藥苷含量測定重復性較好，能夠滿足止痛膠囊中芍藥苷含量測定要求。

2.8 穩(wěn)定性試驗 按重復性試驗中的1號樣，分別在2、4、6、8、12、24h測定，RSD 為 0.63%，結(jié)果表明，本品在 24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 回收率試驗 精稱對照品(芍藥苷)適量及空白樣品適量于10 ml量瓶中，加入適量70%甲醇水，在超聲波發(fā)生器中提取1 h后，取出放至室溫后，用70%甲醇水稀至刻度，搖勻、備用。

分別精取上述溶液1 ml，于10 m l量瓶中，用70%甲醇水稀至刻度，搖勻，取1.5 ml于小離心管中，在高速離心機中1 2000 r/min離心2～3 min，取出，吸取上清液進樣20μl，測得4次平均回收率為100.72%。

2.10 樣品測定 取內(nèi)容物，混合均勻，精稱適量(相當一粒止痛膠囊1/2的量，約0.25 g)于50 ml量瓶中，加入適量70%甲醇水，在超聲波發(fā)生器中提取1 h，取出待室溫后，稀釋至刻度搖勻，待用。取上述樣品液1 m l置量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量于1.5ml小離心管中，在高速離心機1 2000 r/min中離心2～3 min，取出后，取上清液20μl進樣，測得三批樣品結(jié)果見表1。

表1 止痛膠囊中芍藥苷含量(%/粒)

3 結(jié)果與討論

3.1 樣品處理方法 本文樣品處理采用超聲波提取法，該法比文獻報道的普通提取處理法簡單且樣品不易丟失。

3.2 根據(jù)對流速的考察，發(fā)現(xiàn)當流速為1.4 ml/min的時候，芍藥苷分離效果更好，出峰時間更適中。

3.3 由試驗表明:本法測定中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量，其方法簡便易行、結(jié)果準確、靈敏，能夠滿足該止痛膠囊中含量測定的要求，批量生產(chǎn)時可用于控制質(zhì)量。

3.4 本文考察了3批不同批次中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量。建立了一種更準確、簡單、快速的HPLC測定方法，對于有效評價止痛膠囊的質(zhì)量提供了更為有效的方法。

［1］李俊.中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量測定.中國藥學雜志，2001，26(5):289.

［2］王杰民.HPLC法測定中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量.中成藥，2001，13(4):32.

［3］賈欣，高巖，杜斌，等.HPLC法測定中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量.寧夏大學學報(醫(yī)學版)2006，41(1):156-157.

［4］何懷冰.芍藥中芍藥甙的高效液相色譜法測定.中成藥，2001，13(4):32-33.

［5］趙子劍，趙啟鵬.復方石淋通片的質(zhì)量標準.中醫(yī)藥，2005，25(5):69-70.

463000 駐馬店市第一人民醫(yī)院藥劑科