彭道勇 王蘇平 李迪 朱曉鈺

(大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 遼寧大連 116000)

一氧化碳中毒遲發(fā)記憶障礙小鼠血小板膜糖蛋白CD 61的研究

彭道勇 王蘇平 李迪 朱曉鈺

(大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 遼寧大連 116000)

目的 通過對(duì)一氧化碳中毒遲發(fā)記憶障礙小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究,探索一氧化碳中毒遲發(fā)腦病的發(fā)病機(jī)制。方法篩選出急性中毒遲發(fā)記憶障礙小鼠,測(cè)其血CD61表達(dá)情況。結(jié)果 急性一氧化碳中毒小鼠中有10%出現(xiàn)遲發(fā)記憶障礙,其血CD61的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組。結(jié)論 血小板活化和血栓形成可能是遲發(fā)腦病的發(fā)病機(jī)制之一。

氧化碳中毒 遲發(fā)記憶障礙 CD61

一氧化碳(Carbon monoxide,CO)是造成中毒性死亡最常見的窒息性氣體,部分患者經(jīng)過數(shù)日或數(shù)周的假愈期后,還會(huì)發(fā)生遲發(fā)性腦病(Delayed neuropsychologic sequelae,DNS),臨床表現(xiàn)為一組以急性癡呆為主的精神神經(jīng)功能紊亂,其發(fā)病機(jī)制不清。本研究檢測(cè)CO中毒遲發(fā)記憶障礙的小鼠血CD61的表達(dá)。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑

選用健康昆明小鼠80只,體重18～20g,鼠齡2～3個(gè)月,每籠5只溫室飼養(yǎng)。99.9%CO氣;PE標(biāo)記的小鼠CD61抗體及同型對(duì)照,流式細(xì)胞儀

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備：(1)將小鼠飼養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境后行光電刺激小鼠條件反射跳臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練,讓小鼠學(xué)會(huì)跳上安全臺(tái)。(2)染毒。采用按體重(1.5m L/10g)每間隔6h連續(xù)8次注射99.9%的CO氣體致小鼠中毒進(jìn)行染毒。

1.2 遲發(fā)記憶障礙小鼠的篩選

于小鼠中毒后第1、3、5、7、11、15、20、25、30天,分別利用光電刺激小鼠條件反射跳臺(tái)儀記錄小鼠跳下安全臺(tái)的跳臺(tái)潛伏期,作為評(píng)價(jià)小鼠的記憶保持鞏固能力的指標(biāo)。篩選出遲發(fā)記憶障礙小鼠。

1.3 標(biāo)本制備

從小鼠眶動(dòng)脈和眶靜脈采血0.5m L(3.8%枸櫞酸鈉1∶9抗凝),按步驟制備標(biāo)本:100uL全血+10uL對(duì)照試劑,100uL全血+10uL實(shí)驗(yàn)試劑避光孵育15m in,自動(dòng)定容到1m L,上機(jī)待測(cè)。

1.4 小鼠血血小板CD61測(cè)定

用流式細(xì)胞儀檢測(cè)標(biāo)本,每管收集10000個(gè)CD61陽(yáng)性血小板,記錄CD61的強(qiáng)度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 CO中毒小鼠記憶保持能力的改變

小鼠腹腔注射CO中毒后第1天記憶保持能力明顯受損,第3天基本恢復(fù)正常,在第5、7、11天的測(cè)試中各有2只、第15、20天各有1只小鼠再次出現(xiàn)記憶保持能力受損。將再次出現(xiàn)記憶保持能力受損的8只小鼠(標(biāo)記為A組);在未再次出現(xiàn)記憶保持能力受損的觀察組中隨機(jī)抽取8只小鼠(標(biāo)記為B組)。

表1 2組小鼠記憶保持能力、COHb、血CD 61表達(dá)(±s)

表1 2組小鼠記憶保持能力、COHb、血CD 61表達(dá)(±s)

注:與B組相比較(1)P<0.05;(2)P<0.01

與B組相比較,A組小鼠記憶保持能力明顯受損(P<0.01); COHb無明顯變化。

2.2 流式細(xì)胞儀測(cè)小鼠血CD61結(jié)果

與B組相比較,A組血CD61增加(P<0.05),見表1。

3 討論

關(guān)于CO中毒及其遲發(fā)性腦病發(fā)病機(jī)制的研究,缺血缺氧機(jī)制曾被許多學(xué)者所推崇[1]。但單純的缺血缺氧機(jī)制無法解釋一些現(xiàn)象,特別是神經(jīng)、精神方面的許多癥狀都是在COHb水平完全恢復(fù)正常之后才出現(xiàn),近年來關(guān)于缺血性腦卒中后白細(xì)胞浸潤(rùn)所致的炎癥反應(yīng)在缺血性腦損傷的發(fā)生、發(fā)展中所起的重要作用已被研究所證實(shí)[2]。本實(shí)驗(yàn)通過建立動(dòng)物模型,對(duì)CO中毒后遲發(fā)記憶礙小鼠血CD61的表達(dá)進(jìn)行了研究。

外周血CD61即GPⅡb/Ⅲa的復(fù)合物,是細(xì)胞黏附分子家族中的整合素分子,廣泛參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附和引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的代謝變化,并在血栓形成和炎癥反應(yīng)中起重要作用。正常人的血小板基本處于靜息狀態(tài),而在血栓前狀態(tài)、血栓性疾病過程中,受各種因素的影響,激活而成為活化血小板。一旦不可逆的活化發(fā)生,血小板和纖維蛋白原聚集成團(tuán),將引起動(dòng)脈血栓形成,造成血管閉塞。CD61可與CD41形成復(fù)合體,是多種因素血小板聚集、血栓形成的最終通道[3],可直接反映血小板的活化狀態(tài)。

本實(shí)驗(yàn)觀察到CO中毒后遲發(fā)記憶障礙小鼠外周血CD61表達(dá)顯著增高,說明CO中毒后,血小板活化及血栓形成,可能是出現(xiàn)CO中毒遲發(fā)腦病的病理原因之一。提示高壓氧處理配合改善腦循環(huán)、降低纖維蛋白原及抗血小板聚集治療有可能對(duì)CO中毒遲發(fā)腦病產(chǎn)生更好的療效。

[1]Kwon OY,Chung SP,Ha YR.Delayed postanoxic encephalopathy after carbon m onoxide poisoning[J].Emerg M ed J,2004,21(2): 250～251.

[2]張海英,劉郁,趙敏.一氧化碳中毒大鼠腦內(nèi)腫瘤壞死因子、白介素-10的時(shí)程變化[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2002,11(4): 227～228.

[3]李玉峰,王士雯,周榮斌,等.缺血性心力衰竭患者功能狀態(tài)的研究[J].中國(guó)循環(huán)雜志,2001,16:259.

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