徐鳳梅 徐風(fēng)杰 袁利

高頻電對根管內(nèi)糞腸球菌滅菌效果的實驗研究

徐鳳梅 徐風(fēng)杰 袁利

目的研究不同功率下高頻電流對根管內(nèi)糞腸球菌的滅菌作用，以期探討高頻電流是否適用于根管內(nèi)殺滅糞腸球菌及適宜的高頻電流功率數(shù)值，為下一步臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)和打下一定的研究基礎(chǔ)。方法選取離體單根管前磨牙共60顆，分成對照組和5個實驗組，實驗組分別為氫氧化鈣組、高頻電流5W組、10W組、15 W組、20W組，每組10顆牙齒。所有牙齒去除牙冠保留牙根長度15 mm，去除牙髓，擴通根管至40號。對照組根管內(nèi)接種菌液4微升后不做任何處理，用無菌紙尖將其吸出。實驗組根管內(nèi)接種菌液4微升后，氫氧化鈣組封藥尖消毒1周，取出藥尖，再向根管內(nèi)加生理鹽水，用無菌紙尖將其吸出。高頻電刀組分別用高頻電流5W、10W、15 W、20 W功率進行滅菌處理，再向根管內(nèi)加生理鹽水，用無菌紙尖將其吸出，所有紙尖分別溶于1 ml生理鹽水后，振蕩均勻，取溶有糞腸球菌的生理鹽水進行平板計數(shù)，24 h后，計數(shù)菌落形成單位。結(jié)果對照組與所有實驗組比較，P＜0.01，所有實驗組菌落計數(shù)結(jié)果與對照組均有差異。氫氧化鈣組與5W組比較，P＞0.05，菌落計數(shù)結(jié)果無差異。氫氧化鈣組與10W、15 W組、20W組比較，P＜0.01，菌落計數(shù)結(jié)果均有差異。結(jié)論氫氧化鈣和不同功率的高頻電流對根管內(nèi)糞腸球菌均有較好的殺滅作用。在功率10W、15W、20W時，高頻電流對根管內(nèi)糞腸球菌的滅菌效果優(yōu)于氫氧化鈣。高頻電流的功率與滅菌效果成正比，隨著功率的增加，滅菌效果明顯增加。在20W時幾乎可完全殺滅糞腸球菌。

高頻電流;根管滅菌;糞腸球菌

糞腸球菌是根管治療失敗后再感染根管內(nèi)最常檢測到的細菌。由于糞腸球菌能夠在根管長期饑餓環(huán)境中生存，對抗菌藥具有耐藥性，同時能耐受強堿，傳統(tǒng)的根管消毒劑氫氧化鈣無法完全消滅糞腸球菌。近年來殺滅根管內(nèi)糞腸球菌成為學(xué)者們關(guān)注的熱點問題，找到消除糞腸球菌的方法是促進根管再治療成功的關(guān)鍵。本研究旨在探討不同功率下高頻電流對根管內(nèi)糞腸球菌的滅菌作用，為進一步臨床應(yīng)用打下一定的研究基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本實驗主要材料有1411改進型小型高頻電刀(上海高科技公司)、高速渦輪牙鉆機(上海醫(yī)療器械股份有限公司，CS160型)、XW-80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)、電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進醫(yī)療器械廠)、Eppendorf微量移液器和適配標(biāo)準(zhǔn)吸嘴(德國艾本德股份公司)、微量進樣器(上海醫(yī)療激光儀器廠)、糞腸球菌ATCC29212(廣東省微生物研究所微生物菌種保藏中心)、營養(yǎng)肉湯和營養(yǎng)瓊脂成品干粉培養(yǎng)基、ROEKO氫氧化鈣藥尖(瑞士康特)、吸潮紙尖(天津達雅鼎醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 方法 選擇因正畸或牙周病原因拔除的成人下頜單根管前磨牙60顆，全部進行X線檢查(確保無隱裂等情況)。用超聲波潔治儀處理干凈牙齒的外表面，用冷水噴霧的高速金剛砂鉆去除牙冠，牙根統(tǒng)一成標(biāo)準(zhǔn)長度15 mm。拔除牙髓，用不銹鋼K銼通暢根管至40號，復(fù)合樹脂封閉根尖孔，浸泡于4℃生理鹽水中保存?zhèn)溆谩⒄婵諆龈傻臉?biāo)準(zhǔn)糞腸球菌菌株復(fù)蘇，移植于斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)。經(jīng)兩次傳代培養(yǎng)后，糞腸球菌開始正常生長。挑取正常生長的糞腸球菌菌落移植于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)備用。將60顆牙隨機分成6組，對照組、氫氧化鈣組、高頻電刀功率5 W組、10 W組、15 W組、20W組，每組10顆牙。所有牙分別放入試管中和其他實驗材料進行121.3℃、1 mPa高溫高壓滅菌30 min。將糞腸球菌菌液放在漩渦混合器上，振蕩均勻，取100μl菌液，用生理鹽水稀釋至1000μl，作為根管內(nèi)接種用菌液。用10μl微量進樣器取4μl菌液滴入每個根管內(nèi)。對照組菌液滴入后，不做任何處理，用無菌紙尖將其吸出，將紙尖放入盛有1 ml生理鹽水的EP管內(nèi)。氫氧化鈣組加入4μl菌液后，在氫氧化鈣藥尖上標(biāo)記好工作長度，然后用鑷子將藥尖送入根管直到根尖，最后用氧化鋅丁香油糊劑暫封。1周后，去除暫封物，取出氫氧化鈣藥尖，滴入生理鹽水4μl后振蕩均勻，用無菌紙尖將其吸出，將紙尖放入盛有1 m l生理鹽水的EP管內(nèi)，振蕩均勻，取EP管內(nèi)混合液做平板計數(shù)。其余四組菌液滴入后，按預(yù)定實驗條件高頻電刀功率分別調(diào)至5W、10 W、15 W、20 W，將電極插入根管內(nèi)，電流每次輸出時間為3 s，間隔5 s，連續(xù)輸出5次進行滅菌處理。處理后取出電極，微量進樣器再次取4μl生理鹽水滴入根管內(nèi)，振蕩后用無菌紙尖將液體吸出后，將紙尖放入盛有1 ml生理鹽水的EP管內(nèi)，振蕩均勻，取EP管內(nèi)混合液做平板計數(shù)。應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，采用單因素方差分析比較對照組與實驗組之間的菌落計數(shù)結(jié)果，進一步兩兩比較采用Tamhane檢驗方法。

2 結(jié)果

表1 六組根管內(nèi)細菌培養(yǎng)后菌落計數(shù)結(jié)果(CPU/ml)

做單因素方差分析，P＜0.01有統(tǒng)計學(xué)差異。方差齊性檢驗，P＜0.01，方差不齊。進一步做兩兩比較采用Tamhane檢驗方法。

2.1 對照組與所有實驗組比較，P＜0.01，所有實驗組菌落計數(shù)結(jié)果與對照組均有差異?？梢哉J為無論是氫氧化鈣還是高頻電流對糞腸球菌均有殺滅作用。

2.2 氫氧化鈣組與不同功率的高頻電流組分別做比較:氫氧化鈣組與5W組比較，P＞0.05，菌落計數(shù)結(jié)果無差異，可以認為氫氧化鈣與5W的高頻電流對糞腸球菌的滅菌效果無差異。氫氧化鈣組與10W組比較，P＜0.01;氫氧化鈣組與15W組、20W組比較，P＜0.01，菌落計數(shù)結(jié)果均有差異，可以認為10W、15W、20W的高頻電流對糞腸球菌的滅菌效果優(yōu)于氫氧化鈣。

2.3 不同功率的高頻電流組之間比較，P＜0.01，所有功率的高頻電流組之間均有差異，可以認為隨著功率的增加，高頻電流對糞腸球菌的滅菌效果也有增加。

3 討論

本實驗選用糞腸球菌作為感染細菌，主要是由于糞腸球菌被認為是感染根管中最難去除的菌種之一。糞腸球菌在難治性根尖周炎根管中最高分離率可達77%，是目前評價各種感染清除措施時最常用的目標(biāo)菌種。有研究顯示糞腸球菌在實驗動物的根管中不需其他細菌的支持單一培養(yǎng)也可存活6個月。有研究在體外培養(yǎng)糞腸球菌時發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌在水中可以存活4個月以上。糞腸球菌本身對頭孢菌素、氯林可霉素有耐藥性。有學(xué)者報道糞腸球菌對青霉素、強力霉素、紅霉素、氯霉素等也有耐藥性。糞腸球菌高效多重的耐藥性可能是根管內(nèi)生物膜的形成使抗菌劑無法發(fā)揮作用以及細菌間耐藥性傳遞引起的。糞腸球菌能抵抗氫氧化鈣，大多數(shù)根管內(nèi)的細菌在pH為9.5的環(huán)境下已無法存活，強堿會破壞細菌的細胞膜，糞腸球菌卻能耐受強堿，在pH為11.5的環(huán)境中也能存活。由于糞腸球菌的這些特性，傳統(tǒng)的消毒方法均只能減少糞腸球菌的數(shù)量，但是無法完全去除。糞腸球菌作為一種頑固性細菌，高頻電刀對其有很好的殺滅作用。高頻電通過干燥、電凝、電灼等熱效應(yīng)使蛋白質(zhì)變性、凝固、壞死直至碳化，從而達到滅菌，清除毒素的作用。因高頻電刀所具有的消毒原理使高頻電刀作為一種物理消毒滅菌的方法，不僅僅對糞腸球菌具有殺滅作用，對其他的細菌毒素也是有作用的，高頻電刀是一種較為理想的根管物理消毒滅菌的方法。

163311 黑龍江省大慶醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校(徐鳳梅袁利);大慶油田總醫(yī)院(徐風(fēng)杰)